一种樟芝菌丝体胞内多糖的提取方法技术

本发明专利技术涉及一种樟芝菌丝体胞内多糖的提取方法。所述的方法包括以下步骤：先将樟芝菌种进行液体发酵、过滤、烘干，制得樟芝干菌丝体；再对粉碎后的樟芝干菌丝体进行恒温提取、过滤、离心、浓缩、醇析、离心，最后加入溶剂洗涤，并用蒸馏水溶解稀释，离心取上清液，真空干燥至恒重，制得樟芝菌丝体粗多糖。本发明专利技术将樟芝菌丝体多糖的提取温度限定在70-80℃，提取时间限定为4.5-5h，可达到最佳多糖提取效果，同时，也避免了多糖在提取过程中的理化性质的改变，保证了提取的多糖的生理活性，且本发明专利技术先后对樟芝菌进行发酵培养、提取及多次离心等操作，也保证了樟芝菌多糖被充分提取。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及。所述的方法包括以下步骤：先将樟芝菌种进行液体发酵、过滤、烘干，制得樟芝干菌丝体；再对粉碎后的樟芝干菌丝体进行恒温提取、过滤、离心、浓缩、醇析、离心，最后加入溶剂洗涤，并用蒸馏水溶解稀释，离心取上清液，真空干燥至恒重，制得樟芝菌丝体粗多糖。本专利技术将樟芝菌丝体多糖的提取温度限定在70-80℃，提取时间限定为4.5-5h，可达到最佳多糖提取效果，同时，也避免了多糖在提取过程中的理化性质的改变，保证了提取的多糖的生理活性，且本专利技术先后对樟芝菌进行发酵培养、提取及多次离心等操作，也保证了樟芝菌多糖被充分提取。【专利说明】
本专利技术属于生物领域，具体涉及。
技术介绍
食药用菌是一种重要的生物资源，我国食用菌资源丰富，但开发利用相对晚于动 植物资源。樟芝（Antrodia Camphorata)生长在中国台湾牛樟树的中空心木材内壁，故被 称为牛樟芝，属担子菌纲，多孔菌目，多孔菌科，薄孔茵属。樟芝多糖是其樟芝菌体发酵初级 代谢产物，也是樟芝菌最主要的一种保健功能因子。研究表明，樟芝菌多糖能刺激人体产 生抗体，发挥抗癌作用，同时，还具有抗病菌、抗病毒、抗辐射、抗衰老等功能及降血糖、降血 压、降胆固醇、抗炎症、抗血凝等多种生理活性，此外，它能通过刺激巨噬细胞、T淋巴细胞、B 淋巴细胞等增强人体免疫功能。临床试验表明，食药樟芝菌多糖类无任何副作用，可作为高 效低毒药物。因此，樟芝菌是一种极具开发潜力及应用前景的药用菌，但樟芝目前还不能完 全人工栽培，且天然樟芝子实体价格过高，导致目前樟芝菌成为全世界市场上最昂贵的野 生真菌。 随着基础理论及应用技术研究的不断深入，目前，现代生物工程技术之一即食药 菌的发酵工程技术也取得了较大的进展，为了提高樟芝菌丝体内胞内多糖的提取率，已有 学者进行了热水浸提法等试验研究，但有关提取温度、提取时间等研究尚不充分，且多糖提 取率也较低。为此，本专利技术提供一种简单可行且多糖提取率高的樟芝多糖提取方法。
技术实现思路
针对上述现有技术的不足，本专利技术提供一种从樟芝菌丝体中提取多糖的方法。 本专利技术的技术方案如下： ，包括以下步骤： (1) 制备樟芝干菌丝体：将樟芝菌种先后进行液体发酵、过滤、烘干，制得樟菌菌干菌丝 体； (2) 取步骤（1)中制得的干菌丝体5-10g粉碎，将粉碎的粉末放入烧杯中，加蒸馏水 20-50ml，将烧杯置入电热恒温水浴锅中进行提取，提取液过滤，离心取上清液进行浓缩，取 浓缩液进行醇析、离心，取沉淀； (3) 在步骤（2)中得到的沉淀中加2-4倍体积的溶剂洗涤，再用等量的的蒸馏水溶解稀 释，离心取上清液，真空干燥至恒重，制得樟芝菌丝体粗多糖。 步骤（1)中所述的发酵具体方法为：将樟芝斜面菌株接种于樟芝发酵基础培养基 中，在光照下培养l〇-15d。 优选的，所述的樟芝发酵基础培养基由以下重量份的组分组成：马铃薯50-100g， 葡萄糖10-20g，黄豆粉2-5g，玉米粉2-5g，蛋白胨l-3g，磷酸二氢钾0. 2-0. 5g，硫酸镁 0· 15-0.35g，水 10_20ml。 步骤（1)中所述的过滤的具体方法为：将发酵后的樟芝发酵液经40目筛过滤，截 留的菌丝体再用3倍量蒸馏水洗涤溶解，再过40目筛，取滤液即为过滤后的樟芝发酵液。 步骤（1)中所述的烘干的具体过程为：将过滤后的樟芝发酵液在60_65°C的烘箱 中烘干至恒重，制得樟芝干菌丝体。 步骤（2)中所述的提取温度为70-80°C，所述的提取时间为4. 5-5h。 