具有双表达盒的谷氨酰胺合成酶高效表达载体制造技术

本发明专利技术涉及一种可扩增的同时具有两个表达盒的谷氨酰胺合成酶表达载体，该表达载体主要元件由6大部分组成：第一表达盒元件、第二表达盒元件、f1复制子、谷氨酰胺合成酶表达盒元件、氨苄青霉素β内酰胺酶水解表达盒元件和ColE1复制子，其中第一表达盒元件、第二表达盒元件中采用的是强的增强/启动子CMV立早增强子/启动子；谷氨酰胺合成酶表达盒元件中采用弱的启动子/增强子SV40，降低谷氨酰胺合成酶的表达，有利于高表达克隆的筛选。表达蛋白编码基因分别通过多克隆位点A和多克隆位点B克隆至表达载体。该载体适于在哺乳动物细胞中同时高效表达1-2种蛋白，特别适用于抗体蛋白的表达。

【技术实现步骤摘要】
具有双表达盒的谷氨酰胺合成酶高效表达载体
：本专利技术涉及生物制药基因工程表达技术，具体涉及一种用于高表达细胞株开发的载体的构建及应用。
技术介绍
诞生于70年代末的生物制药因其具有其他药物无法比拟的优点，已迅速成为制药工业中一个引人瞩目的领域。生物技术的主要应用领域是我国改善民生的重要组成部分，我国庞大的人口基数和巨大的药物消费增长潜力，为我国生物技术的发展提供了比国外更为广阔的市场需求和发展潜力。生物制药的应用主要在这几个领域：各种肿瘤、自身免疫性疾病(如红斑狼疮、哮喘、多发性硬化症、风湿性关节炎等)、糖尿病、心血管疾病等多发病、常见病的诊断和治疗。近年来，生物制药全球生物技术药物增长率为15％～33％，远高于年增长率为7％～10％的传统制药业，其总销售额占药物市场总额的比例从2000年的9％上升至2014年的23％。生物技术药物2014年销售总额估计可达1690亿美元，其中单抗药物至少占一半。生物制药研究与开发的主要环节包括：基因的克隆和基因工程菌的构造；重组细胞获得和筛选；目的产物的分离纯化等技术环节。目前已有多种表达系统用于生产具有医疗价值的人或动物来源的蛋白质药物，主要的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种具有双表达盒的谷氨酰胺合成酶表达载体，该载体包括两个表达盒，分别为第一表达盒元件和第二表达盒元件，该载体被命名为p327.7。

【技术特征摘要】
1.一种具有双表达盒的谷氨酰胺合成酶表达载体，该载体包括两个表达盒，分别为第一表达盒元件和第二表达盒元件，还包含如下4种元件：f1复制子、谷氨酰胺合成酶表达盒元件、氨苄青霉素β内酰胺酶水解表达盒元件和ColE1复制子，该载体被命名为p327.7，该载体序列如SEQIDNo：1所示。2.根据权利要求1所述的一种具有双表达盒的谷氨酰胺合成酶表达载体，所述的第一表达盒元件、第二表达盒元件中采用的是强的增强子和启动子；表达蛋白编码基因分别通过多克隆位点A和多克隆位点B克隆至表达载体，所述的多克隆位点A具有XhoI、EcoRI和MluI3个限制性内切酶位点；所述的多克隆位点B具有XbaI、BglII和SalI3个限制性内切酶位点；谷氨酰胺合成酶表达盒元件中采用弱的启动子和增强子；在多克隆位点A的5’端设计了T7RNA聚合酶启动子，在多克隆位点B的3’端设计了T3RNA聚合酶启动子序...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡品良，白洁，洪伟东，邹敬，宋凌云，杨泽荣，
申请(专利权)人：北京比洋生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11