掺假蜂蜜中寡糖的快速检测方法技术

本发明专利技术属于食品检测技术领域，特别涉及一种掺假蜂蜜中寡糖的快速检测方法。本发明专利技术的目的在于针对目前市场上一部分掺入糖浆的蜂蜜，开发出一种可以快速、准确地对糖浆中的寡糖定性、定量的检测方法。为了实现上述发明专利技术目的，本发明专利技术公开了一种检测掺假蜂蜜中寡糖的快速检测方法，包括方法的前处理，液相色谱分离和质谱检测三个步骤。该方法以质荷比为851.3、1013.5和1175.5m/z的离子峰分别为五糖、六糖和七糖的特征检测峰的HPLC-MS检测方法。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术属于食品检测
，特别涉及一种。本专利技术的目的在于针对目前市场上一部分掺入糖浆的蜂蜜，开发出一种可以快速、准确地对糖浆中的寡糖定性、定量的检测方法。为了实现上述专利技术目的，本专利技术公开了一种检测，包括方法的前处理，液相色谱分离和质谱检测三个步骤。该方法以质荷比为851.3、1013.5和1175.5m/z的离子峰分别为五糖、六糖和七糖的特征检测峰的HPLC-MS检测方法。【专利说明】
本专利技术属于食品检测
，特别涉及一种。
技术介绍
纯正天然的蜂蜜主要由单糖，包括葡萄糖和果糖组成，同时还含有较少量的二糖 和三糖。真正的蜂蜜是由昆虫蜜蜂从开花植物的花中采得的花蜜在蜂巢中酿制的蜜，从酿 造到采蜜过程中禁止任何人为的添加活性成分或者蜂蜜中的花粉等颗粒物质。然而，一些 不法商人为了牟取更高的利润往往会往蜂蜜中加入与蜂蜜主要成分类似的转化糖浆，如 甜菜糖浆、大米糖浆、木薯糖浆、菊苣糖浆等。过去针对蜂蜜的掺杂造假的检测方法有碳 同位素方法（C4植物糖），薄层色谱法（TLC)，呋喃果糖苷酶法（BFF法），欧洲同位素方法 (LC-IRMS)方法，但这些方法都是国外人提出，而且经过一段时间后，这些方法也不能适应 新环境的需要。我们通过通过大量的研究发现这些掺入蜂蜜中的糖浆中含有少量的寡糖 (包括五糖，六糖和七糖），而纯正天然的蜂蜜中含有寡糖的量却远远低于糖浆中的量。因 此，通过检测蜂蜜中寡糖的含量是判别蜂蜜是否掺入糖浆的准确方法之一。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对目前市场上存在的掺假蜂蜜，提出一种选择性好、灵敏度 高、操作简单的掺假蜂蜜中寡糖的快速定性、定量检测方法。 为了实现上述专利技术目的，本专利技术公开了一种，其 特征主要包括以下步骤： 第一步：方法的前处理； 第二步：液相色谱分离； 第三步：质谱检测。 该方法以质荷比为851. 3、1013. 5和1175. 5m/z的离子峰分别为寡糖中五糖、六糖 和七糖的特征检测峰的HPLC-MS/MS检测方法。分别通过作五糖、六糖和七糖的标准曲线来 对掺假蜂蜜中五糖、六糖和七糖的含量进行精确定量。 针对本专利技术步骤一，公开了一种已经进行优化的前处理步骤：准确称量 1. 0 (±0. 01) g样品于50ml样品管中，加入5. 0ml水，涡旋至完全溶解，取200 μ 1加入样品 瓶中，再加入800 μ 17 : 3乙腈：水定容至lml，涡旋混匀，过水相滤膜后进样。 针对本专利技术步骤二，还公开了一种已经优选的液相分离条件：色谱柱选用 proteomix WAX-NP5 (2. 1 X 100mm，5 μ m);柱温为 35°C ;流动相为 A.乙腈-B. 0· 1 % 甲酸水 溶液，流速为〇. 25ml/min ;采用梯度洗脱的方式，以体积百分比计，0?lmin，A :80%、B : 20% ;1 ?4min，A :80%?30%，B :20%?70% ;4 ?5min，A :30%，B :70% ;5 ?5. lmin， A :30%?80%，B :70%?20% ;5· 1?6. 5min，A :80%，B :20% ;所述的液相分离采用在线 阀切换技术。 最后，针对本专利技术步骤三，公开了已经优化好的质谱检测方法：采用电喷雾离子源 (ESI);毛细管电压：3. 5KV ;干燥气温度：350°C ;干燥气流量（氮气）：5L/min ;鞘气温度： 40(TC ;雾化器压力：50psig的条件下，进行正离子SRM扫描。