用于鉴定军团菌毒力的方法及其专用试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种用于鉴定军团菌毒力的方法及其专用试剂盒。本发明专利技术的方法包括如下步骤：(1)设置参数：Spectral acquisition setup；Grating scan type:Extended；Confocality:Standard；Spectrum Range:Low 100.00；Centre Raman shit/cm-1；High 2000.00；Configuration:Laser name 532nm edge；Grating name 1800l/mm；Exposure time/s:10.00；Accumulations:1；Objective:50；Laser power％:100；(2)进行检测；(3)得到拉曼光谱图；在500-2000横坐标范围内：如果存在1个以上强度为4000以上的峰，该待测军团菌为军团菌强毒株；如果不满足上述条件，该待测军团菌为军团菌弱毒株。本发明专利技术提供的方法快速、简便、检测成本低。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种用于鉴定军团菌毒力的方法及其专用试剂盒。本专利技术的方法包括如下步骤：(1)设置参数：Spectral?acquisition?setup；Grating?scan?type:Extended；Confocality:Standard；Spectrum?Range:Low?100.00；Centre?Raman?shit/cm-1；High?2000.00；Configuration:Laser?name?532nm?edge；Grating?name?1800l/mm；Exposure?time/s:10.00；Accumulations:1；Objective:50；Laser?power％:100；(2)进行检测；(3)得到拉曼光谱图；在500-2000横坐标范围内：如果存在1个以上强度为4000以上的峰，该待测军团菌为军团菌强毒株；如果不满足上述条件，该待测军团菌为军团菌弱毒株。本专利技术提供的方法快速、简便、检测成本低。【专利说明】用于鉴定军团菌毒力的方法及其专用试剂盒
本专利技术涉及一种用于鉴定军团菌毒力的方法及其专用试剂盒。
技术介绍
军团菌，系需氧革兰氏阴性杆菌，以嗜肺军团菌最易致病。军团菌属已有48个军团菌种被发现，其中19种被认为与人类呼吸道感染有关。 流行病学调查证实，军团菌是通过气溶胶经空气传播给人的，与冷却塔、热水供应系统、蒸汽浓缩器、矿泉疗养浴池、临床呼吸装置的加湿器、超级市场蔬菜喷雾器、喷泉等有关。个别报道，引用被军团菌污染的水和接触被军团菌污染的土壤也能引起军团病。目前为止，人与人之间的传播尚未得到证实。军团病的特征为肺炎伴全身性毒血症症状，严重者出现周围回圈衰竭、呼吸衰竭。胸部X线表现在早期为单叶斑片状阴影，继而肺实变，病变迅速发展至多肺叶段，可有肺脓肿形成或少量胸腔积液征。确诊依赖于特异性抗体的检查及在痰、胸腔积液、肺组织活检标本中分离出细菌。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种用于鉴定军团菌毒力的方法及其专用试剂盒。 本专利技术提供了一种鉴定待测军团菌的毒力的试剂盒，包括拉曼光谱仪和记载有如下操作规程的载体: (I)设置拉曼光谱仪的如下参数: 关键参数为:Spectralacquisit1n setup ； 在Range界面设置如下参数: Grating scan type:Extended ; Confocality: Standard ； Spectrum Range: Low 100.00; Centre Raman shit/cnT1 ； High 2000.00 ； Configurat1n: Laser name 532nm edge ； Grating name 1800 1/mm ； 在Acquisit1n界面设置如下参数: Exposure time/s: 10.00 ； Accumulat1ns:1 ； Objective:50 ； Laser power %: 100 ； (2)取待测军团菌置于载玻片上，放置到完成步骤(I)的参数设置的拉曼光谱仪中进行检测； (3)完成步骤(2)后，将拉曼光谱仪的自带软件设置为WiRE3.0，进行数据处理，得到拉曼光谱图；拉曼光谱图中，在500-2000横坐标范围内:如果存在I个以上(含I个)纵坐标(counts)强度为4000以上的峰，该待测军团菌为军团菌强毒株；如果不满足上述条件，该待测军团菌为军团菌弱毒株。 