HBV聚合酶突变体制造技术

本发明专利技术涉及聚合酶HBV突变体多肽，其包含聚合酶活性被功能性破坏的突变的聚合酶结构域，以及涉及包含此种聚合酶突变体多肽的融合蛋白。本发明专利技术还涉及用于表达所述聚合酶突变体多肽的核酸分子和表达载体，以及涉及组合物，所述组合物可用于提高对HBV的免疫应答且目标在于提供针对HBV感染的保护性或治疗性作用。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】HBV聚合酶突变体专利
本专利技术涉及聚合酶HBV突变体多肽，其包含聚合酶活性被功能性破坏的突变的聚合酶结构域，以及涉及包含此种聚合酶突变体多肽的融合蛋白。本专利技术还涉及用于表达所述聚合酶突变体多肽的核酸分子和表达载体，以及涉及组合物，所述组合物可用于提高对HBV的免疫应答且目标在于提供针对HBV感染的保护性或治疗性作用。本专利技术很特别的兴趣在于免疫治疗领域,更特别是用于治疗感染了HBV的患者，尤其是慢性感染的那些。专利技术背景乙型肝炎是重要的公众健康问题，全世界有超过3亿5千万人慢性感染,其中的20-40%有发展为慢性肝疾病、肝硬化和肝细胞癌的风险。尽管存在有效的保护性疫苗,但是乙肝病毒(HBV)感染在许多国家(甚至是一些发达国家)依然泛滥,据估计全世界每年有四百五十万的新感染病例。与WHO所建议的进行全面疫苗接种不同的是,全疗程疫苗接种的覆盖为亚洲的25%至欧洲的75-90%不等。目前乙型肝炎是第十位的致死原因(每年大约一百万例死亡)，而HBV相关的肝癌则排名第五位最常见的癌症。HBV感染的地理分布并不平衡，在西方国家的患病率低于1%，而在东南国家、非洲大部及赤道以南的美本文档来自技高网...

