一种山油柑碱的提取分离方法与应用技术

本发明专利技术涉及一种山油柑碱的提取分离方法与应用，提取分离方法包括以下步骤：（1）将山油柑根粉碎，加入乙醇水溶液，进行负压空化混悬固液萃取，得到萃取液，萃取液回收试剂得总生物碱浸膏；（2）总生物碱浸膏加入大孔树脂，拌匀、干燥后装柱，醇水溶液洗脱，收集山油柑碱流分，浓缩得山油柑碱粗品；（3）将上述粗品采用高速逆流色谱法分离纯化得山油柑碱。本发明专利技术方法具有所得产品含量高，操作简单，提率高等优点。本发明专利技术方法所制化合物为开发应用新一代天然来源的抗肿瘤药物开拓了新径。

【技术实现步骤摘要】
—种山油柑碱的提取分离方法与应用
[0001 ] 本专利技术涉及一种山油柑碱的提取分离方法与应用，具体是涉及一种应用高速逆流色谱技术从山油柑根中分离纯化山油柑碱的方法，还涉及山油柑碱在抗肿瘤药物中的应用。
技术介绍
山油柑碱(Acronycine),分子式C2tlH19NO3,分子量32L 36,难溶于水，可溶于乙醇、氯仿等有机溶剂。 山油甜碱是从芸香科棺物山油甜Acronychia pedunculata (L.)Miq.根中提取分离的一种生物碱类化合物。实验研究表明，山油柑碱具有能抑制细胞的有丝分裂和降低吉田腹水瘤细胞分裂指数。能影响癌细胞核酸的生成，显著降低L615小显脾中RNA的含量，而对正常动物组织中RNA和DNA的含量无显著影响。抗动物癌谱较广，在17种瘤谱中，对其中12种瘤谱有显著抑制作用，对目前临床使用的化疗药物不敏感的髓性白血病C-1498，浆细胞骨髓瘤X_5563(接近人体肿瘤)和Shingi癌-115均有抑制作用。 现有提取山油柑碱的报道并不多见，市场上也尚未有山油柑碱对照品的出售，因此提供一种山油柑碱的提取分离方法与应用则很有必要，可以为其后续研究提供支持。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种山油柑碱的提取分离方法与应用，本专利技术方法制得的山油柑碱质量好，纯度高。 为了达到上述目的，本专利技术采用以下技术方案:一种山油柑碱的提取分离方法，其特征在于包括以下步骤:Cl)提取:将山油柑根粉碎，加入7-12倍药材重量的70-90%乙醇水溶液，空化混悬20-40min,进行负压空化混悬固液萃取1_2次,得到萃取液；(2)大孔树脂富集:萃取液回收乙醇得总生物碱浸膏，加入大孔树脂，拌匀、干燥后装柱，醇水溶液洗脱，收集山油柑碱流分，浓缩得山油柑碱粗品；(3)纯化:将上述粗品采用高速逆流色谱法分离纯化，以氯仿-甲醇-水为两相溶剂系统，ELSD检测器监测，收集目标流分，回收试剂，真空干燥得产品。 步骤(1)所述乙醇水溶液浓度为75%，用量为10倍药材重量。 步骤(1)所述混悬时间为30min，萃取2次。 步骤(2)所述萃取液浓缩至密度1.1-1.2g/ml。 步骤(2)所述大孔树脂为DlOl型，醇水溶液为85%的乙醇溶液。 步骤(3)所述氯仿-甲醇-水体积比为(5-9): (15-17): (6_8)。 本专利技术提取分离方法制得的化合物在抗肿瘤药物中的应用。 本专利技术提取分离方法制得的化合物进行抗肿瘤活性实验表明:该化合物具有较强的抗肿瘤活性，在天然新药开发中具有良好的应用前景。 本专利技术提取分离方法制得的山油柑碱采用MTT法(四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法)进行抗肿瘤活性测试。 试验用细胞株:HeLa:人子宫颈癌细胞株；HEC_1:人子宫内膜癌细胞株；T_98和U251-SP:人脑神经胶质瘤细胞株；HLE:人肝癌细胞株和HMV-1:人黑色素瘤细胞株。 方法:(1)0.25%胰酶消化对数生长期细胞，10%NBS的RPMI 1640调细胞浓度50000个/ml。96孔板10ul/孔。设溶剂对照，每组3平行孔。37°C，5%C0 2、95%空气的培养箱中预培养24h，弃上清。 (2)加药物5个10倍稀释的浓度(溶剂为有二甲亚砜和水)，为10 _4 mol/L。 (3)细胞连续培养48h，每孔加入10 μ I 5mg/ml的MTT溶液(以无血清培养基配制)，继续培养4h。 (4)吸去上清。加入200μ1 DMS0，轻轻振荡以使甲臜完全溶解。570nm处用酶标仪测定OD值。 (5)计算抑制率(%)=(对照OD-药物0D) /对照0D*100% 实验结果:本专利技术化合物的抑制率以相对于对照(添加DMS0)的结果如下表1: 表1山油柑碱的肿瘤细胞增值抑制率％_ __本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种山油柑碱的提取分离方法，其特征在于包括以下步骤：（1）提取：将山油柑根粉碎，加入7‑12倍药材重量的70‑90%乙醇水溶液，空化混悬20‑40min，进行负压空化混悬固液萃取1‑2次，得到萃取液；（2）大孔树脂富集：萃取液回收乙醇得总生物碱浸膏，加入大孔树脂，拌匀、干燥后装柱，醇水溶液洗脱，收集山油柑碱流分，浓缩得山油柑碱粗品；（3）纯化：将上述粗品采用高速逆流色谱法分离纯化，以氯仿‑甲醇‑水为两相溶剂系统，ELSD检测器监测，收集目标流分，回收试剂，真空干燥得产品。

【技术特征摘要】
1.一种山油柑碱的提取分离方法，其特征在于包括以下步骤: (1)提取:将山油柑根粉碎，加入7-12倍药材重量的70-90%乙醇水溶液，空化混悬20-40min,进行负压空化混悬固液萃取1_2次,得到萃取液； (2)大孔树脂富集:萃取液回收乙醇得总生物碱浸膏，加入大孔树脂，拌匀、干燥后装柱，醇水溶液洗脱，收集山油柑碱流分，浓缩得山油柑碱粗品； (3)纯化:将上述粗品采用高速逆流色谱法分离纯化，以氯仿-甲醇-水为两相溶剂系统，ELSD检测器监测，收集目标流分，回收试剂，真空干燥得产品。2.如权利要求1所述的提取分离方法，其特征在于步骤(1)...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘东锋，杨成东，
申请(专利权)人：南京泽朗医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32