一种水蛭高F值寡肽及其酶解制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种水蛭高F值寡肽及其酶解制备方法与应用，制备方法包括：（1）水蛭干体初步清洗除杂，高速粉碎；（2）原料碱预浸泡；（3）碱性蛋白酶AlcalaseAF2.4L结合木瓜蛋白酶双酶水解；（4）采用活性炭粉静态吸附脱除芳香族氨基酸；（5）以凝胶过滤层析柱进一步分离纯化，收集分离产物，冷冻干燥，获得分子量低于2000Da，F值（Fischerratio，即支链氨基酸与芳香族氨基酸摩尔含量的比值）高于20的水蛭寡肽粉。本发明专利技术公开的制备过程简单，选用碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶两种商业用酶，易于工业生产，产率较高，具有一定的抗凝血效果，并为高F值类产品增加了新来源。

【技术实现步骤摘要】
一种水蛭高F值寡肽及其酶解制备方法与应用
本专利技术涉及生物肽及其制备方法与应用，具体涉及一种水蛭高F值寡肽及其酶解制备方法与应用。
技术介绍
高F值寡肽是一种支链氨基酸和芳香族氨基酸摩尔数比值大于20的生物活性寡肽混合物。它不仅能减轻肝性脑病症状、改善肝功能和肝昏迷程度，还对蛋白质营养失常患者有积极作用。在实际生产中，高F值寡肽可以广泛应用在治疗肝脏疾病的药品、护肝食品、外科手术病人的蛋白营养食品、消化酶缺乏患者的肠道营养剂和高强度劳动者的食品营养强化剂等方面。高F寡肽混合物较支链氨基酸配方更具有实际效用，其独特生理功能已受到多方人士的高度关注，具有良好的发展前景。水蛭俗称蚂蝗，是中国传统的药用水生动物，具有治疗中风、淤血肿痛、高血压、闭经等疾病的功效，其中以宽体金线蛭最为常见。宽体金线蛭(Whitmania Pigra),隶属于真輕亚纲(Euhirdinea)、无吻輕目(Arhynchobdelliada)、黄輕科(Haemopidae)、金线輕属(Whimania),《中国药典》2010年版中记载为“蚂幢W.pigra Whitman”,广泛分布于我国大部分地区的湖泊、本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种水蛭高F值寡肽的酶解制备方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）将水蛭干燥体用清水洗净，并于去离子水中浸泡8~24h，再于分析纯乙醇中浸泡8~24h，干燥粉碎，得到水蛭干粉，置于‑4~‑20℃冷藏备用；（2）称步骤（1）得到的水蛭干粉，加水溶解，按干粉与水重量比为1~8：100配制悬浊液，调整pH 至8~11，浸泡10~60min，再调节pH至7.5~11，加入碱性蛋白酶，反应温度保持在30~80℃，酶解1~6h；煮沸5~30min，灭酶活，冷却，4000~10000r/min离心5~20min，收集上清液，调节pH至7~10，加入木瓜蛋白酶，反应温度保持在25~80℃，酶解1~6h；煮沸5...

【技术特征摘要】
1.一种水蛭高F值寡肽的酶解制备方法，其特征在于，包括如下步骤: (1)将水蛭干燥体用清水洗净，并于去离子水中浸泡8~24h，再于分析纯乙醇中浸泡8~24h，干燥粉碎，得到水蛭干粉，置于-4'20°C冷藏备用； (2)称步骤(1)得到的水蛭干粉，加水溶解，按干粉与水重量比为广8:100配制悬浊液，调整pH至8~11，浸泡l(T60min，再调节pH至7.5~11，加入碱性蛋白酶，反应温度保持在30^800C，酶解I~6h ;煮沸5~30min，灭酶活，冷却，400(T10000r/min离心5~20min，收集上清液，调节PH至疒10，加入木瓜蛋白酶，反应温度保持在25~80°C，酶解I~6h ;煮沸5~30min，灭酶活，冷却，400(T10000r/min离心5~20min，收集上清液，调整pH至2~7，按活性炭重量与上清液体积比0.2~20g:100mL加入活性炭，在25~60°C下吸附3(T100min，400(T10000r/min离心5~30min，收集上清液，过凝胶过滤层析，以去离子水洗脱，收集在214nm吸收值大于2，在280nm吸收值小于0.2，分子量在300— 1500Da的洗脱液，富集浓缩，冷冻干燥，得到水蛭高F值寡肽。2.根据权利要求1所述的水蛭高F值寡肽的酶解制备方法，其特征在于:所述的水蛭为宽体金线蛭Whitmania Pigra03.根据权利要求1所述的水蛭高F值寡肽的酶解制备方法，其特征在于:步骤(1)和步骤(2 )中所述pH调至以8~11，调节pH至7...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴晖，任尧，赖富饶，杨祎静，李晓凤，
申请(专利权)人：华南理工大学，
类型：发明
国别省市：广东;44