【技术实现步骤摘要】
一种快速提取荷花花瓣总RNA的方法
本专利技术涉及分子生物学领域中提取总RNA (Ribonucleic Acid,核糖核酸)的方法,尤其涉及一种快速提取荷花花瓣总RNA的方法;具体地说,是以一种次级代谢产物含量高的荷花花瓣为材料,快速、经济和有效地提取高质量的总RNA的方法。
技术介绍
骑花XNe I umbo /wci/era),又称莲花,水芙蓉等,属睡莲科多年生水生草本花丼。荷花在我国已有近3000年的栽培历史,是一种集观赏、食用和药用于一身的重要经济作物。目前对荷花在分子生物学方面的研究还很缺乏,主要集中于分子标记研究品种多态性,一些功能基因的克隆等方面。目前,迫切需要一种有效地提取荷花花瓣的总RNA的方法,为深层地研究与花的发育、花的香气形成、花瓣中与次级代谢物合成以及荷花感光感温等相关的功能基因的研究奠定基础,进而用于培育荷花新品种。 商业化的Trizol (试剂盒)虽然能简单快速地提取植物总RNA,但是无法有效地提取荷花花瓣的总RNA,分析可能是由于RNA被多糖多酚物质吸附不能得到有效的沉淀所致。有报道利用改良的CTAB-LiCl法提取荷花花瓣的总RNA (杨峰,李创等,2009),但是所用试剂繁多,而且耗时也很长,增大了提取过程中RNA降解的可能性,实际使用效果欠佳。虽然快速提取植物总RNA的试剂盒采用吸附核酸的树脂或膜,但经实践证明,依然不能解决上述问题,同时存在步骤多和效率低的问题。因此,迫切需要一种简单快速且经济的提取荷花花瓣总RNA的方法以便用于后续的分子生物学实验的研究。
技术实现思路
本专利技术的目的就在于克服现有技术存 ...
【技术保护点】
一种快速提取荷花花瓣总RNA的方法,其特征在于包括下列步骤:①称取0.2g荷花花瓣于液氮预冷的研钵中迅速充分地研磨成粉末状;②将粉末状样品转入‑1.5mL RNase free的离心管中,加入1mL 65oC预热的细胞裂解液,混匀后继续65oC温育10min,期间摇匀2~3次; ③加入300μL的乙酸钾溶液,上下温和颠倒混匀15~20次,室温静置3~5min;④4oC,12000rpm,离心5min,取上清于一新的离心管中;⑤加入300μL氯仿:异戊醇=24:1,震荡15s,4oC,12000rpm,离心30s使分层,取上层水相于一新的离心管中,重复此步骤1~2次;⑥加入与上层水相等体积的‑20oC预冷的异丙醇,置于‑20oC冰箱30min;⑦在4oC、12000rpm的条件下,离心5min使RNA沉淀;⑧移去上清,用1mL的‑20 oC预冷的75%乙醇洗涤沉淀两次,在超净工作台内吹干后,加入10~20μL的焦炭酸二乙酯处理水溶解RNA,于‑80 oC保存; 所述的1升细胞裂解液中含有下列组分:十二烷基硫酸钠 40克三羟甲基氨基甲烷盐 ...
【技术特征摘要】
1.一种快速提取荷花花瓣总RNA的方法,其特征在于包括下列步骤: ①称取0.2g荷花花瓣于液氮预冷的研钵中迅速充分地研磨成粉末状; ②将粉末状样品转入-1.5mL RNase free的离心管中,加入ImL 65°C预热的细胞裂解液,混匀后继续65°C温育lOmin,期间摇匀2~3次;③加入300μ L的乙酸钾溶液,上下温和颠倒混匀15~20次,室温静置3~5min ; ④4°C,12000rpm,离心5min,取上清于一新的离心管中; ⑤加入300μ L氯仿:异戊醇=24:1,震荡15s,4°C,12000rpm,离心30s使分层,取...
【专利技术属性】
技术研发人员:王坤,邓娇,杨平仿,
申请(专利权)人:中国科学院武汉植物园,
类型:发明
国别省市:湖北;42
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