本发明专利技术涉及本发明专利技术属生物技术领域，涉及一种用于区分非酒精脂肪肝与正常人的血清miRNA标志物组合及应用。本发明专利技术的用于检测非酒精性脂肪肝的血清miRNA标志物组合包括下列四种has-miRNA：hsa-miR-122-5p,hsa-miR-1290,hsa-miR-27b-3pandhsa-miR-192-5p。本发明专利技术能够实现非酒精性脂肪肝的早期发现以及迅速的无创性检测。
【技术实现步骤摘要】
用于检测非酒精性脂肪肝的血清miRNA标志物组合及应用
本专利技术涉及本专利技术属生物
，涉及一种用于区分非酒精脂肪肝与正常人的 血清miRNA标志物组合及应用。
技术介绍
非酒精性脂肪肝（Nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD)是指除外过量饮 酒和其他明确的损肝因素所致的，以弥漫性肝细胞大泡性脂肪变为主要特征的临床病理综 合征。大量流行病学研究表明，NAFLD己成为一种呈现全球化趋势的常见慢性肝病。随着 肥胖及其相关代谢紊乱的增多，近10余年来我国NAFLD患病率增长迅速。肝组织学检查 仍然是诊断NAFLD的金标准，但肝穿刺的副作用以及局限性往往制约了这项诊断技术的开 展。因此，寻找新的诊断标志物、新的诊断模型一直是研究热点。新的非创伤性手段主要集 中在两个方面，一是寻找新的血清标志物，二是寻找新的影像学诊断依据。近二十年来，如 Steatotest，包含了 12个变量因素如α 2-巨球蛋白，触珠蛋白和载脂蛋白Al等，2006年 Bedogni等发布的脂肪肝指数（Fatty Liver Index, FLI)，以及近年的脂肪肝分数（NAFLD Liver Fat Score)等包含了胰岛素抵抗，天冬氨酸转氨酶（AST)和AST/丙氨酸转氨酶 (ALT)等指标。这些模型的共同点是现有已知可能与NAFLD有关指标的组合。还有在影像 学方面主要是Firbroscan等依靠肝脏硬度而开发的仪器。这些模型和仪器在NAFLD的应用 方面发挥了较好的价值。但有各有其不足，如特异性不强、敏感性不够等均制约了其应用。 miRNA(microRNA)是一类内源性非编码单链小分子RNA，长度为18?24个核苷 酸。miRNA普遍存在于人类的体液中，性质稳定，可以定量检测，且存在显著的疾病特异性。 近年的研究表明，血液、唾液、尿液、乳汁及脑脊液等体液miRNA检测可应用于妊娠等生理 状态的判断以及肿瘤、感染、代谢及阿尔海默茨病等疾病的诊断和预后判断。体液特异性 miRNA检测的临床意义及应用前景已引起高度关注，miRNA作为一类非编码调节性的小分 子RNA有可能取代传统的特异蛋白为代表的生物标志物。体液miRNA含量丰富且性质稳定， 具备成为优异生物标志物的潜质，并且拥有以蛋白质为代表的传统生物标志物不具备的特 性，无需抗体制备且易于精确定量，可能克服抗原抗体类生物标志物的制备瓶颈。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是，提供一种能够用于非酒精性脂肪肝的早期发现以 及进行快速的无创性检测的血清miRNA标志物组合及应用。 本专利技术包括以下技术方案： 本专利技术的用于检测非酒精性脂肪肝的血清miRNA标志物组合包括下列四种 has-miRNA :hsa-miR-122_5p，hsa-miR-1290,hsa-miR-27b_3p and hsa-miR-192_5p〇 本专利技术的用于检测非酒精性脂肪肝的miRNA探针组合，包括以下序列：SEQ ID NO. 1、SEQ ID NO. 2、SEQ ID NO. 3、SEQ ID NO. 4。 上述用于检测非酒精性脂肪肝的miRNA探针组合在制备检测非酒精性脂肪肝的 试剂中的应用。 本专利技术的用于检测非酒精性脂肪肝的试剂盒，包括上述用于检测非酒精性脂肪肝 的miRNA探针组合，还包括Taq酶、氯化镁和PCR缓冲液。 本专利技术的权利要求用于检测非酒精性脂肪肝的miRNA引物组合是基于下列核酸 序列，包括以下序列：SEQ ID NO. 1、SEQ ID NO. 2、SEQ ID NO. 3、SEQ ID NO. 4。 