食用百合的高效脱毒新工艺制造技术

本发明专利技术涉及一种食用百合的高效脱毒新工艺，尤其是一种针对宜兴百合，具有极高脱毒效率的脱毒工艺。本发明专利技术所述的食用百合的高效脱毒新工艺，是取食用百合鳞茎作为外植体，经消毒后接种培养，其中，先将食用百合种球经过湿沙催芽培养后进行消毒，然后，剥去百合种球外层鳞片，直至不带叶原基的生长点，剖取０．１～０．２ｍｍ大小的百合茎尖，接种在启动培养基ＭＳ＋６ＢＡ　　０．５～２．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．１～０．５ｍｇ／Ｌ上培养，暗培养３～４天后转光培养，培养温度为２４＋２℃，光照强度２０００～３０００Ｌｘ，光照时间１２～１４小时／天。本发明专利技术突破了传统的百合脱毒工艺，选取仅０．１～０．２ｍｍ大小的百合茎尖培养，成活率可达５８．９％，脱毒成功率高，能实现完全脱毒的理想品质。

【技术实现步骤摘要】
食用百合的高效脱毒新工艺
本专利技术涉及一种食用百合的高效脱毒新工艺，尤其是一种针对宜 兴百合，具有极高脱毒效率的脱毒工艺。
技术介绍
百合病毒病分布广，危害大，是百合种球和鲜切花生产中的主要 病害之一，受到全世界的重视。近年来，随着我国百合引种数量和种 植面积的迅速增加，以及不规范的种球自繁自用，病毒病开始在我国各百合种植区流行， 一般发病率在40 50%， 二代种球的带毒率在90% 以上。百合感染病毒后，终身带毒，长期受害，破坏植株正常的生理 机能，主要表现为生长势下降，黄化、花叶等病毒症状；通过蚜虫等 昆虫介体传播，扩大了病毒的危害范围；由于病毒危害，使食用百合 产量下降，品质变劣，观赏百合的商品花降级；病毒尚难以用化学药 剂或生物制剂进行直接有效防治。因此，防止百合感染病毒病的应对 策略是采用脱毒培养技术获得脱毒苗，隔离繁殖、生产健康种球，并 在各个生产环节进行严格的病毒检测。百合品种繁多，根据用途可分为药用百合、食用百合和观赏百合。 国内外对百合组培脱毒进行的系列研究表明，获得脱毒苗的方法主要 有茎尖培养、珠芽培养、化学处理和热处理等。观赏型百合的脱毒方法，公开号CN1903015介绍了一种化学处 理手段，以三氮唑核苷进行脱毒；而在植物病理学报35 (6) (ZK): 133-134 (2005)中也介绍了一种茎尖培养脱毒法。但是观赏百合与食用百合的表征差别迥异，脱毒方法也因品种而异。食用百合作为保健药用特种蔬菜深受消费者的喜爱，随着人们消 费水平的提高，生产和消费量逐年递增。宜兴百合、兰州百合、龙牙 百合是为三大食用百合，其中又以宜兴百合种植面积最大、产量最高， 其具有味苦而甘的特殊风味，鳞茎富含淀粉、蛋白质、脂肪、矿质等 营养，并有补中益气、理脾健胃、宁心安神等多种药用功能，被称为 补品药百合，历史上就享有太湖之参的美称，常与银耳、绿豆、苡 米、莲心等制作清热甜品。常规百合繁殖方法为小鳞茎繁殖，繁殖系 数低，易感染病毒，影响其经济价值。安徽霍山县农民在宜兴百合种 植过程中由于病毒感染产量下降，栽培面积达几万亩的种球需要更换 为脱毒的优良种球。江苏农业学报，2001， 17 (1): 49 51公开了一种宜兴百合脱毒技术，主要是采用茎尖培养的方法，将宜兴百合取茎尖，消毒后接种 到培养基上诱导，后转入增殖培养基上培养。其结果表明，选取的茎尖大小对百合脱毒的效果有显著影响，0.8 2.0mm大小的茎尖，成活 率虽高，但是无法起到脱除病毒的作用；而只有在0.8mm大小以下 的茎尖，才可能获得无病毒母株，其中，尤以0.3~0.5 mm大小的茎 尖脱毒效果达到40%，其脱毒成功率仅为5~6%。这是因为病毒在患病的植株上分布不均匀，在较老的器官和组织 内病毒含量较高，在幼嫩的或老化的组织和器官中病毒的含量较低。 病毒一般通过维管束蔓延扩散，茎尖分生组织没有维管束，病毒只能 通过胞间连丝传递，赶不上细胞分裂和生长的速度，所以0.2 0.3mm 大小的生长点几乎不含或很少含病毒。但上述脱毒工艺明确指出，小于0.3 mm的茎尖全部不能培养成 活，没有成活率，百合的脱毒便显得没有意义。换句话说，茎尖越小，脱毒率越高，但同时成活率也越低，并认为，理论上的高成活、高脱 毒的理想组培可以说是两者难能兼得。但是，对百合的组培脱毒必须 在高脱毒率的前提下，获得高成活率，才能进--步研究提高组培苗的 脱毒率。现有脱毒工艺，无论是对观赏百合，还是对食用百合，正是 考虑到这种成活率和脱毒率的反比关系，所选取的茎尖一般定在0.3mm左右。但脱毒率依然不甚理想，离100%的理想脱毒率相去甚远。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种食用百合的高效脱毒 新工艺，在微茎尖高无毒率的同时又能使茎尖成活率达到较高水平。本专利技术采取的技术方案是将食用百合种球经过湿沙催芽培养后 进行消毒，然后剥去百合种球外层鳞片，直至不带叶原基的生长点， 剖取0.1 0.2 mm大小的百合茎尖，接种在启动培养基MS + 6BA 0.5~2.5 mg/L+NAA 0.1-0.5 mg/L上培养，暗培养3~4天后转光培养， 光培养温度为24士2。