【技术实现步骤摘要】
【技术保护点】
一种大规模合成长链RNA药物的生产新工艺,其特征在于,具体步骤包括:第一步:设计双链DNA转录模板:所述的双链DNA转录模板由正义链和反义链组成,其中正义链由T7启动子序列和连接在T7启动子序列后的与长链RNA药物序列一致的DNA序列组成,反义链是与正义链序列完全互补的DNA序列;根据上述设计的双链DNA转录模板设计两条DNA引物,其中正向引物的序列与DNA转录模板正义链从5’端起始的一部分的序列相同,反向引物为的序列与DNA转录模板反义链从5’端起始的一部分的序列相同;正向引物3’端序列和反向引物3’端序列之间至少有10个连续碱基完全反向互补;第二步:模板制备:化学合成得到第一步中的两条DNA引物,按摩尔数比1∶1混合后退火形成不完全互补双链;在pfu DNA聚合酶的作用下补平后形成第一步中的双链DNA转录模板;所述的双链DNA转录模板由双链RNA聚合酶启动子序列和连接在双链RNA聚合酶启动子序列后的与长链RNA药物序列对应的DNA序列两部分组成;第三步:模板纯化:将第二步得到的双链DNA转录模板用异丙醇沉淀,然后用乙醇洗涤后用无内毒素水溶解,得到纯化后的双链DNA转录模板;第四步: ...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员:张平静,李铁军,周宋峰,朱远源,陈建新,陆毅祥,文锋,
申请(专利权)人:百奥迈科生物技术有限公司,
类型:发明
国别省市:江苏;32
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