安普霉素胶体金试纸条的制备及使用方法技术

本发明专利技术涉及一种安普霉素药物残留快速检测的胶体金试纸条的制备及使用方法。该方法在试纸的背衬上依次粘贴有样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和样品吸收垫。硝酸纤维素膜上面包被有检测用抗原1条作为检测线，同时还包被有抗第二种属动物蛋白的IgG1条作为参照线。该快速检测试纸条特异性强，能够半定量检测，环境温度为4-40℃都可以使用，适合于个体养殖户、食品卫生质检部门、海关等动物源食品进行安普霉素残留的快速检测。本发明专利技术具有特异性强、灵敏性高、能够实现半定量检测，且操作简单方便等有益效果。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于食品安全检测领域，具体涉及食品中安普霉素药物残留的一种快速胶 体金试纸条的制备及使用方法。
技术介绍
安普霉素又名阿普拉霉素，易溶于水，稍溶于低级醇，不溶于其他有机溶剂。紫外 吸收光谱为末端吸收为红外光谱具有典型的氨基糖苷类抗生素的多氨基、多羟基特征吸收 峰。是一种黑暗链菌产生的氨基糖苷类新兽用抗生素，20世纪80年代由美国开发成功，其 特点是抗菌谱广，不易产生抗药性，可用于鸡大肠杆菌、沙门氏杆菌和支原体引起的感染。 作为药物型饲料添加剂，安普霉素能明显促进增重和提高饲料转化率，在畜禽养殖领域得 到广泛应用。主要用于家禽的大肠杆菌、沙门氏杆菌感染，疗效非常显著，被美国FDA推荐 为治疗大肠杆菌病的首选药物，对支原体病也有效。 安普霉素平时也称其为硫酸安普霉素，是一种抗菌性抗生素。很多兽药当中都包 含安普霉素，但使用过多可能导致动物机体虚软，所以用量要适当。在食品和饲料中，安普 霉素的检测方法有薄层色谱法，气象色谱法，气-质联机和高效液相色谱法，由于以上诸分 析法样品前处理比较复杂，操作时需专门的技术人员、检测费用昂贵，不利于推广应用。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了克服现有技术的不足，提供一种特异性强，灵敏度高，且操作 简单方便，对样品经过简单处理即可检测的安普霉素快速试纸半定量检测方法。 本专利技术的目的可通过以下技术方案来实现： 安普霉素胶体金试纸条检测方法其技术要点是：试纸的背衬上依次贴有样品垫和金标 垫和硝酸纤维素膜和吸水吸水纸，金标垫上被标记的物质为第二种属动物蛋白与安普霉素 检测用抗原的混合物或第二种属动物蛋白与安普霉素抗体的混合物；硝酸纤维素膜上包被 有安普霉素抗体1条作为检测线，同时还包被有抗第二种属动物蛋白的IgG 1条作为参考 线或包被有安普霉素检测用抗原1条作为检测线，同时还包被有抗第二种属动物蛋白的工 IgGl条作为参考线。在试纸制备时通过调节检测线和参考线包被物的浓度，控制检测时检 测线和参考线的显色深浅，并将其显色深浅与标准物质浓度对应起来，达到半定量检测。 所述的检测用抗原是指安普霉素与载体物质明胶形成的偶合物，免疫用抗原是指 安普霉素与载体物质匙孔血蓝蛋白（KLH)形成的偶合物。 所述的载体物质也可以选用其他大分子物质，如：脂蛋白、多聚氨基酸、葡聚糖、卵 清白蛋白等，但要求检测用抗原与免疫用抗原的载体无交叉免疫反应。 所述的第二种属动物蛋白指非抗体来源属动物的蛋白，例如，抗体为兔源性，则第 二种属动物蛋白可以是卵清白蛋白、猪血清白蛋白等鸡、鸭或其他非兔源性动物蛋白。 本专利技术所描述的试纸的各部分处理与功能如下： 背衬：为一面涂有不干胶的不吸水的韧性材料，如PVC板，起固定支持试纸其他组成部 分的作用。 样品垫制备：将滤纸或玻璃纤维纸浸入pH 7.0- 8. 4的PBS中约莫2 min，取出， 80°C烘干或其他方式干燥，即作为样品垫，检测时起吸收样品溶液的作用，便于样品溶液向 上移动。 金标垫的制备：该部分起固定胶体金标记的抗原或抗体的作用。 制备步骤包括胶体金溶液的制备、胶体金标记安普霉素抗原或安普霉素抗体： (1) 胶体金溶液的制备：将氯金酸（HAuC14)用超纯水配制成1%的母液，取1 mL的母 液，用超纯水定容至100 mL，配成0. 