一种西维因的核酸适体、衍生物及其应用制造技术

技术编号:10426215 阅读:107 留言:0更新日期:2014-09-12 16:23
本发明专利技术公开了一种西维因的核酸适体、衍生物及其应用,西维因的核酸适体的核苷酸序列为:CCTGCCACGCTCCGCAAGCTTGGTTTGGTTTCTGCAGCGATTCTTGATCGTGCATGGCTCCTTAGCCTCGTAAGCTTGGCACCCGCATCGT或其互补的核苷酸序列所示的DNA分子。本发明专利技术的西维因的核酸适体、衍生物可以用于西维因分离和检测分析。本发明专利技术的优点在于:制备步骤简单、效率高、品质均一、稳定性好、开发周期短、生产成本低、操作简单、安全性高。

【技术实现步骤摘要】
—种西维因的核酸适体、衍生物及其应用
本专利技术涉及生物
,尤其涉及一种西维因的核酸适体、衍生物及其应用。
技术介绍
氨基甲酸酯类农药是一种高效、广谱型杀虫剂,其毒理机制是抑制害虫体内胆碱酯酶,使乙酰胆碱积累,影响神经兴奋传导,从而使害虫发生痉挛、麻痹死亡,常用来处理种子,抑制害虫生长。西维因是目前应用最为广泛的广谱性杀虫剂之一,但是使用不当,在蔬菜、牧草和农作物上都会有大量的残留,动物进食了含有农药的饲料或者饮用水都可能中毒,积累大量的农药在体内,人直接进食农作物或间接进食肉类,都可能会引发中毒事件。因此,对于西维因的残留检测是一个民生问题。当前,主要检测的技术有生物传感技术、免疫检测技术、分光光度技术等。但这些方法都存在着前期处理烦琐、精度低、使用成本高等缺点。核酸适体是一类体外人工合成并具有确定二级或三级结构的单链DNA或RNA寡核苷酸分子,其能够对靶分子进行 特异性识别。通过指数富集的配基系统进化技术,经过体外筛选、扩增和富集过程可以从随机寡核苷酸库中筛选出针对多种靶分子的适体。传统SELEX技术以小分子为靶标物质筛选时,目标靶通常以在同相基质上的固定态与寡核苷酸分子结合。利于后续的分离过程,但必须在小分子上修饰活性基团才能将其与固相载体结合,因此在一定程度上会影响目标靶的构象;以农药为靶分子,对其改造时,既要保证其杀虫活性结构不被破坏又不能掩盖与核酸的结合位点。而利用溶液中的自由态可以简化筛选步骤。适体的优点包括易合成与标记、无批间差异和化学稳定性好等,因此对食品、环境中西维因农药残留检测具有耗时短、成本低、灵敏度高的特点,有很好的应用前景。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种新型SELEX技术筛选的到能够与西维因结合的适体,并提供西维因适体在残留检测分析中高灵敏和快速检测的应用方法:与其它组合化学库如肽库、抗体库相比从核酸库中筛选出适体具有简便、快速、经济等特点。本专利技术提供一种西维因适体替代免疫法和酶法在西维因农残快速检测中应用,以克服现有技术中的不足。本专利技术的技术方案:一种用于检测西维因残留的适体,它为核苷酸序列,具体序列如下:CCTGCCACGCTCCGCAAGCTTGGTTTGGTTTCTGCAGCGATTCTTGATCGTGCATGGCTCCTTAGCCTCGTAAGCTTGGCACCCGCATCGT或其互补的核苷酸序列所示的DNA分子。所述西维因适体的衍生物为进行氨基化或巯基化或同位素化修饰的核酸序列。所述西维因适体的衍生物具有相同功能用途。所述的西维因核酸适体包括置换、缺失和增加碱基后具有相同功能用途的核酸序列。所述的西维因适体,包括在核酸上偶联各种荧光素或酶或HIS标签或生物素或地高辛或纳米材料或胶体金。一种西维因适体分离西维因的应用,包括以下步骤: (1)将西维因适体偶联于磁颗粒或固体载体上; (2)将偶联载体的适体与待分离的液体组分充分混合; (3)将固液分离,清洗固相后将西维因从适体上解离,从而获得单一组分。一种西维因适体用于检测分析西维因的应用,步骤如下: (1)准备检测序列:本文档来自技高网
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【技术保护点】
一种西维因的核酸适体,其特征在于:该适体的核苷酸序列为: CCTGCCACGCTCCGCAAGCTTGGTTTGGTTTCTGCAGCGATTCTTGATCGTGCATGGCTCCTTAGCCTCGTAAGCTTGGCACCCGCATCGT或其互补的核苷酸序列所示的DNA分子。

【技术特征摘要】
1.一种西维因的核酸适体,其特征在于:该适体的核苷酸序列为:CCTGCCACGCTCCGCAAGCTTGGTTTGGTTTCTGCAGCGATTCTTGATCGTGCATGGCTCCTTAGCCTCGTAAGCTTGGCACCCGCATCGT或其互补的核苷酸序列所示的DNA分子。2.如权利要求1所述的西维因的核酸适体,其特征在于:所述西维因核酸适体序列上偶联荧光素、酶、HIS标签、生物素、地高辛、纳米材料、胶体金、荧光基团或发光物质中的一种。3.如权利要求1所述的西维因的核酸适体,其特征在于:将所述西维因核酸适体序列置换、缺失或增加碱基后具有相同功能用途的核酸序列。4.一种如权利要求1所述的西维因的核酸适体的衍生物,其特征在于:该衍生物为所述核酸适体经巯基化或同位素化修饰,得到的与所述西维因核酸适体具有相同功能的西维因核酸适体衍生物。5.如权利要求1-4任一项权利要求中所述的西维因的核酸适体或衍生物在西维因分离和检测分析中的应用。6.如权利要求1-4任一项权利要求中所述的西维因的核酸适体或衍生物分离西维因的方法...

【专利技术属性】
技术研发人员:王耘张驰周骏贵杨军凌睿
申请(专利权)人:南京市产品质量监督检验院
类型:发明
国别省市:江苏;32

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