喜临门杜鹃品种的组织培养快繁方法及其专用培养基技术

本发明专利技术公开了喜临门杜鹃品种的组织培养快繁方法及其专用培养基，属植物的组织培养及繁殖技术领域。其专用培养基有不定芽诱导培养基：１／４ＭＳ，ＺＴ　３ｍｇ／Ｌ，ＮＡＡ　０．５ｍｇ／Ｌ，糖３０ｇ／Ｌ和琼脂５ｇ／Ｌ；不定芽增殖培养基：１／４ＭＳ，ＺＴ１ｍｇ／Ｌ，ＮＡＡ　０．５ｍｇ／Ｌ，糖３０ｇ／Ｌ和琼脂５ｇ／Ｌ；丛生苗的继代及壮苗培养基：１／４ＭＳ，ＺＴ０．５ｍｇ／Ｌ，ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ，糖３０ｇ／Ｌ和琼脂５ｇ／Ｌ；生根培养基：１／４ＭＳ，ＩＢＡ　２ｍｇ／Ｌ，糖３０ｇ／Ｌ和琼脂５ｇ／Ｌ；ｐＨ均为５．４－５．６。该方法组培快繁的种苗移栽成活率达９０％以上，繁殖量可达１０万株／年以上。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及植物的组织培养及繁殖
，具体涉及"喜临门"杜鹃 品种的组织培养和快速繁殖方法。
技术介绍
"喜临门杜鹃"是该杜鹃品种的品种名称。"喜临门杜鹃"品种属杜鹃花科，杜鹃花属的常绿小灌木，由锦绣杜鹃(R.pulchrum sweet)芽变培育而成。 该品种于2007年9月7日获得中国植物新品种权，其品种权号20070023， 品种名称喜临门杜鹃，品种权人云南绿大地生物科技股份有限公司，该公 司也是本专利申请的申请人。"喜临门杜鹃"品种因其具有外植体均带有糙伏毛等生物特征，造成对 其组织培养时进瓶建立无菌体系难度大，无菌体系建立后，分生苗的诱导时间 长、增殖率低；分化的幼苗细弱、生根难度较大、移栽过渡成活率低等问题， 用现有技术的常用组织培养基及其培养方法对其进行组培快繁不能解决上述 技术难点，因而本申请人专门研究出适宜"喜临门"杜鹃新品种的组织培养 专用培养基及其组培快繁方法。"喜临门杜鹃"高60-80cm，幼枝粗壮、分枝多，叶革质、叶色深绿，伞 形花序顶生，有花l-3朵，花冠红色、阔漏斗状、花瓣厚实、花期1-4月。"喜 临门"杜鹃生长势强、抗性好，花色独特、是市场前景十分看好的盆栽及露地 园林花卉。由于其种源来自于芽变枝条，进行扦插缺乏采穗材料，且扦插繁殖 受季节及生根成活率的影响，扩繁速度缓慢，难以进行规模化生产和满足大面 积推广应用的需求；靠种子繁殖的后代分离严重，不能再现"喜临门"杜鹃的 品种特性，因此，对这类优良品种研究出组培专用培养基及其组培快繁方法具目前关于"喜临门杜鹃"品种的组培研究还未见报道。针对该品种特性， 通过有针对性的反复试验和研究解决了上述技术瓶颈，现针对其中的技术诀 窍，申请本专利技术专利。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是克服了现有技术中对"喜临门杜鹃"品种在组 织培养快繁中进瓶建立无菌体系难度大，无菌体系建立后，分生苗的诱导时间 长、增殖率低；分化的幼苗细弱、生根难度较大、移栽过渡成活率低等技术问 题，提供一种既能解决上述技术难点，又能降低生产成本，实现规模化优质组 培苗生产的适宜"喜临门杜鹃"品种的组织培养快繁方法及其专用培养基。为解决上述技术问题，本专利技术有以下技术方案一、喜临门杜鹃品种的专用培养基，由不定芽的诱导培养基，不定芽的 增殖培养基，丛生苗的继代及壮苗培养基和生根培养基组成-其中，所述的不定芽的诱导培养基的配方为1/4MS， ZT3mg/L， NM 0.5mg/L，糖30g/L和琼脂5g/L， PH为5.4-5.6;所述的不定芽的增殖培养基的配方为1/4MS， ZTlmg/L， NAA 0.5mg/L， 糖30g/L和琼脂5g/L， PH为5.4-5.6;所述的丛生苗的继代及壮苗培养基的配方为1/4MS， ZT0.5mg/L， NAAO. 5mg/L，糖30g/L和琼脂5g/L， PH为5. 4-5. 6;所述的生根培养基的配方为1/4MS， IBA2mg/L，糖30g/L和琼脂5g/L， PH为5.4-5.6。一、喜临门杜鹃品种的组织培养快繁方法，按以下步骤进行(1)外植体的选择用透明塑料袋对刚开过花的喜临门杜鹃品种的枝条进行套袋，采取3-5cm新抽嫩枝作为外植体；(2) 外植体的灭菌将上述外植体先用75%的酒精处理10-30min，再0. 1% HgCl2浸泡茎尖5min，浸泡茎段8-10min，再用无菌水冲洗外植体4 - 5次；(3) 不定芽的诱导在无菌工作条件下，将消毒灭菌后的茎尖段和茎段， 接种于上述专用培养基中的不定芽的诱导培养基中，培养条件为光照时间 12h/d，光照强度1500—20001x，培养温度24士2。