一种诱导肿瘤细胞凋亡的中药提取物及其制备工艺和应用制造技术

本发明专利技术公开了一种诱导肿瘤细胞凋亡的中药提取物及其制备工艺和应用，属于中药材提取技术领域，所述的中药提取物为毛叶白粉藤水提物。本发明专利技术所述中药提取物按如下方法制备而成：将毛叶白粉藤原料置于提取容器中，先后用浓度为90%-95%（v/v）乙醇、70%-75%（v/v）乙醇各回流提取1-3次，弃掉醇提液，所得药渣加水煎煮1-4次，过滤得水提液，浓缩成稠膏，干燥，粉碎，得毛叶白粉藤水提物。本发明专利技术涉及的中药提取物由单一的中草药制备而成，其不仅可以抑制肿瘤细胞增殖，而且可以诱导肿瘤细胞凋亡。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于中药材提取
，涉及一种诱导肿瘤细胞凋亡的中药提取物及其 制备工艺和应用。 一种诱导肿瘤细胞凋亡的中药提取物及其制备工艺和应用
技术介绍
目前，对于癌症的治疗尽管结合了外科手术，化学疗法，及放射性疗法，但是其治 愈率还是很低的。化学疗法的低成功率原因在于当前的化学疗法是以迅速分化的肿瘤细胞 为靶子的。这种方法对潜伏的或者生长缓慢的肿瘤细胞是低效率的。这种疗法还影响迅速 分化的正常细胞，引起有害的副作用。 近些年出现了一种治疗癌症的新方法，该方法以最近刚被发现的生物学现象细 胞凋亡为基础，细胞凋亡又被称为细胞的程序化死亡或者细胞自杀（Tomei等人， 细胞凋亡：细胞死亡的分子基础。冷泉港实验室出版社，1991)。与细胞损伤导致的细胞 死亡相比，细胞凋亡是基因介导的细胞主动自毁过程并且为生物学上有意义的功能服务。 最近有这样一种观点认为，癌症是由不充分的细胞凋亡引起的（Cope，F.O and Wille，J. j, Apoptosis ：The molecular Basis of CellDeath，冷泉港实验室出版社，pp61, 1991)。 这种观点为癌症治疗开创了一种新的思路--肿瘤细胞可以通过激励细胞凋亡被杀死。以 正常发展中的诸过程为基础，细胞凋亡的调谐作用是一种控制肿瘤细胞增殖的潜在机制。 恢复肿瘤细胞中的细胞凋亡机制是一种值得尝试的方法，因为至少在理论上它将导致细胞 自杀死亡。 中药材毛叶白粉藤为葡萄科植物毛叶白粉藤的藤茎。目前，该药材被用于跌打损 伤、扭伤。风湿关节疼痛、骨折、痈疮肿毒。等疾病，尚无文献报道毛叶白粉藤或其提取物具 有诱导肿瘤细胞凋亡的功效。
技术实现思路
基于细胞的程序化死亡的研究，本专利技术的目的在于提供一种诱导肿瘤细胞凋亡的 中药提取物及其制备工艺和应用。 为了实现本能专利技术的目的，专利技术人通过大量试验研究并不懈探索，最终获得了如 下技术方案： 一种诱导肿瘤细胞凋亡的中药提取物，所述的中药提取物为毛叶白粉藤水提物。 本专利技术所述中药提取物的制备工艺，该工艺包括如下步骤：将毛叶白粉藤原料置 于提取容器中，先后用浓度为90%-95% (v/v)乙醇、70%-75% (v/v)乙醇各回流提取1-3次， 弃掉醇提液，所得药渣加水煎煮1-4次，过滤得水提液，浓缩成稠膏，干燥，粉碎，得毛叶白 粉藤水提物。 在上述诱导肿瘤细胞凋亡的中药提取物的制备工艺中，优选每次乙醇回流提取的 时间为l_3h ;优选每次药渣加水煎煮的时间为l_2h。 本专利技术所述诱导肿瘤细胞凋亡的中药提取物，其中每次乙醇回流提取的时间为 3-5h ;每次药渣加水煎煮的时间为1-2. 5h。 细胞增殖过度和细胞凋亡异常是肿瘤发生的生物学基础。因此，如何诱导细胞进 入凋亡是肿瘤治疗取得成功的关键。本专利技术人通过实验研究表明，毛叶白粉藤水提物不仅 可以抑制人喉癌ifep2细胞增殖，而且可以诱导该细胞进入凋亡。因此，本专利技术的另一个目 的在于提供一种制药用途，即：上述的毛叶白粉藤水提物在制备抑制肿瘤细胞增殖的药物 中的应用；或者，上述的毛叶白粉藤水提物在制备诱导肿瘤细胞凋亡的药物中的应用。进一 步优选地：上述的毛叶白粉藤水提物在制备抑制人喉癌ifep2细胞增殖的药物中的应用；或 者，上述的毛叶白粉藤水提物在制备诱导人喉癌ifep2细胞凋亡的药物中的应用。 与现有技术相比，本专利技术涉及的中药提取物由单一的中草药制备而成，其不仅可 以抑制肿瘤细胞增殖，而且可以诱导肿瘤细胞凋亡。