C，光照强度2000 3000 Lx，光照时间12~14小 时/天。所得脱毒百合组培苗的成活率为58.9%，病毒检测无病毒率(脱 毒率)为100%,使成活植株的脱毒率大大提高，脱毒成功率根据下 式计算脱毒的成功率-茎尖成活率x病毒检测无病毒率xlOOy。 由此得出脱毒成功率为58.9%。将植物茎尖无毒生长点离体培养成植株是去除植物中病毒、使植 物复壮的重要方法。本专利技术突破了传统食用百合脱毒工艺中对有效脱 毒茎尖大小的定式，将茎尖的大小控制在只有0.1 0.2mm，而且，针 对以往脱毒技术认为茎尖大小在0.2 mm以下则成活率极低甚至于完 全不能成活的理念，本专利技术采用不同的培养基进行诱导和增殖，通过暗培养、光培养的组织培养技术手段，繁育成生活力强的健康苗，在短期内能获得大量品质优良的脱毒种苗，脱毒的成功率高达58.9%， 成活茎尖的脱毒率更可以达到100%，具有迅速去除病毒、更新品种， 加快了百合的快速繁殖速度，提高了百合的产量和质量的诸多优点。 所述的湿沙催芽培养为将食用百合种球分成单个小球，在 28 3(TC湿沙催芽培养7 10天，该处理温度可使百合病毒受到抑制或 钝化。生长点快速伸长既方便了显微操作，又可拉大病毒到达茎尖的 距离。所述的消毒包括下述步骤(1) 将沙培后百合种球剥去外层鳞片，用水洗净沙砾；(2) 将根切除，剥去外层鳞片，用水冲洗15 20分钟；(3) 用去离子水清洗5 10分钟；(4) 进行二次漂水消毒。 所述的二次漂水消毒是用25%漂水消毒20 30分钟，冲洗；再用25%漂水消毒2 3分钟，冲洗。所述的茎尖是指在解剖镜下一层层剥去百合种球外层鳞片，直至 不带叶原基的生长点，剖取0.1 0.2 mm大小的百合微茎尖。所述的培养条件为24士2'C暗培养培养3 4天后转光培养。所述的光培养温度为24士2。C，光照强度2000 3000 Lx，光照时 间12 14小时/天。采用暗培养后又转光培养有利于微茎尖的成活、启动、分裂、增 殖，提高成活率和脱毒的效果。本专利技术的有益效果为突破了传统的百合脱毒工艺，选取仅0.1 0.2 mm大小的百合茎尖培养，成活率可达58.9%，脱毒成功率高， 能实现完全脱毒的理想品质。具体实施方式一种食用百合的高效脱毒新工艺，依序包括下述步骤第一步，取食用百合种球经湿沙催芽培养7~10天，温度28~30°C，取出。第二步，剥去食用百合种球外层鳞片，用自来水冲20分钟洗净 沙砾；将根切除，剥去外层鳞片，进行消毒，消毒包括下述步骤(1) 将湿沙催芽培养后的百合种球剥去外层鳞片，用水洗净沙砾；(2) 将根切除，剥去外层鳞片，用水冲洗15 20分钟；(3) 用去离子水清洗5分钟；(4) 用25%漂水消毒20 30分钟，冲洗；再用25%漂水消毒2 3分 钟，冲洗。第三步，在解剖镜下一层层剥去外层鳞片，直至不带叶原基的生 长点，剖取0.1 0.2mm大小的茎尖。第四步，接种在启动培养基MS + 6BA 1.0mg/L+NAA0.1 mg/L 上诱导增殖，暗培养3 4天后转光培养本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种食用百合的高效脱毒新工艺，取食用百合鳞茎作为外植体，经消毒后接种培养，其特征在于：将食用百合种球经过湿沙催芽培养后进行消毒，然后，剥去百合种球外层鳞片，直至不带叶原基的生长点，剖取０．１～０．２ｍｍ大小的百合茎尖，接种在启动培养基ＭＳ＋６ＢＡ　　０．５～２．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　　０．１～０．５ｍｇ／Ｌ上培养，暗培养３～４天后转光培养，培养温度为２４±２℃，光照强度２０００～３０００Ｌｘ，光照时间１２～１４小时／天。

【技术特征摘要】
1、一种食用百合的高效脱毒新工艺，取食用百合鳞茎作为外植体，经消毒后接种培养，其特征在于将食用百合种球经过湿沙催芽培养后进行消毒，然后，剥去百合种球外层鳞片，直至不带叶原基的生长点，剖取0.1～0.2mm大小的百合茎尖，接种在启动培养基MS+6BA0.5～2.5mg/L+NAA0.1～0.5mg/L上培养，暗培养3～4天后转光培养，培养温度为24±2℃，光照强度2000～3000Lx，光照时间12～14小时/天。2、 根据权利要求1所述的食用百合的高效脱毒新工艺，其特征在于 所述的湿沙催芽培养为将食用百合种球分成单个小球，在28 3(TC湿 沙催芽培养7 10天。3、 根据权利要求1或2所述的食用百合的高效脱毒新工艺，其特征 在于所述的消毒包括下述步骤(1) 将湿沙催芽培养后的...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋学孟，陈丽，张承妹，章振华，陈明亮，
申请(专利权)人：上海光兆植物速生技术有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]