龟甲胶多肽的制备方法和制药新用途技术

本发明专利技术公开了一种龟甲胶多肽的制备方法，包括如下步骤：（1）取龟甲胶，加水煮沸溶解，得龟胶液；（2）调节龟胶液pH至6.9～9.0，在48～52℃的条件下，加入广西酶至浓度为0.3～3.0g/L，恒温反应0.5～4h；（3）调节溶液pH至8.0～9.0，在53～57℃的条件下，加入碱性蛋白酶至浓度为0.3～3.0g/L，恒温反应0.5～4h；（4）调节溶液pH至6.0～9.0，在48℃～52℃的条件下，加入风味酶，恒温反应0.5～4h；（5）升温使酶失活；（6）抽滤，得滤液，浓缩，干燥，即得。本发明专利技术还公开了龟甲胶多肽在制备抗肿瘤药品中的用途。本发明专利技术龟甲胶多肽可以治疗肿瘤，实际应用价值强。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及制备龟甲胶多肽的方法，以及龟甲胶多肽的新用途。
技术介绍
动物胶原类物质是动物的基本组成成分，是动物及人体组织结构的基础，如，空腔 器官、血管、骨骼、脏器等，其分子结构是进化中最保守的，因而在人类应用中是最不易引起 过敏反应的一类物质，在我国中医药中被广泛应用，如取自驴皮的阿胶、龟甲动物的龟甲胶 等，均广泛用于我国中医药散结化瘀、创伤修复、补血养颜等方面。 龟甲胶的主要成分是蛋白质、骨胶原、脂肪、钙、磷、肽类和多种酶以及多种人体必 需微量元素。龟甲胶水溶液中含有多肽、氨基酸、微量元素等成分，有抗凝血、增加冠脉含 量、提高耐缺氧功能、促进免疫等作用，可以广泛用于营养食品和药品。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一种龟甲胶的酶解方法，以及该方法制备得到的龟甲胶多肽 及其制备抗肿瘤药物的用途。 本专利技术酶解龟甲胶的方法，包括如下步骤： (1)取龟甲胶，加水煮沸溶解，得龟胶液； (2)调节龟胶液pH至6. 9?9.0,在48?52°C的条件下，加入广西酶至浓度为 0· 3?3. Og/L，恒温反应0· 5?4h ; (3)再调节溶液pH至8. 0?9. 0,在53?57°C的条件下，加入碱性蛋白酶至浓度 为0· 3?3. Og/L，恒温反应(λ 5?4h ; (4)然后再调节溶液pH至6.0?9.0,在48°C?52°C的条件下，加入风味酶至浓 度为0· 3?3. Og/L，恒温反应0· 5?4h ; (5)升温至75?90°C，保温3?15分钟，使酶失活； (6)抽滤，得滤液，浓缩，干燥，即得龟甲胶多肽。 步骤（1)中，龟胶液的浓度为50?120g/L。优选地，所述龟胶液的浓度为80g/L。 步骤（2)中，所述pH优选为7. 3?7. 7,进一步优选为7. 5 ;所述温度优选为49? 51°C，进一步优选为50°C;所述广西酶的浓度优选为0. 55?0. 75g/L，进一步优选为0. 64g/ L ;所述反应的时间优选为1. 5?2. 5h，进一步优选为2h。 步骤（3)中，所述pH优选为8. 0?8. 2,进一步优选为8. 0 ;所述温度优选为54? 56°C，进一步优选为55°C ;所述碱性蛋白酶的浓度优选为1.5?1.7g/L，进一步优选为 1. 6g/L ;所述反应的时间优选为1. 5?2. 5h，进一步优选为2h。 步骤（3)中，所述碱性蛋白酶为alcalase。 步骤（4)中，所述pH优选为6. 8?7. 2,进一步优选为7. 0 ;所述温度优选为49? 51°C，进一步优选为50°C ;所述风味酶的浓度优选为0. 3?0. 5g/L，进一步优选为0. 4g/L ; 所述反应的时间优选为1. 5?2. 5h，进一步优选为2h。 步骤（5)中，所述温度为80°C，所述保温时间为lOmin。 本专利技术还提供了前述任意一项方法制备得到的龟甲胶多肽。 本专利技术还提供了前述龟甲胶多肽在制备抗肿瘤的特殊膳食食品、药品或者保健品 中的用途。其中，所述肿瘤未肉瘤或者肺癌。 特殊膳食营养品，是指在肿瘤治疗过程中的具有营养支持作用的营养食品。 本专利技术还提供了龟甲胶多肽在制备用于肿瘤辅助治疗的特殊膳食食品、药品或者 保健品中的用途。其中，所述肿瘤未肉瘤或者肺癌。 本专利技术还提供了一种抗肿瘤或者用于肿瘤辅助治疗的药品、特殊膳食食品或者保 健品，它是以前述龟甲胶多肽为活性成分，加上药品、食品或保健食品上可接受的辅料或辅 助性成分制备而成的制剂。 本专利技术方法制备得到的龟甲胶多肽，可以有效抑制肿瘤的生长，对肉瘤和肺癌的 疗效确切，副作用小，为临床抗肿瘤或肿瘤辅助治疗的药物、特殊膳食食品或保健食品提供 了一种新的选择，临床应用前景良好。 