一种吸血水蛭活体多次提取天然水蛭素方法技术

本发明专利技术提供一种吸血水蛭活体多次提取天然水蛭素方法，它包括先从吸血水蛭活体中提取天然水蛭素粗品，然后经过分离纯化得到天然水蛭素粉，所述天然水蛭素粗品的提取是先制备特异性诱导液，并将其灌入肠管中得到含特异性诱导液肠管；再将含特异性诱导液肠管投喂给吸血水蛭，然后提取吸血水蛭的唾液或将吸血水蛭磨浆，制得浆液，即得到天然水蛭素粗品；接着采用常规的生化分离方法进行分离纯化制得天然水蛭素粉。本发明专利技术工艺简单、提取率高，且明显降低吸血水蛭提取天然水蛭素粗品后的死亡率，并可有效提高生物资源利用率，从而显著降低生产成本，为提取水蛭体内主要有效活性物质如天然水蛭素提供了一条便捷的途径。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种从动物体中提取有效活性成分的生产方法，特别是以吸血水蛭为原料生产天然水蛭素的方法。
技术介绍
水蛭，俗称蚂蟥，是蛭纲动物的总称。它是我国传统名贵中药材，具有破血通经、消积散瘀、消肿解毒等功能，临床上用于治疗跌打损伤、目赤肿痛、脑出血、肝硬化、高血压、高脂血症等症，它是我国35种重要活血化瘀中药材之一。水蛭依据其食性不同,可分为非吸血水蛭和吸血水蛭两大类 非吸血水蛭，它主要以螺类(如田螺、福寿螺等)、河蛘等软体动物的汁液为食，不吸血，主产于长江沿岸省份(如湖北、江苏等)的河流、湖泊。常见的是宽体金线蛭(勝Pigra Whitman)，它是我国药材市场上的主流品种，其体内含有目前尚未清楚的某些活血化瘀成分，但不含水蛭素。吸血水蛭，主要分布在我国华南的广东、广西等省区，生活在稻田、水沟、江河、池塘和湖泊中，以吸食人和脊椎动物血液为生，其中较为常见的是菲牛蛭iPoecilobdellaManillensis Lesson,俗称金边蚂蟥，它已被广西壮族自治区食品药品监督管理局收录入 广西壮族自治区壮药质量标准 >> 第二卷(2011年版))。科学研究表明，由吸血水蛭的唾液腺及其所分泌的唾液中含有丰富的水蛭素hirudin、透明质酸酶Orgelase以及血管扩张剂Vasolilator和麻醉剂Anaesthetic等多种生物活性物质,其中水蛭素是这些活性物质中数量最多、活性最显著并且研究得最多、最深入、最有药用价值和最具发展潜力的一种活性物质。天然水蛭素于1904年被发现后，经化学分析测定，它是由65个氨基酸残基组成的单链多肽，其分子量较低，为7000D。一直来，世界很多国家的许多科学家都研究证实，水蛭素是迄今为止世界上所发现的已知物质中最强的天然抗凝血酶物质，对人类心脑血管疾病尤其是脑血栓等血栓性疾病有较高的疗效，其防治效果是任何物质(包括目前临床上常规使用的阿司匹林和肝素)所难以比拟的，这是因为一方面，天然水蛭素的抗栓功能不需要其它因子的参与，加上其分子量远比肝素要小，渗透性强，容易到达血栓内部，并将其溶解；另一方面，天然水蛭素不会像肝素等抗凝剂那样易引起出血等难以克服的副作用，从而使天然水蛭素成为世界公认的防治心脑血管疾病最好的天然药物。目前，能够从水蛭体内提取天然水蛭素的吸血水蛭仅分布于华南的广东、广西和海南等少数的几个省区，其分布范围较窄，且品种和数量均有限，加上天然水蛭素都是存在于吸血水蛭唾液腺及其所分泌的唾液中，在这以前，国内外大多都是采用传统的提取工艺和技术，即选用吸血水蛭的头部或整体进行匀浆或粉碎后，再利用水一丙酮混合剂或生理盐水萃取，然后经过乙醇分级沉淀、普通层析和等电聚焦等步骤提取这些生物活性物质。如默克专利股份有限公司在专利申请号为CN00808873. X《来源于马尼拉水蛭的透明质酸酶，分离、纯化和重组生产方法》中公开的的是用酸性缓冲液匀浆马尼拉水蛭中的水蛭的头离心后，用离子交换层析等方法分离纯化透明质酸酶；如胡维民在专利申请号CN92107076《医用天然水蛭素的提取方法》中公开了用整条水蛭匀浆后提取水蛭素；又如胡远华在专利申请号CN95105650《动物血水蛭水解法及其水蛭水解血》中公开的是使食血水蛭充分吸取动物血数分钟或数小时后用物理或化学方法使血液从水蛭体内流出，收集流出的橙红色血液，本法能有效降解动物血并使之含有医用价值的水蛭素等水蛭分泌物。对现有技术中天然水蛭素的生产方法检索如下 I、中国专利号ZL03113566.8，专利技术名称从菲牛蛭活体中提取天然水蛭素的方法。该专利技术是将清洗干净的菲牛蛭用诱导物质充分喂饱菲牛蛭，然后对菲牛蛭进行挤压使其分泌出唾液(水蛭素粗品)，所采用的诱导物质包括无机盐、有机酸和浓度较低的无机酸，选用乙酸、盐酸、磷酸、柠檬酸、精氨酸、赖氨酸、抗坏血酸、胱氨酸、氯化钠、氯化钾、碳酸钠、磷酸钠或磷酸二氢钾的一种或两种、两种以上的混合物，其重量百分浓度为O. 