一种微量提取辣椒单粒种子DNA的方法技术

本发明专利技术公开了一种微量提取辣椒单粒种子DNA的方法，其步骤：A、一粒辣椒种子洗净浸种；B、液氮研磨；C、加DNA提取缓冲液，混匀；D、65℃水浴10min；E、加NaAc混匀冰浴，13000r/min离心。取上清液，加异丙醇混匀，13000r/min离心。弃上清，静置干燥，加75%乙醇清洗干燥。加入双蒸水及NaAc，充分混匀，加无水乙醇混匀，-70℃深冻1h。13000r/min离心，弃上清，75%乙醇清洗干燥。将核酸溶于无菌双蒸水，-20℃保存。本发明专利技术方法获得的种子DNA纯度和浓度均可满足PCR扩增对模板DNA的要求，成本低，速度快，是一种资源节约型和环境友好型的高效提取方法。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种微量提取辣椒单粒种子DNA的方法，其步骤是：A、随机抽取辣椒干种子1粒洗净后，先将种子放入适当容器中，再缓缓倒入50～55℃水，边倒边搅拌，使种子受热均匀， 15‑20分钟后，水温降至常温，继续浸种4小时；B、在液氮中磨成粉末，转移至Eppendorf管中；C、每管再加100μl DNA提取缓冲液，混匀；D、置于65℃水浴中保温10min；E、加入25μl 3mol/L NaAc轻轻混匀，冰浴20min，13 000 r/min离心10min；取上清液置于新离心管中，加入预冷（‑20℃）的等体积异丙醇混匀，13 000 r/min离心5min；弃上清，静置干燥后，用预冷的75%乙醇清洗后干燥；加入20μl无菌双蒸水及2μl 3mol/L NaAc，充分混匀，加入50μl无水乙醇轻轻混匀，置于‑70℃深冻1h；13 000 r/min离心5 min，弃上清，用预冷的75%乙醇清洗后干燥；将核酸溶于5μl无菌双蒸水，‑20℃保存备用。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王飞，姚明华，李宁，焦春海，
申请(专利权)人：湖北省农业科学院经济作物研究所，
类型：发明
国别省市：湖北;42