另外，该提取物来源于天然植物，因此 毒副作用低，属于绿色治疗药物的范畴，可望被开发成抗肿瘤的一线用药。 【附图说明】 图1不同浓度毛叶白粉藤水提物对Ifep2细胞增殖的抑制率曲线图。 【具体实施方式】 以下是本专利技术毛叶白粉藤水提物干粉的制备实施例和效果试验例，对本专利技术做进 一步说明。但是，本专利技术的保护范围并不受限于以下实施例，凡是基于本专利技术上述内容所实 现的技术均属于本专利技术的范围。 实施例1毛叶白粉藤水提物干粉的制备 毛叶白粉藤干品lkg，粉碎，置回流提取装置中，先后用浓度为95% (v/v)乙醇12L、70% (v/v)乙醇10L各回流提取2次，每次2h，弃掉醇提液，所得药渣加水15L，煎煮2次，每次 2h，合并两次水提液，滤过，浓缩成稠膏，冷冻干燥，粉碎成细粉，过100目筛，得毛叶白粉藤 水提物干粉。 实施例2毛叶白粉藤水提物抑制肿瘤细胞生长的试验研究 取实施例1制备的毛叶白粉藤水提物干粉，分别将其干粉溶于含10%胎牛血清的1640 完全培养液，使水提物浓度分别为150、200、250、300、400、500、600μ g/mL备用。人喉癌 Η印2细胞株，用含10%胎牛血清的1640完全培养液于37°C恒温、5% C02、95%饱和湿度条 件下培养，取对数生长期的ifep2细胞，以每孔1 X 104个接种于96孔板，每孔200 μ L。过夜 培养后弃上清，将配置好的不同浓度（150、200、250、300、400、500、600μ g/mL)的毛叶白粉 藤水提物溶液分别加入培养板，并设置空白对照组（只加含10%胎牛血清的1640完全培养 液），每孔20(^1^，分别培养24、48、72 11。结束前411每孔加入511^/1111^1'1'溶液2(^匕培 养结束后弃上清，每孔加二甲基亚砜（DMSOWOOyL，避光轻微振荡lOmin。于酶标仪490nm 波长处测定各孔的吸光度A，并按下式计算抑制率：抑制率) = [1-(A实验组/ A阴性对 照）]X 100%，实验重复3次。试验结果参见图1。 根据图 1 可以看出，MTT 结果显示 150、200、250、300、400、500、600μ g / mL 的毛 叶白粉藤水提物在不同程度上均能抑制ifep2细胞的增殖，其抑制作用随浓度增加、时间的 延长而加强，呈剂量和时间依赖性。 实施例3毛叶白粉藤水提物诱导肿瘤细胞凋亡的试验研究 人喉癌Η印2细胞株，用含10%胎牛血清的1640完全培养液于37°C恒温、5% C02、95% 饱和湿度条件下培养。取对数生长期的ifep2细胞，以2X 105 /孔接种于铺有盖玻片的6孔 板中，用不同浓度（150、250、300μ g/mL)的毛叶白粉藤水提物(实施例1制备)及0. 5μ g/mL 阿霉素分别处理48h，并设置阴性对照组。培养结束后弃上清，细胞爬片用PBS洗涤三次，于 10 μ g/mL的Hoechst 33258染色液中避光孵育10 min，取出细胞爬片用PBS洗涤3次，于荧 光显微镜下观察。 Hoechst 33258荧光染色后，未经药物处理的阴性对照组细胞呈弥漫性均匀荧光， 且荧光较弱。在各用药组中，ifep2细胞在形态学上发生明显改变，核固缩呈致密的颗粒状 强荧光，尤其是毛叶白粉藤水提物高剂量组出现凋亡的典型形态学变化，可见清晰的凋亡 小体。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种诱导肿瘤细胞凋亡的中药提取物，其特征在于：所述的中药提取物为毛叶白粉藤水提物。

【技术特征摘要】
1. 一种诱导肿瘤细胞凋亡的中药提取物，其特征在于：所述的中药提取物为毛叶白粉 藤水提物。2. -种制备如权利要求1所述诱导肿瘤细胞凋亡的中药提取物的工艺，其特征在于 所述工艺包括以下步骤：将毛叶白粉藤原料置于提取容器中，先后用浓度为90%-95%v/v乙 醇、70%-75%v/v乙醇各回流提取1-3次，弃掉醇提液，所得药渣加水煎煮1-4次，过滤得水提 液，浓缩成稠膏，干燥，粉碎，得毛叶...

【专利技术属性】
技术研发人员：董燕子，
申请(专利权)人：崔新明，
类型：发明
国别省市：山东;37