1_3%，水溶液的PH在4. 5-6. 8之间。具体方法是先配置好纯净的混合水溶液，让菲牛蛭充分吃饱，然后对其进行挤压，使其分泌出唾液，每隔一周或10天提取一次，每条鲜活菲牛蛭可以反复提取6-7 次，每次能提取水蛭素粗品6-7毫升左右。该法的缺点是对充分吃饱的菲牛蛭经人工挤压使其分泌出唾液后，菲牛蛭的口腔损伤严重，致使其很容易感染疾病或因体质虚弱很难恢复而造成大批死亡，同时，两次间提取的时间间隔太短，菲牛蛭在得不到营养的补充，机体尚未得到充分恢复后就进入下一次的提取，这样，一方面提取出来的水蛭素粗品数量少，水蛭素含量低，更重要的是另一方面会造成菲牛蛭的死亡明显升高，从而直接导致生产成本过闻。2、中国专利申请号201010526681. 7 专利技术名称一种从天然水蛭中提取高抗凝活性水蛭素的方法。该专利技术是将氯化钠、一水乙酰半胱氨酸盐酸盐、赖氨酸、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶中的两种或多种物质进行组合，溶解于去离子水中配制成刺激液，刺激液中各物质的重量百分浓度为O. 01 5%,其中酶浓度在100U 300U/ml。将活体水蛭称重后置于容器中，按水蛭重量比刺激液体积为I : I 5倍加入所述刺激液，刺激3小时使水蛭分泌分泌液，分泌液经过16000 20000r/min离心分离得水蛭素粗品，经O. 2微米不锈钢膜微滤，再经10000 3000道尔顿分子量的有机膜超滤，再进行反渗透纳滤浓缩，然后按固体比液体的重量体积比为I :6 10加入药用淀粉调配，经喷雾干燥，得水蛭素成品。最终水蛭素提取得率在30%以上，产品活性单位稳定在600AT-U/g至1000AT-U/g。该法的缺点是刺激液中含有中性蛋白酶、木瓜蛋白酶，这些酶类物质均能破坏水蛭素的化学结构而致使其活性降低进而影响水蛭素的疗效。3、《黑龙江医药科学》2010年第33卷第04期87页中“水蛭素的提取及含量测定”分别介绍了用一种不同浓度的氯化钠或其与L-精氨酸组成的诱导溶液对活体水蛭进行诱导，收集水蛭唾液腺分泌物，测定水蛭素含量的报道。该法的缺点是采用化学物质作为诱导溶液。4、中国专利申请号201110237495. 6，专利技术名称一种天然水蛭素的生产方法。该专利技术经含天然水蛭素液体的提取、酸沉、加热、脱水和干燥等步骤，所得到的天然水蛭素粉末。该法主要是用水蛭素液体即水蛭素粗品进行分离化的过程。5、中国专利申请号200710026461. 6，专利技术名称一种以菲牛蛭唾液为原料的水蛭素生产工艺。该专利技术将菲牛蛭唾液冷冻，然后再解冻，用生理盐水提取，提取液煮沸、过滤、取滤液。固形物用生理盐水提取，过滤。滤液煮沸后迅速冷却，冷藏过夜。离心，取上清液减压浓缩后再冷冻干燥成冻干粉。该法是用水蛭素唾液即水蛭素粗品进行分离化的过程，其步骤繁多。6、中国专利申请号201010604457. 5，专利技术名称用电刺激活体水蛭提取水蛭素的方法。该专利技术采用电流对生物体腺体得刺激作用，直接使用直流弱电刺激活体水蛭批量提取高纯度水蛭素的方式。该专利技术在刺激提取水蛭素的过程中，加入了保护剂，而后提取的水蛭素经过纳滤除水，减压喷雾干燥，制备成粉状水蛭素。该法的缺点是直接使用直流弱电刺激活体水蛭时，水蛭就会立即收缩成坚硬的一团(因水蛭为无脊椎动物)，难以提取水蛭素本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种吸血水蛭活体多次提取天然水蛭素方法，它包括先从吸血水蛭活体中提取天然水蛭素粗品，然后经过分离纯化得到天然水蛭素粉，其特征在于：所述天然水蛭素粗品的提取是先制备特异性诱导液，并将其灌入肠管中得到含特异性诱导液肠管；再将含特异性诱导液肠管投喂给吸血水蛭，然后提取吸血水蛭的唾液或将吸血水蛭磨浆，制成浆液，即得到天然水蛭素粗品；所述特异性诱导液的制备为：在每1000ml特异性诱导液中含有蚯蚓提取液10～300ml，壳聚糖5～50g，黄芪多糖1～20g，葡萄糖粉1～30g；先用适量水溶解上述粉状物质后，加入蚯蚓提取液，再用水加至1000ml，即得到特异性诱导液，备用。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：周维官，刘晶，吴玉琴，
申请(专利权)人：周维官，刘晶，吴玉琴，
类型：发明
国别省市：