本专利技术权利要求用于检测非酒精性脂肪肝的试剂盒，包括上述用于检测非酒精性 脂肪肝的miRNA引物组合，还包括Taq酶、氯化镁和PCR缓冲液。 本专利技术能够实现非酒精性脂肪肝的早期发现以及迅速的无创性检测。 【附图说明】 图1是本专利技术实施例的两组mappable reads数据及长度分析图； 图2训练集NAFLD六种miRNA与正常对照组的比较； 图3六种miRNA在训练集ROC曲线下面积； 图4miRNA组合在训练集和验证集ROC曲线下面积； 图5miRNA组合在不同NAFLD活动指数中的应用； 图6miRNA组合与ALT的ROC曲线下面积； 图7miRNA组合与单一 miRNA的ROC曲线下面积。 【具体实施方式】 研究对象 对照组为健康志愿者；实验组为NAFLD患者，筛选阶段NAFLD20名，正常对照20 名；训练集NAFLD152名，正常对照90名；验证集NAFLD103名，正常对照80名，NAFLD患者来 自门诊及住院患者。所有患者经过门诊B超筛选，参考根据日本学者研究，具备以下3项腹 部超声异常发现中的任意两项或两项以上者可诊断为脂肪肝：（1)肝脏近场回声弥漫性增 强（明亮肝），回声强度高于肾脏或脾脏；（2)肝内管道结构显示不清；（3)肝脏远场回声逐 渐衰减。需高度怀疑NAFLD可能。排除标准1.排除大量饮酒（男性每日折含乙醇量>60g 或每周乙醇摄人量>420g，女性每日乙醇摄人量MOg或每周乙醇摄人量>280g)对于NAFLD 的诊断至关重要。2.除外存在可导致脂肪肝的全身性性疾病以及正在服用或近期内曾经服 用可引起血清ALT和GGT升高的药物（包括中药）的患者。3.需排除乙型肝炎、丙型肝炎、 自身免疫性肝病、肝豆状核变性、a-Ι抗胰蛋白酶缺乏症等慢性肝病，以及肝脏恶性肿瘤、感 染和胆道疾病。在B超拟似NAFLD后，根据病人自愿原则进行肝穿刺，持穿刺枪，用16G肝 穿针吸取，要求肝组织标本至少Icm以上，包含4个及4个以上可供评价汇管区。标本立即 置于10%甲醛固定，常规石蜡包埋，连续切片，行苏木精一伊红染色。肝活组织检查病理组 织学诊断和临床治疗试验的疗效评估采纳美国国立卫生研究院NASH临床研究网病理工作 组2005年所定指南，无论是常规病理报告还是科学研究进行NAFLD活动度积分（a NAFLD activity score,NAS)和纤维化积分。该组织学评分系统包括14项病理改变，其中4项指 标进行了半定量评估：肝脂肪变（〇?3)、小叶内炎症（0?2)、肝细胞气球样变（0?2)、 肝纤维化（〇?4)，其余指标以有或无（1/0) 表示。根据前3项计算NAS，NAS彡5者可 明确NASH的诊断，NAS〈3可排除NASH，两者之间者为NASH可能。正常对照组均为我院健康 体检中心无器质性疾病以及精神性疾病人群。患者和健康人群基本情况见表LNAFLD患者 NAS评分见表2。 表1三阶段NAFLD以及健康人群的一般特征及临床特点本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于检测非酒精性脂肪肝的血清miRNA标志物组合，其特征是：包括下列四种has‑miRNA：hsa‑miR‑122‑5p,hsa‑miR‑1290,hsa‑miR‑27b‑3p and hsa‑miR‑192‑5p。
【技术特征摘要】
1. 一种用于检测非酒精性脂肪肝的血清miRNA标志物组合，其特征是：包括下列四种 has-miRNA :hsa-miR-122_5p，hsa-miR-1290,hsa-miR-27b_3p and hsa-miR-192_5p〇2. -种用于检测非酒精性脂肪肝的miRNA探针组合，其特征是：包括以下序列：SEQ ID N0.1、SEQ ID N0.2、SEQ ID N0.3、SEQ ID N0.4。3. -种用于检测非酒精性脂...
【专利技术属性】
技术研发人员：谭友文，潘腾莉，
申请(专利权)人：镇江市第三人民医院，
类型：发明
国别省市：江苏;32
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。