青蒿素在制备防治神经性疾病药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了青蒿素及其衍生物在制备防治神经性疾病药物中的应用。本发明专利技术以大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12神经细胞株、视网膜神经细胞株RGC-5和原代皮质神经元为代表作为实验对象，以硝普钠、双氧水摸拟诱导神经细胞的氧化应激和细胞凋亡等细胞损伤，研究发现青蒿素在硝普钠、双氧水诱导的细胞损伤中具有保护作用，并初步探讨了青蒿素及其衍生物的保护作用机制，结果说明青蒿素及其衍生物可作为神经保护药用于预防和治疗各种神经性疾病，如各种神经退行性疾病、急慢性神经变性疾病、神经性眼病等，这些主要与氧化应激损伤、细胞凋亡有关的神经性疾病。本发明专利技术为神经性疾病的治疗和预防带来了新方向。

【技术实现步骤摘要】
青蒿素在制备防治神经性疾病药物中的应用
本专利技术涉及青蒿素在制备防治神经性疾病药物中的应用。
技术介绍
青蒿素(artemisinin)是从菊科植物艾属黄花蒿中提取的一种化合物，已被广泛用于各型疟疾的治疗，青蒿素对疟原虫的杀灭作用主要作用于红细胞内期，对于红细胞外期以及红细胞前期则效果很弱。除了具有突出的抗疟作用外，青蒿素还有显著的抗菌、抗病毒作用，其抗菌谱包括表皮葡萄球菌、卡他球菌、炭疽杆菌、白喉杆菌，同时对金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、痢疾杆菌、结核秆菌等也有一定的抑制作用。青蒿中提取得到的谷甾醇和豆甾醇亦有抗病毒作用。另，青蒿素还具有免疫调节作用，对体液免疫有明显的抑制作用，对细胞免疫则有一定的促进作用。青蒿素类物资在临床应用时，毒性较低，使用安全，一般无明显不良反应。关于青蒿素在中枢神经系统疾病的作用，目前的研究还很少，有研究显示二氢青蒿素对体外培养的小鼠神经母细胞瘤N2a的细胞增殖有一定的抑制作用，提示青蒿素对中枢神经系统的肿瘤可能有一定的抑制作用。有关青蒿素对神经细胞的保护作用及其作为神经保护剂治疗神经退行性疾病及视神经病变还未见有报道。NO是一种较小的生物活性分子，在较低浓度下，能参与脑内许多生理功能的调节，尽管其化学结构简单，却能以相对特异的方式控制神经元的功能或生理功能；而在较高浓度下，NO对人皮层神经元和神经细胞具有毒性作用。作为外源性NO供体，硝普钠（SNP）制备的神经元损伤模型是相关实验研究的理想体外实验模型。当代医学的进步延长了人类的生命，而由此导致老年急慢性神经性疾病的上升，例如阿耳茨海默氏症、中风、帕金森症等。这些神经性疾病以疾病进程中特定神经元变性的不断发展为特征。由于成熟神经元细胞在其死亡后不能再生，在上述神经性疾病中神经元的死亡可能导致大脑基本功能(包括识别、感觉和行动功能)的不能治愈的损伤以及由此产生的经济和社会的过重负担。氧化应激(oxidativestress)和细胞凋亡(apoptosis)被认为是神经元死亡的主要途径，氧化应激(oxidativestress)和多种神经性疾病（如各种神经退行性疾病及神经性眼病）有关。目前，对青蒿素类药物对神经细胞的作用了解不多，同时，青蒿素在神经细胞的氧化应激和细胞凋亡中是否具有保护作用仍不清楚。
技术实现思路
为了解决上述问题，本专利技术以大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12神经细胞株、视网膜神经细胞株RGC-5和原代皮质神经元为代表，作为实验对象，以硝普钠(SNP)、双氧水(H2O2)来摸拟诱导神经细胞的氧化应激和细胞凋亡，发现青蒿素及其衍生物在硝普钠、双氧水诱导的相应细胞损伤中具有保护作用，并初步探讨了青蒿素及其衍生物保护作用的机制，说明青蒿素及其衍生物可作为神经保护药用于预防和治疗各种神经性疾病，如各种神经退行性疾病、急慢性神经变性疾病、神经性眼病等，这些主要与氧化应激损伤、细胞凋亡有关的神经性疾病。本专利技术的目的在于提供青蒿素及其衍生物在制备防治神经性疾病药物中的应用。本专利技术所采取的技术方案是：青蒿素及其衍生物在制备防治神经性疾病药物中的应用。进一步的，上述的神经性疾病包括急慢性神经变性疾病、神经性眼科疾病。进一步的，上述的神经性疾病为与氧化应激损伤相关的神经性疾病。进一步的，上述的青蒿素衍生物为以青蒿素为母核的化合物或其药物可接受的盐。进一步的，上述的以青蒿素为母核的化合物选自青蒿素甲醚、青蒿琥酯、二氢青蒿素、去氧青蒿素。