显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离 本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。 以下通过实施例形式的【具体实施方式】，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说 明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容 所实现的技术均属于本专利技术的范围。 【附图说明】 图1龟甲胶多肽组与对照组的肿瘤（肉瘤）大小比对图； 图2龟甲胶多肽组与对照组的实验解剖图； 图3龟甲胶多肽组与对照组小鼠外观比对图； 图4龟甲胶多肽组和对照组肿瘤(肺癌）组织外观图； 图5龟甲胶多肽组与对照组肿瘤(肺癌）镜下观察比对图（400倍镜下)。 【具体实施方式】 实施例1本专利技术龟甲胶多肽的制备方法 一、实验试剂： 精密pH试纸、NaOH溶液（2mo 1 /L )、HCL溶液（2mo 1 /L )、明矾、硅藻土，均为市售品。 广西酶，购自南宁庞博生物工程有限公司 碱性蛋白酶(后文称A酶)，alcalase，购自诺维信（中国）生物技术有限公司。 复合风味酶，简称风味酶(后文称F酶)，购自诺维信（中国）生物技术有限公司。 龟甲胶，由湖北老中醫制药有限公司提供，也可按照《中华人民共和国药典（2010 年版）》第169页龟甲胶的制法制备。 二、制备方法 1、天平称取50g龟甲胶，置于不锈钢锅内，加少量清水煮沸熔解。 2、将溶解后的龟胶液倒入lOOOmL烧杯中，加入适量清水，配成625mL龟胶液。 3、将水浴恒温至50°C，将龟胶液转移进lOOOmL三口烧瓶中，待龟胶液温度恒定 50°C，调 pH 至 7· 5。 4、称取0. 4g广西酶，加入龟胶液，恒温搅拌反应2h。 5、控制水浴，升温龟胶液至55°C，调节pH至8. 0,加入lg A酶，反应2h。 6、龟胶液降温至50°C，调节pH至7.0,加入0.25g F酶，反应2h。 7、升温龟胶液至80°C，保持15min灭酶活，转移龟胶液至1000mL烧杯。 8、抽滤，真空浓缩至40%左右的浓度，真空干燥得成品。 9平行作十组实验，收集合并产物。 三、本专利技术龟甲胶多肽的检测 将原料龟甲胶与本专利技术方法水解得到的龟甲胶多肽的氨基酸种类和含量以及氨 含量分析如下表： 表1龟甲胶及龟甲胶水解物氨基酸对比表 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备龟甲胶多肽的方法，其特征在于：包括如下步骤：（1）取龟甲胶，加水煮沸溶解，得龟胶液；（2）调节龟胶液pH至6.9～9.0，在48～52℃的条件下，加入广西酶至浓度为0.3～3.0g/L，恒温反应0.5～4h；（3）再调节溶液pH至8.0～9.0，在53～57℃的条件下，加入碱性蛋白酶至浓度为0.3～3.0g/L，恒温反应0.5～4h；（4）然后再调节溶液pH至6.0～9.0，在48℃～52℃的条件下，加入风味酶至浓度为0.3～3.0g/L，恒温反应0.5～4h；（5）升温至75～90℃，保温3～15分钟，使酶失活；（6）抽滤，得滤液，浓缩，干燥，即得龟甲胶多肽。

【技术特征摘要】
2013.06.17 CN 201310238048.11. 一种制备龟甲胶多肽的方法，其特征在于：包括如下步骤： (1) 取龟甲胶，加水煮沸溶解，得龟胶液； (2) 调节龟胶液pH至6. 9?9. 0,在48?52°C的条件下，加入广西酶至浓度为0· 3?3.(^/1，恒温反应0.5?411; (3) 再调节溶液pH至8. 0?9. 0,在53?57°C的条件下，加入碱性蛋白酶至浓度为 0· 3?3. Og/L，恒温反应0· 5?4h ; (4) 然后再调节溶液pH至6. 0?9. 0,在48°C?52°C的条件下，加入风味酶至浓度为 0· 3?3. Og/L，恒温反应0· 5?4h ; (5) 升温至75?90°C，保温3?15分钟，使酶失活； (6) 抽滤，得滤液，浓缩，干燥，即得龟甲胶多肽。2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1)中，龟胶液的浓度为50?120g/ L ;优选地，所述龟胶液的浓度为80g/L。3. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤...

【专利技术属性】
技术研发人员：史宗洁，张榕村，韦山，张涛，
申请(专利权)人：湖北老中醫制药有限责任公司，史宗洁，
类型：发明
国别省市：湖北;42