五糖的检测母离子为851. 3， 子离子包括365. 4、527. 4、689. 3、851. 3 ;六糖的检测母离子为1013. 5,子离子包括689. 3， 85L 3,1013. 5 ;七糖的检测母离子为 1175. 5,子离子包括 689. 3,85L 3,1013. 5,1175. 5. 本专利技术的方法优点在于：操作简单，选择性高，灵敏度高，样品溶液经过液相色谱 串联质谱多反应监测选择离子分析，采用外标法可以对掺假蜂蜜中寡糖的含量进行精确定 性定量，回收率在95?105%范围内。 【专利附图】【附图说明】 图1为天然纯正江苏油菜蜂蜜检测样品检测结果图谱。 图2为掺入糖浆样品检测结果图谱。 图3为阳性样品的六糖与七糖的峰面积响应值与离子丰度比图谱。 图4为假阳性样品的六糖与七糖的峰面积响应值与离子丰度比图谱。 【具体实施方式】 1.前处理：准确称量1. 0 (±0. 01) g样品于50ml样品管中，加入5. 0ml水，润旋至 完全溶解，取200μ1加入样品瓶中，再加入80〇μ 17 : 3乙腈：水定容至lml，涡旋混勻，过 水相滤膜后进样。 2.五糖、六糖和七糖的标准品溶液的配制：分别精确称量0. 025g五糖、六糖和七 糖标准品，用超纯水定容于25mL容量瓶中，得到lmg/ml标准溶液，再稀释到1 μ g/ml标准 溶液。最后稀释得到六个标准点：5ppb、10ppb、20ppb、50ppb、100ppb、200ppb，分别得到五 糖、六糖和七糖标准曲线。 3.外标法定量，五糖的标准曲线方程为Y = 3. 154E4+3. 134E6*X，R2 = 0. 999 ;六 糖的标准曲线方程为Y = 1. 590E4+2. 907E6*X，R2 = 0. 999 ;七糖的标准曲线方程为Y = 7.251E3+2. 375E6*X, R2 = 0.999 ； 4.检测方法的重复性实验：对内蒙葵花、新疆葵花、辽宁洋槐、河南洋槐、山东洋 槐、河南荆条、湖北荆条、江苏油菜、新疆油菜、四川油菜、新疆棉花、陕西枣花、吉林椴树、内 蒙荞麦14种来自SGS公司的天然蜂蜜分别添加五糖、六糖和七糖，每一种均添加三个浓度 点，包括5ppb、50ppb、200ppb，平行测点三次，总体平均回收率均在95?105%范围内。 5.通过对内蒙葵花、新疆葵花、辽宁洋槐、河南洋槐、山东洋槐、河南荆条、湖北荆 条、江苏油菜、新疆油菜、四川油菜、新疆棉花、陕西枣花、吉林椴树、内蒙荞麦14种来自SGS 公司的天然蜂蜜进行分析发现，天然蜂蜜中几乎不存在寡糖，如图1为江苏油菜的色谱图。 图2则为掺入了糖浆样品的色谱图。寡糖检测为阳性的样品的判据为：六糖与七糖的峰面 积响应值比在0.8?1.2之间，且碎片离子的相对丰度比如图3所示。当六糖与七糖的峰 面积响应值比值> 1.2,且碎片离子的相对丰度比与阳性样品不符，如图4所示，则可判断 此样品为阴性，典型的代表为老瓜头蜂蜜蜜种。【权利要求】1. 一种，包括方法的前处理、液相色谱分离和质谱检 测三个步骤，其特征在于该方法以质荷比为851. 3、1013. 5和1175. 5m/z的离子峰分别为五 糖、六糖和七糖的特征检测峰的HPLC-MS检测方法。2. 如权利要求1所述的快速检测方法，其特征是所述的液相色谱分离条件为：色谱柱 选用 proteomix WAX-NP5 (2. 1 X 100mm，5 μ m);柱温为 35°C ;流动相为 A.乙腈-B. 0· 1 % 甲 酸水溶液，流速为〇. 25ml/min。3本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种掺假蜂蜜中寡糖的快速检测方法，包括方法的前处理、液相色谱分离和质谱检测三个步骤，其特征在于该方法以质荷比为851.3、1013.5和1175.5m/z的离子峰分别为五糖、六糖和七糖的特征检测峰的HPLC‑MS检测方法。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：徐锦忠，吴斌，张晓燕，刘秀红，丁涛，张睿，杨波，
申请(专利权)人：江苏中谱检测有限公司，江苏出入境检验检疫局动植物与食品检测中心，
类型：发明
国别省市：江苏;32