本专利技术的有益效果是：1）本专利技术证明了青蒿素及其衍生物在SNP、H2O2引发的神经细胞损伤中具有一定的保护作用，且初步探索了青蒿素及其衍生物的作用机制，其可能是通过激活或者部分激活MAPK/Erk信号通路来实现在SNP损伤神经细胞中的保护作用，由于青蒿素类药物已经用于临床，研究这些药物的神经保护作用，对于寻找其可能靶点、新的药理作用，对该类药物的安全使用具有重要的意义。2）本专利技术说明了青蒿素及其衍生物可作为神经保护药用于预防和治疗各种神经性疾病，如各种神经退行性疾病、急慢性神经变性疾病、神经性眼病等，为神经性疾病的治疗和预防带来了新方向。附图说明图1为PC12细胞在不同浓度的SNP处理的细胞活力情况，#表示P<0.05，##P<0.01；图2为不同浓度的青蒿素在SNP损伤PC12细胞中的保护作用，#表示P<0.05，##表示P<0.01；图3为Hochest染色检测青蒿素在SNP诱发PC12细胞凋亡中的保护作用；图4是对图3中细胞凋亡数目的统计分析，**P<0.01，##表示P<0.01；图5为在抑制剂PD98059存在下青蒿素在SNP损伤PC12细胞中的保护情况，A为青蒿素，LY为LY294002，PD为PD98059，**P<0.01，##表示P<0.01；图6为青蒿素可能通过MAPK/Erk信号通路在SNP损伤PC12细胞中的起保护作用；图7为SNP对RGC-5细胞的损伤作用，*P<0.01；图8为不同浓度的青蒿素在SNP损伤RGC-5细胞中的保护作用（**表示P<0.01）；图9为青蒿素对SNP诱导的RGC-5细胞凋亡的保护作用，A为Hoechst染色实验，B是对A中各组细胞中凋亡比例的统计分析，ART：青蒿素（Artemisnin），##P<0.01，**P<0.01；图10为SNP对皮质神经元细胞的损伤作用，*P<0.01；图11为不同浓度的青蒿素在SNP损伤皮质神经元细胞中的保护作用（*P<0.05，**P<0.01）；图12为H2O2对RGC-5细胞的损伤作用，*P<0.01；图13为不同浓度的青蒿素在H2O2损伤RGC-5细胞中的保护作用（#表示P<0.01）。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术作进一步的说明，但并不局限于此。实施例1青蒿素在SNP损伤PC12神经细胞中的保护作用一、材料与方法（1）材料与主要试剂青蒿素购于大连美仑生物科技有限公司；硝普钠（SNP）购于碧云天生物技术研究所；DMEM培养基、胎牛血清和马血清购于美国Gibco公司；噻唑蓝(MTT)、二甲亚砜(DMSO)、购于美国Sigma公司；LY294002、PD98059购自美国Sigma-Aldrich公司；Westernblot相关试剂购自广州碧云天生物技术研究所；Western所用抗体Anti-phospho-Akt(Ser473)antibody和Anti-phospho-p44/42MAPK(Erk1/2)(Thr202/Tyr204)antibody购自CellSignalingTechnology(Woburn,USA)；辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗（IgG）购自美国SantaCruz公司；化学发光底物试剂盒购自美国Thermo公司。（2）主要仪器双人单面净化超净台（苏州净化设备有限公司）；Model2323二氧化碳培养箱（美国SHELLA公司）；LX71荧光倒置相差显微镜，S8F-3显微照相系统（日本Olympus公司）；westernblot垂直电泳及转印系统（Bio-Rad公司）。（3）方法1）细胞培养高分化PC12细胞株由加拿大Mcgilluniversity道格拉斯研究中心RemiQui本文档来自技高网...

【技术保护点】
青蒿素及其衍生物在制备防治神经性疾病药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.青蒿素在制备防治神经性疾病药物中的应用；所述的神经性疾病为与视网膜神经细胞氧化应激损伤有关的神经性眼...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑文华，周旋和，孟茜，王曰康，汪海涛，张浪，闫凤侠，赖永长，
申请(专利权)人：中山大学中山眼科中心，
类型：发明
国别省市：广东;44