C;(4) 不定芽的增殖将诱导出的不定芽接种于上述专用培养基中的不定 芽的增殖培养基中，培养条件同上；(5) 丛生苗的继代及壮苗，将增殖获得的丛生苗接种于上述专用培养基 中的丛生苗的继代及壮苗培养基中进行继代繁殖，培养条件同上；(6) 壮苗生根及继续扩繁将上述继代增殖中高为2.5cm以上的健壮苗 切成单株接种于上述专用培养基中的生根培养基中，将其余组织切割成2-4 团接种于上述专用培养基中的不定芽的增殖培养基中，培养条件同上；(7) 移栽过渡将步骤(6)中根长l-2cm的组培瓶苗移到温室中，常温、 自然光下逐渐开瓶炼苗2-3天后出瓶移栽；取出植株健壮、根系发达的小苗，洗去沾在根部的培养基，栽植到下述过渡育苗基质中，过渡育苗基质为泥炭 土珍珠岩=2: 1，用0. 1%的多菌灵溶液作为定根水浇透，覆盖塑料薄膜，并 盖上遮阴网。 一周内保持湿度在90%以上和20-25t:的温度；1周后逐渐打开 薄膜，增加光照和通风透气；2周后，进行常规管理。上述喜临门杜鹃品种的组织培养快繁方法步骤(1)外植体的选择中所述 的用透明塑料袋对刚开过花的喜临门杜鹃品种的枝条进行套袋是在1月进行 套袋，在同一年的3月剪取3-5cm新抽嫩枝作为外植体。上述喜临门杜鹃品种的组织培养快繁方法所述的步骤(2)外植体的灭菌是将上述外植体先用75%的酒精处理30s,再用0. 1。/。HgCl2浸泡茎尖5min，浸泡 茎段8min，再用无菌水冲洗外植体4-5次。在上述喜临门杜鹃品种的组织培养快繁方法中将步骤(4)不定芽的增殖 中获得的丛生幼苗切割为3-5苗的小丛苗团，再接种于上述不定芽的增殖培养 基中继代繁殖，每瓶放置9-ll团；完成培养周期后，每团苗可增长3-5倍， 且丛苗的高度也会增长；如此通过反复继代繁殖，可获得大量的丛生苗。在研究喜临门杜鹃品种的组织培养专用培养基的配方以及组培与快繁方 法的过程中，主要解决了下列技术难题(1) 通过优选开花多、花朵大、花色艳的喜临门杜鹃品种枝条，预先用 透明塑料袋对其套袋，保持进瓶外植体的洁净，解决了由于该品种枝条带有糙 伏毛，建立无菌体系难度大的问题，且优中选优，起到复壮保持本品种优良性 状的效果。本专利技术不用锡箔纸或普通纸套袋，是因为用锡箔纸或普通纸套袋易 造成枝条黄化，而用透明塑料袋套袋的光透性好，既有利于枝条健壮又保持了 进瓶外植体的洁净。(2) 通过实验发现恰当的ZT浓度(3mg/L)，可提高外植体分化丛生苗的 诱导率；而低浓度的ZT (0.5-lmg/L)，有利于丛生苗的增殖和壮苗，且无变 异苗产生。(3) ZT的售价十分昂贵，寻找出最适宜的ZT浓度后，不仅显著提高了分化苗的增长率，并降低了生产成本。(4) 筛选出最适宜分生壮苗生根的激素及其浓度是2 mg/L IBA。(5) 本专利技术将基本培养基MS改良为1/4MS，调整ra为5. 4-5. 6，特别 适宜"喜临门杜鹃"品种的良好的生长效果从而获得优质组培苗，并且进一步 降低了生产成本。本专利技术的有益效果是-(1) 提供的适宜"喜临门杜鹃"品种的离体组培快繁成套方法及其专用 培养基，解决了 "喜临门杜鹃"品种进瓶建立无菌体系难度大，无菌体系建立后，分生苗的诱导时间长、增殖率低；分化的幼苗细弱、生根难度较大、移栽 过渡成活率低等技术问题，最终使该品种的组培快繁的种苗移栽成活率达90% 以上。(2) 针对"喜临门杜鹃"品种的嫩枝分化特点，通过用透明塑料袋套袋 获得相对洁净的外植体，结合恰当的灭菌技术，使进瓶成功率达到65%以上， 有效进种率可达到85%-90%，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种喜临门杜鹃品种的专用培养基，由不定芽的诱导培养基，不定芽的增殖培养基，丛生苗的继代及壮苗培养基和生根培养基组成：其中，所述的不定芽的诱导培养基的配方为：１／４ＭＳ，ＺＴ　３ｍｇ／Ｌ，ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ，糖３０ｇ／Ｌ和琼脂５ｇ／Ｌ，ＰＨ为５．４－５．６；　所述的不定芽的增殖培养基的配方为：１／４ＭＳ，ＺＴ１ｍｇ／Ｌ，ＮＡＡ　０．５ｍｇ／Ｌ，糖３０ｇ／Ｌ和琼脂５ｇ／Ｌ，ＰＨ为５．４－５．６；　所述的丛生苗的继代及壮苗培养基的配方为：１／４ＭＳ，ＺＴ０．５ｍｇ／Ｌ ，ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ，糖３０ｇ／Ｌ和琼脂５ｇ／Ｌ，ＰＨ为５．４－５．６；　所述的生根培养基的配方为：１／４ＭＳ，ＩＢＡ　２ｍｇ／Ｌ，糖３０ｇ／Ｌ和琼脂５ｇ／Ｌ，ＰＨ为５．４－５．６。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：何学葵，陈德生，朱光洁，胡磊，童亚丽，付慧慧，宣艳辉，
申请(专利权)人：云南绿大地生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：53[]