步骤（2)中所述的过滤为微孔滤膜过滤，所述的离心速度为4000-6000r/min， 离心时间为10-30min ;所述的浓缩为旋转蒸发浓缩，操作温度为60-65°C，操作时间为 20-30min〇 步骤（2)中所述的醇析过程中，加入的溶剂为体积比为（2-5) :(0.6-1.2)的氯仿 与异戊醇的混合溶液。 步骤（3)中洗涤时所加入的溶剂为无水乙醇，洗涤次数为2-4次。 步骤（3)中所述的离心速度为4000-6000r/min，离心时间为5-10min，干燥温度为 60-65。。。 本专利技术与现有技术相比，有益效果体现在以下几点： 1.研究显示，樟芝菌丝体多糖的提取时间为4. 7h、提取温度为75°C左右时，提取率的 理论值为8. 8%，是樟芝菌丝体胞内多糖提取的最佳参数，因此，本专利技术在提取过程中，将提 取温度限定在70-80°C，提取时间限定为4. 5-5h，可达到最佳多糖提取效果，同时，也避免 了多糖在提取过程中的理化性质的改变，保证了提取的多糖的生理活性。 2.本专利技术中，先对樟芝菌进行发酵培养、过滤及烘干制得干菌丝体，然后先后进行 提取、离心、浓缩、醇析、再次离心、洗涤、离心及干燥，保证了樟芝菌多糖被充分提取。 【具体实施方式】 下面结合实施例对本专利技术做进一步说明。 实施例1 ，包括以下步骤： (1) 制备樟芝干菌丝体：将樟芝斜面菌株接种于樟芝发酵基础培养基中，在光照下培养 l〇d进行发酵，将发酵液经40目筛过滤，截留的菌丝体再用3倍量蒸馏水洗涤溶解，再过40 目筛，取滤液即为过滤后的樟芝发酵液，在60°C的烘箱中烘干至恒重，制得樟芝干菌丝体； (2) 取步骤（1)中制得的干菌丝体5g粉碎，将粉碎的粉末放入烧杯中，加蒸馏水20ml， 将烧杯置入电热恒温水浴锅中进行提取，提取温度为70°C，所述的提取时间为4. 5h，将提 取液采用微孔滤膜过滤过滤，以4000r/min的离心速度离心lOmin ;取上清液进行旋转蒸发 浓缩，操作温度为60°C，操作时间为20min ;在浓缩液中加入体积比为2 :0. 6的氯仿与异戊 醇的混合溶液进行醇析，以4000r/min的离心速度离心lOmin，取沉淀； (3) 在步骤（2)中得到的沉淀中加2倍体积的无水乙醇洗涤2次，再用等量的的蒸馏水 溶解稀释，以4000r/min的速度离心5min,离心取上清液，在60°C真空干燥至恒重，制得樟 芝菌丝体粗多糖。 优选的，所述的樟芝发酵基础培养基由以下重量份的组分组成：马铃薯50g，葡萄 糖l〇g，黄豆粉2g，玉米粉2g，蛋白胨lg，磷酸二氢钾0.25g，硫酸镁0. 15g，水10ml。 实施例2 ，包括以下步骤： (1) 制备樟芝干菌丝体：将樟芝斜面菌株接种于樟芝发酵基础培养基中，在光照下培养 15d进行发酵，将发酵液经40目筛过滤，截留的菌丝体再用3倍量蒸馏水洗涤溶解，再过40 目筛，取滤液即为过滤后的樟芝发酵液，在65°C的烘箱中烘干至恒重，制得樟芝干菌丝体； (2) 取步骤（1)中制得的干菌丝体10g粉碎，将粉碎的粉末放入烧杯中，加蒸馏水50ml， 将烧杯置入电热恒温水浴锅中进行提取，提取温度为80°C，所述的提取时间为5h，将提取 液采用微孔滤膜过滤过滤，以6000r/min的离心速度离心30min ;取上清液进行旋转蒸发浓 缩，操作温度为65°C，操作时间为30min ;在浓缩液中加入体积比为5 :1. 2的氯仿与异戊醇 的混合溶液进行醇析、以6000r/min的离心速度离心30min，取沉淀； (3) 在步骤（2)中得到的沉淀中加本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种樟芝菌丝体胞内多糖的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）制备樟芝干菌丝体：将樟芝菌种先后进行液体发酵、过滤、烘干，制得樟菌菌干菌丝体；（2）取步骤（1）中制得的干菌丝体5‑10g粉碎，将粉碎的粉末放入烧杯中，加蒸馏水20‑50ml,将烧杯置入电热恒温水浴锅中进行提取，提取液过滤，离心取上清液进行浓缩，取浓缩液进行醇析、离心，取沉淀；（3）在步骤（2）中得到的沉淀中加2‑4倍体积的溶剂洗涤，再用等量的的蒸馏水溶解稀释，离心取上清液，真空干燥至恒重，制得樟芝菌丝体粗多糖。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘巴宁，郑安乔，
申请(专利权)人：中山安荞生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44