本专利技术还保护一种鉴定待测军团菌的毒力的方法，包括如下步骤: (I)设置拉曼光谱仪的如下参数: 关键参数为:Spectralacquisit1n setup ； 在Range界面设置如下参数: Grating scan type:Extended ; Confocality: Standard ； Spectrum Range: Low 100.00; Centre Raman shit/cm"1 ； High 2000.00 ； Configurat1n: Laser name 532nm edge ； Grating name 1800 1/mm ； 在Acquisit1n界面设置如下参数: Exposure time/s: 10.00 ； Accumulat1ns:1 ； Objective:50 ； Laser power %: 100 ； (2)取待测军团菌置于载玻片上，放置到完成步骤(I)的参数设置的拉曼光谱仪中进行检测； (3)完成步骤(2)后，将拉曼光谱仪的自带软件设置为WiRE3.0，进行数据处理，得到拉曼光谱图；拉曼光谱图中，在500-2000横坐标范围内:如果存在I个以上(含I个)纵坐标(counts)强度为4000以上的峰，该待测军团菌为军团菌强毒株；如果不满足上述条件，该待测军团菌为军团菌弱毒株。 所述拉曼光谱仪具体可为生产厂家为英国雷尼绍公司(RENISHAW)，型号为inViaRaman Microscope的拉曼光谱仪。 军团菌强毒株和军团菌弱毒株的定义如下:将待测军团菌与宿主细胞共培养，如果与共培养的O时刻相比，共培养24小时后宿主细胞内的所述待测军团菌数量增加，待测军团菌为军团菌强度株；如果不满足上述条件，待测军团菌为军团菌弱毒株。所述宿主细胞具体可为小鼠肺泡巨噬细胞系J774。 军团菌强毒株和军团菌弱毒株的定义具体如下:(I)取待测军团菌，用PBS缓冲液(pH7.2-7.4,0.01M)悬浮，得到108cfu/ml的菌悬液，然后用RPMI1640培养液将菌悬液稀释至10倍体积，得到浓度为107cfu/ml的菌液；(2)采用含10% (体积比)胎牛血清的RPMI1640培养液悬浮小鼠肺泡巨噬细胞系J774，得到细胞浓度为2 X 15个细胞/mL的细胞悬液；(3)取24孔板，每孔加入500 μ L步骤(2)得到的细胞悬液，置于37°C、5% CO2环境中培养4小时；然后加入放入Iml步骤(I)得到的菌液，置于37°C、5% CO2环境中培养 1.5小时；然后取出24孔板，用PBS缓冲液清洗三遍以去除非粘附细菌；然后每孔加入I毫升RPMI1640培养液，置于37°C、5% CO2环境中共培养，分别于共培养O小时或24小时后弃除培养上清，每孔加入ImL灭菌水，刮下孔底部的细胞，并将此细胞混悬液转移至1.5mL的离心管，梯度稀释之后接种于BCYE平板，进行军团菌的菌落计数；如果与共培养的O时刻相比，共培养24小时后每毫升细胞混悬液中军团菌的数量增加，待测军团菌为军团菌强度株；如果不满足上述条件，待测军团菌为军团菌弱毒株。 军团菌强毒株和军团菌弱毒株的定义具体如下:取5只以上BALB/c小鼠，通过气管吸入的方式，每只BALB/c小鼠吸入40 μ I菌含量为18Cfu的待测军团菌的菌悬液以进行攻毒，攻毒后的第3天，如果小鼠的死亡率为100%、待测军团菌为军团菌强毒株，如果60%以上小鼠具有军团菌感染的发病表征且60%以下小鼠死亡、待测军团菌为军团菌弱毒株。 本专利技术提供的方法，快速、简便、需要样品量极少、检测成本低，能够鉴定军团菌致病力本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种鉴定待测军团菌的毒力的试剂盒，包括拉曼光谱仪和记载有如下操作规程的载体：(1)设置拉曼光谱仪的如下参数：关键参数为：Spectral acquisition setup；在Range界面设置如下参数:Grating scan type:Extended；Confocality:Standard；Spectrum Range:Low 100.00；Centre Raman shit/cm‑1；High 2000.00；Configuration:Laser name 532nm edge；Grating name 1800 l/mm；在Acquisition界面设置如下参数：Exposure time/s:10.00；Accumulations:1；Objective:50；Laser power％:100；(2)取待测军团菌置于载玻片上，放置到完成步骤(1)的参数设置的拉曼光谱仪中进行检测；(3)完成步骤(2)后，将拉曼光谱仪的自带软件设置为WiRE3.0，进行数据处理，得到拉曼光谱图；拉曼光谱图中，在500‑2000横坐标范围内：如果存在1个以上纵坐标强度为4000以上的峰，该待测军团菌为军团菌强毒株；如果不满足上述条件，该待测军团菌为军团菌弱毒株。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘文军，李晶，秦天，任红宇，贾潇潇，周海健，邵祝军，杨利敏，
申请(专利权)人：中国科学院微生物研究所，中国疾病预防控制中心传染病预防控制所，
类型：发明
国别省市：北京;11