01%的溶液，加热至沸腾，加入1 - 5 mL 1%的柠檬酸三 钠水溶液，继续加热至出现透明的橙红色为止，即为胶体金溶液； (2) 胶体金标记安普霉素抗原：将安普霉素检测用抗原和第二种属动物蛋白分别用 卩85(0.01111〇1/1，？!17.0-7.5)溶解稀释至2-4 11^/1^，每100 1^胶体金溶液加入1-3 1^的 2-4 mg/mL的检测用抗原1-1.5 mL 2-4 mg/mL第二种属动物蛋白震荡2 min，用0.2 mol/L 的K2C03，调节pH至8·4，震荡5min加入ll%PEG-10000 2 mL，震荡5min，6000-13000r/ min 离心 15 min，除去上清，将沉淀用 PBS (0.01 mol/L，pH 7. 0-7. 5)复溶，以 8000-15000 r/min 离心 15 min，除去上清，将沉淀用 PBS (0· 01 mol/L，pH 7. 0-7. 5)释 500-2000 倍产 物作为金标记安普霉素抗原； (3) 胶体金标记安普霉素抗体：将安普霉素单克隆抗体或多克隆抗体和第二种属蛋白 分别用PBS (0.01 mol/L，pH 7. 0-7. 5)溶解稀释至2-4 mg/mL，每100 mL胶体金溶液加入 l-3mL 2-4 mg/mL的安普霉素抗体和1-1.5 mL 2-4 mg/mL第二种属动物蛋白，震荡2 min， 用0·2mol/L的K2C03，调节pH至8·4，震荡5min，加入ll%PEG-10000 2 mL，震荡5min， 6000-13000r/min 离心 15 min，除去上清，将沉淀用 PBS (0· 01 mol/L，pH 7. 0-7. 5)复溶， 以 8000-150001'/111丨11离心15 111丨11，除去上清，将沉淀用？85(0.01111〇1/1，口!17.0-7.5)稀 释500-2000倍，产物作为金标安普霉素抗体； (4) 金标垫处理：将安普霉素抗原或安普霉素抗体倒入一槽中，将玻璃纤维或滤纸浸入 1 min，取出，室温干燥后，即作金标垫。 硝酸纤维素膜制备：用0. 8%的戊二醛溶液或0. 2%的碳二亚胺溶液浸泡硝酸纤维 膜或醋酸纤维膜或尼龙膜30 min，取出，37°C烘干，上边包被1条不同浓度的安普霉素检测 用抗原线或安普霉素抗体线作为检测线，同时包被1条抗第二种属动物蛋白的工IgG线作 为参考线。当胶体金标记部分标记对象为安普霉素检测用抗原和第二种属蛋白时，检测线 则包被安普霉素抗体。此即为硝酸纤维素膜，该部分主要作用是将反应结果以肉眼可见的 颜色表征出来。 吸水纸制备：将玻璃纤维纸或滤纸或吸水纸室温干燥后，即作为吸水部分。该部分 主要作用在于将移动上来的多余的样品溶液吸收。 试纸组装：在背衬上依次粘贴有样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和样品吸收垫，即 成安普霉素检测试纸。 检测原理：检测原理因胶体金标记的对象不同，而稍有差异。 当胶体金标记部分标记对象为安普霉素检测用抗原和第二种属动物蛋白时，如果 样品中含有安普霉素，样品溶液被试纸的样品垫吸收并通过毛细作用上移，样品中的游离 安普霉素分子量小移动速度快，先到达检测线，先与检测线上包被的安普霉素抗体结合，因 检测线上包被的安普霉素抗体只有特定的结合位点，而且样品中游离的安普霉素结合能力 比偶合态的安普霉素检测用抗原强，于是胶体金标记的检测用抗原不能再被检测线上的安 普霉素抗体捕获，于是检测线无色，此即为阳性；如果样品中无安普霉素，则胶体金标记的 安普霉素检测用抗原到达检测线后就被检测线上包被的安普霉素抗体捕获，形成肉眼可见 的红色，此即为阴性。无论样品中是否含有安普霉素，胶体金标记的第二种属动物蛋白上移 到达参考线时都可被参考线上包被的抗第二种属动物蛋白本文档来自技高网...

【技术保护点】
安普霉素胶体金试纸条，其特征在于：在试纸的背衬上依次贴有样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，金标垫部分被标记的物质为第二种属动物蛋白和安普霉素抗体的混合物；硝酸纤维素膜部分包被有检测用安普霉素抗原1条作为检测线，同时还包被有抗第二种属动物蛋白的IgG 1条作为参照线。

【技术特征摘要】
1. 安普霉素胶体金试纸条，其特征在于：在试纸的背衬上依次贴有样品垫、金标垫、硝 酸纤维素膜和吸水纸，金标垫部分被标记的物质为第二种属动物蛋白和安普霉素抗体的混 合物；硝酸纤维素膜部分包被有检测用安普霉素抗原1条作为检测线，同时还包被有抗第 二种属动物蛋白的IgG 1条作为参照线。2. 根据权利要求1所述的安普霉素...

【专利技术属性】
技术研发人员：杜道林，尚苏林，
申请(专利权)人：江苏维赛科技生物发展有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32