冷冻原肠中微生物基因组DNA的提取方法技术

本发明专利技术公开了一种冷冻原肠中微生物基因组DNA的提取方法，在细胞裂解以前结合采用人工破碎、震荡洗脱、金属网过滤和梯度离心的方法同时对较多样品（10g）进行前处理。本发明专利技术既富集了细胞，解决了样品中微生物含量相对偏低的问题，也有效的去除了污染物的干扰，提高了DNA提取的效率和纯度。本发明专利技术具有较好的通用性，提取的冷冻原肠微生物基因组DNA的OD260/OD230及OD260/OD280接近标准值，可直接进行基因扩增和微生物多样性分析。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种冷冻原肠中微生物基因组DNA的提取方法，其特征是：包括下列步骤:（1）常温解冻冷冻原肠样品，在超净工作台内用高压灭菌处理过的剪刀、镊子将原肠纵向剪开，再剪碎，搅拌混匀；（2）称取混匀后的样品10 g加入无菌的250 mL三角烧瓶，再向三角烧瓶加入10 mL含0.1% Tween80的灭菌生理盐水，密封三角烧瓶；（3）将三角烧瓶震荡1 min，然后立即置冰上2 min；重复本步骤3次；（4）在超净工作台内用高压灭菌处理过的100目金属滤网过滤样品，收集滤液；（5）将滤网中肠衣样品重新移回三角烧瓶，再向三角烧瓶加入10 mL含0.1% Tween80的灭菌生理盐水，密封三角烧瓶；重复步骤（3）...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：仇保丰，宋鸿雁，陈峰，邵义祥，刘文斌，顾炳泉，高逢结，李建，
申请(专利权)人：中华人民共和国南通出入境检验检疫局，南通大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32