【技术保护点】
突变体聚合酶多肽，其包含具有内部缺失的突变的聚合酶结构域，所述内部缺失功能性地破坏聚合酶活性,其中所述内部缺失包含至少YMDD基序，所述YMDD基序天然存在于天然HBV聚合酶的聚合酶结构域中。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2011.07.12 EP 11305909.1;2012.04.18 EP 12305450.41.突变体多肽，其包含具有内部缺失的突变的聚合酶结构域，所述内部缺失功能性地破坏聚合酶活性，其中所述内部缺失是最少4个氨基酸残基以及最多30个氨基酸残基并且包含至少YMDD基序，所述YMDD基序天然存在于天然HBV聚合酶的聚合酶结构域中，其中所述突变的聚合酶结构域包含SEQIDNO:1所示的氨基酸序列但缺少至少位置203处的Tyr残基、位置204处的Met残基、位置205处的Asp残基、位置206处的Asp残基、位置207处的Val残基、位置208处的Val残基和位置209处的Leu残基。2.权利要求1的突变体多肽，其中所述突变的聚合酶结构域包含SEQIDNO:2所示氨基酸序列。3.权利要求1的突变体多肽，其还包含突变的RNaseH结构域，所述突变的RNaseH结构域包含功能性地破坏天然HBV聚合酶正常展现的RNaseH活性的一个或多个氨基酸残基的突变。4.权利要求3的突变体多肽，其中所述突变的RNaseH结构域中所包含的所述一个或多个突变选自：-最少8个氨基酸和最多60个氨基酸的缺失，包括至少SEQIDNO:3从位置39处的Glu(E)残基延伸至位置46处的Ala(A)残基的部分；-用除了Asp(D)之外的氨基酸残基取代SEQIDNO:3的位置10处的Asp(D)残基；-用除了Val(V)之外的氨基酸残基取代SEQIDNO:3的位置90处的Val(V)残基；-用除了Thr(T)或Ala(A)之外的氨基酸残基取代SEQIDNO:3的位置97处的Thr(T)或Ala(A)残基；-用除了Asp(D)之外的氨基酸残基取代SEQIDNO:3的位置98处的Asp(D)残基；和-其任意组合。5.权利要求4的突变体多肽，其中SEQIDNO:3的位置10、90、97或98处的所述取代的残基是用His(H)残基或用Tyr(Y)残基来置换。6.权利要求5的突变体多肽，其中SEQIDNO:3的位置10处的所述残基是用His(H)残基取代，SEQIDNO:3的位置90处的所述残基是用Tyr(Y)残基取代，SEQIDNO:3的位置97处的所述残基是用Tyr(Y)残基取代和/或SEQIDNO:3的位置98处的所述残基是用His(H)残基取代。7.权利要求4的突变体多肽，其中所述突变的RNaseH结构域中所包含的缺失包含SEQIDNO:3中从位置39处的Glu(E)残基延伸至位置63处的Leu(L)残基的至少25个氨基酸的部分。8.权利要求7的突变体多肽，其中所述突变的RNaseH结构域中所包含的缺失包含SEQIDNO:3中从位置31处的Xaa残基延伸至位置63处的Leu(L)残基的至少33个氨基酸的部分。9.权利要求8的突变体多肽，其中所述突变的RNaseH结构域包含SEQIDNO:3中所示的氨基酸序列，但却(a)缺少从位置31处的残基Xaa延伸至位置63处的Leu(L)残基的33个氨基酸残基的部分并且包含(b)用His(H)残基取代位置10处的Asp(D)残基(D689H)；(c)用Tyr(Y)残基取代位置90处的Val(V)残基(V769Y)；(d)用Tyr(Y)残基取代位置97处的残基(T/A776Y)和(e)用His(H)残基取代位置98处的Asp(D)残基(D777H)。10.权利要求9的突变体多肽，其包含突变的RNaseH结构域，所述RNaseH结构域包含SEQIDNO:4所示氨基酸序列。11.权利要求1的突变体多肽，其包含SEQIDNO:5所示氨基酸序列。12.权利要求1的突变体多肽，与一个或多个另外的多肽或肽组合使用。13.权利要求12的突变体多肽，其中所述一个或多个另外的多肽或肽是选自HBc、HBs、X蛋白和其免疫原性片段的HBV多肽或肽。14.权利要求13的突变体多肽，其中所述另外的HBV多肽或肽源自基因型DHBV。15.融合蛋白，其包含权利要求1-14任一项的突变体多肽和HBV核心多肽。16.权利要求15的融合蛋白，其中所述HBV核心多肽是C-端截短的。17.权利要求16的融合蛋白，其中所述C-端截短的HBV核心多肽是在残基148处截短的。18.权利要求16的融合蛋白，其中所述C-端截短的HBV核心多肽是在残基149处截短的。19.权利要求15的融合蛋白，其中所述HBV核心多肽符合读框地融合至所述突变体多肽的N-端。20.权利要求19的融合蛋白，其中所述融合蛋白包含SEQIDNO:6所示氨基酸序列。21.融合蛋白，其包含权利要求1-14任一项的突变体多肽和一个或多个HBsAg免疫原性结构域；或者权利要求15-20任一项的融合蛋白，其还包含一个或多个HBsAg免疫原性结构域。22.权利要求21的融合蛋白，在其N-端包含融合至所述突变体多肽的核心多肽和一个或多个HBsAg免疫原性结构域，所述一个或多个HBsAg免疫原性结构域融合至所述突变的聚合酶结构域中的内部缺失的位置中和/或融合至所述突变的RNaseH结构域中的缺失的位置中。23.权利要求22的融合蛋白，其包含SEQIDNO:7-9任一项所示氨基酸序列。24.权利要求23的融合蛋白，其包含SEQIDNO:8所示氨基酸序列。25.权利要求1-14任一项的突变体多肽或权利要求15-24任一项的融合蛋白，其符合读框地融合至信号肽和融合至跨膜肽。26.权利要求25的突变体多肽或融合蛋白，其包含SEQIDNO:10-12任一项所示氨基酸序列。27.核酸分子，其编码权利要求1-14和25-26任一项的突变体多肽或权利要求15-26任一项的融合蛋白。28.权利要求27的核酸分子，其选自：-核酸分子，其编码包含聚合酶结构域的突变体多肽，所述聚合酶结构域具有SEQIDNO:1或2所示氨基酸序列；-核酸分子，其编码包含RNaseH结构域的突变体多肽，所述RNaseH结构域具有SEQIDNO:3或4所示氨基酸序列；-核酸分子，其编码突变体多肽，所述突变体多肽包含SEQIDNO:5所示氨基酸序列；或-核酸分子，其编码融合蛋白，所述融合蛋白包含SEQIDNO:6-12任一项所示氨基酸序列。29.权利要求27的核酸分子，其包含SEQIDNO:13-17任一项所示核苷酸序列。30.载体，其包含权利要求27-29任一项的核酸分子。31.权利要求30的载体，其中所述载体是用于在高等真核细胞或生物体中表达的质粒或病毒载体。32.权利要求31的载体，其中所述载体是病毒载体，其源自反转录病毒、腺病毒、腺病毒...

【专利技术属性】
技术研发人员：P·马丁，N·西尔韦斯特雷，JB·马钱德，
申请(专利权)人：特兰斯吉恩股份有限公司，
类型：发明
国别省市：法国;FR