一种筛选耐盐碱杨树突变体的组织培养方法，为将胚性细胞经低盐－高盐－低盐条件继代筛选的组织培养方法，将杨树胚性细胞在含盐培养基中继代培养，包括盐性分化培养、继代培养和生根培养，其中，含盐量（按质量体积比计）为２～１０‰，含盐量≤６‰定义为低盐条件，反之为高盐条件，继代培养包括高盐继代、低盐继代。本发明专利技术的优点是：便于操作和控制，且成本低，周期短，获得耐盐碱性良好的杨树突变体。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种，尤其是一种将胚性细胞经低盐-高盐-低盐条件继代筛选从而得到耐盐碱突变体的组织培养方法。
技术介绍
杨树是世界上分布最广、适应性最强的树种，具有速生、优质、适应性强等特点。但随着地球人口的不断增长，对资源的需求也日益增大，由于一些不合理开垦，致使土壤逐渐盐碱化、沙化、贫瘠化。利用组织培养方法筛选耐盐突变体研究技术具有便于操作控制，成本低，周期短等优点，因此该方法已受到国内外学者的广泛重视。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种获得耐盐碱杨树突变体的方法。 为达上述目的，本专利技术提供一种，将杨树胚性细胞在含盐培养基中继代培养，包括盐性分化培养、继代培养和生根培养，其中，含盐量(按质量体积比计)为2～10‰，含盐量≤6‰定义为低盐条件，反之为高盐条件，继代培养包括高盐继代、低盐继代。 所述的盐性分化培养是指胚性细胞置于含NaCl 2～5‰的Y-2培养基上，在温度25℃±2℃，光照时间为每天14h的条件下培养25～45天，使其充分分化。 所述的Y-2培养基为MS+6-BA 0-0.4mg/L+KT 0.05-0.4mg/L+IAA0.05-0.2mg/L+蔗糖20-30g/L+琼脂4-8g/L。 所述的高盐继代是将盐性分化好的幼芽转入含高盐的Y-2培养基上继代2～3次，周期为14～21天。 所述的低盐继代是将高盐继代好的幼芽转入低盐培养基M4上继代2～3次，周期为20～40天。 所述M4培养基为MS+6-BA 0.05-0.3mg/L+蔗糖20-30g/L+琼脂3-8g/L。 所述的生根培养是将低盐继代好的幼芽转入含NaCl 2～6‰、pH值8.0～9.5的M5培养基上生根，培养天数为20～50天。 所述的M5培养基为1/2MS+IBA 0.1-1.0mg/L+蔗糖20-30g/L+琼脂3-8g/L。 本专利技术的优点是 便于操作和控制，且成本低，周期短，获得耐盐碱性良好的杨树突变体。 具体实施例方式 一种，将欧美杨(黑杨派)胚性细胞在含盐培养基中继代培养，包括盐性分化培养、继代培养和生根培养，其中，含盐量(按质量体积比计)为2～10‰，含盐量≤6‰定义为低盐条件，反之为高盐条件，继代培养包括高盐继代、低盐继代。 第一步将胚性细胞置于含NaCl 3‰的Y-2培养基上盐性分化培养，温度25℃±2℃，光照时间为每天14h的条件下培养30天，使其充分分化。 所述的Y-2培养基为MS+6-BA 0.2mg/L+KT 0.2mg/L+IAA0.05mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5g/L。 第二步将盐性分化好的幼芽转入含NaCl 7‰的Y-2培养基上高盐继代，继代2次，周期为21天。 第三步将高盐继代好的幼芽转入含NaCl 4‰，pH值为8.0的低盐培养基M4上低盐继代，继代2次，周期为30天。 所述M4培养基为MS+6-BA 0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂3.5g/L。 第四步将低盐继代好的幼芽转入含NaCl 4‰、pH值为8.0的M5培养基上生根培养，培养天数为35天。 所述的M5培养基为1/2MS+IBA 0.4mg/L+蔗糖20/L+琼脂3.5g/L。权利要求1、一种，将杨树胚性细胞在含盐培养基中继代培养，包括盐性分化培养、继代培养和生根培养，其中，含盐量(按质量体积比计)为2～10‰，含盐量≤6‰定义为低盐条件，反之为高盐条件，继代培养包括高盐继代、低盐继代。2、根据权利要求1所述的，其特征在于所述的盐性分化培养是指胚性细胞置于含NaCl 2～5‰的Y-2培养基上，在温度25℃±2℃，光照时间为每天14h的条件下培养25～45天，使其充分分化。3、根据权利要求2所述的，其特征在于，所述的Y-2培养基为MS+6-BA 0-0.4mg/L+KT 0.05-0.4mg/L+IAA 0.05-0.2mg/L+蔗糖20-30g/L+琼脂4-8g/L。4、根据权利要求1或2所述的，其特征在于所述的高盐继代是将盐性分化好的幼芽转入含高盐的Y-2培养基上继代2～3次，周期为14～21天。5、根据权利要求1或2所述的，其特征在于所述的低盐继代是将高盐继代好的幼芽转入低盐培养基M4上继代2～3次，周期为20～40天。6、根据权利要求5所述的，其特征在于，所述M4培养基为MS+6-BA 0.05-0.3mg/L+蔗糖20-30g/L+琼脂3-8g/L。7、根据权利要求1或2所述的，其特征在于所述的生根培养是将低盐继代好的幼芽转入含NaCl2～6‰、pH值8.0～9.5的M5培养基上生根，培养天数为20～50天。8、根据权利要求7所述的，其特征在于，所述的M5培养基为1/2MS+IBA 0.1-1.0mg/L+蔗糖20-30g/L+琼脂3-8g/L。全文摘要一种，为将胚性细胞经低盐—高盐—低盐条件继代筛选的组织培养方法，将杨树胚性细胞在含盐培养基中继代培养，包括盐性分化培养、继代培养和生根培养，其中，含盐量(按质量体积比计)为2～10‰，含盐量≤6‰定义为低盐条件，反之为高盐条件，继代培养包括高盐继代、低盐继代。本专利技术的优点是便于操作和控制，且成本低，周期短，获得耐盐碱性良好的杨树突变体。文档编号A01H3/00GK1961647SQ20061011868公开日2007年5月16日 申请日期2006年11月23日 优先权日2006年11月23日专利技术者苏敏, 宋学孟, 董举文, 张艳, 庞瑞华, 许雄山, 章振华, 王凌健, 张承妹 申请人:上海光兆植物速生技术有限公司本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种筛选耐盐碱杨树突变体的组织培养方法，将杨树胚性细胞在含盐培养基中继代培养，包括盐性分化培养、继代培养和生根培养，其中，含盐量（按质量体积比计）为２～１０‰，含盐量≤６‰定义为低盐条件，反之为高盐条件，继代培养包括高盐继代、低盐继代。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：苏敏，宋学孟，董举文，张艳，庞瑞华，许雄山，章振华，王凌健，张承妹，
申请(专利权)人：上海光兆植物速生技术有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]
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