一种检测类风湿性关节炎的试纸卡及诊断试剂盒制造技术

本实用新型专利技术公开的检测类风湿性关节炎的试纸卡，包括卡合连接的上盖和下底，其在上盖和下底之间并排设置有CCP胶体金检测试纸条，RF胶体金检测试纸条和GPI胶体金检测试纸条。本实用新型专利技术还公开了利用该检测类风湿性关节炎的试纸卡制成的检测类风湿性关节炎的诊断试剂盒。本实用新型专利技术可以联合检测环瓜氨酸肽(ccp)，类风湿因子（RF）及6-磷酸葡萄糖异构酶（GPI）三个指标，用来检测类风湿性关节炎，提高了对类风湿性关节炎（Rheumatoid arthritis，RA）诊断的灵敏度、特异性及准确性的检测。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本技术属于医学免疫应用领域，具体涉及用于体外定性检测人血清中相对应的指标，辅助诊断类风湿性关节炎的试纸卡及诊断试剂盒，该试纸卡及诊断试剂盒利用胶体金免疫层析技术联合检测抗环瓜氨酸多肽抗体、RF因子和6-磷酸葡萄糖异构酶来辅助诊断类风湿性关节炎。 
技术介绍
类风湿性关节炎又称类风湿(RA)，是一种病因尚未明了的慢性全身性炎症性疾病，以慢性、对称性、多滑膜关节炎和关节外病变为主要临床表现，属于自身免疫炎性疾病。全世界的患病率大约为1％，我国的患病率约0.3％-0.4％，成人年发病率大约为万分之三。现已证明RA患者关节病变在发病后第一年发展最快，存在短暂的治疗窗，此期关节滑膜炎改变具有可逆性，发病第二年即可出现不可逆的骨关节破坏，早期运用药物治疗可控制疾病的进展。而RA的治疗关键在于早期治疗，而早期治疗的前提是早期诊断，早期诊断就成为大家所关注的焦点。因此，寻求具有更高诊断价值的血清学指标以早期诊断RA成为各国学者研究的热点。 早期RA临床表现复杂多变，大多不典型，易造成误诊或漏诊。根据1987年美国风湿病学会类风湿性关节炎的诊断标准：(1)、晨僵。(2)、3个或3个以上关节区的关节炎。(3)、手关节炎。(4)、对称性关节炎。(5)、类风湿结节。(6)、血清RF阳性。(7)、X线改变。上述7条中满足4条或4条以上可诊断，其中第1～4条至少持续6周。该诊断标准主要依靠临床表现，X线检查以及类风湿因子(RF)的检测，符合上述标准的患者常常出现骨关节损伤，但是RF在其他自身免疫性疾病也有一定的阳性率，所以单独进行RF检测不利于RA的早期诊断治疗，也无法将最终会进展为RA的患者和具有自限性的关节炎以及可能会演变为其他炎症性关节病的患者进行区分。 早在2001年，中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院风湿免疫科曾小峰教授等就提出了抗环瓜氨酸肽抗体检测在类风湿关节炎中的意 义，随后国内外出现相关报道，抗环瓜氨酸多肽抗体在早期类风湿关节炎（RA）疾病中即有出现，能够在病人临床症状出现前数年就检出，很多文献都支持抗CCP抗体成为诊断RA疾病的高特异性抗体的观点。 随着科学进步，人们发现抗核周因子（APF）、抗角蛋白抗体（AKA）、抗聚角蛋白微丝蛋白抗体（AFA）更为特异的抗体，并证明瓜氨酸肽是上述这些抗体的共同抗原决定簇。所以许多科学家就通过大量临床研究探讨检测CCP抗体在类风关诊断中的作用。 类风湿因子（RF）是在类风湿性关节炎（RA）病人血清中发现，是一种以变性IgG为靶抗原的自身抗体，主要存在于类风湿性关节炎患者的血清和关节液中，它是一种抗变性IgG的抗体，属IgM型。可与IgGFc段结合，RA病人和约50%的健康人体内都存在有产生RF的B细胞克隆，在变性IgG（或与抗原结合的IgG）或EB病毒直接作用下，可大量合成RF。健康人产生RF的细胞克隆较少，且单核细胞分泌的可溶性因子可抑制RF的产生，故一般不易测出。RF主要为IgM类自身抗体，但也有IgG类、IgA类、IgD类和IgE类。各类RF临床意义有所不同。RF在类风湿关节炎中阳性率为80％左右，是诊断RA的重要血清学标准之一，但不是唯一标准，因5％的正常自愿者血清RF可表现为阳性，随年龄的增长，阳性率可增高，其它自身免疫病如干燥综合征、系统性红斑狼疮、硬皮病、多发性肌炎，以及感染性疾病如肝炎、结核，非感染性疾病如弥漫性肺间质纤维化、肝硬化、结节病等中都可出现。IgM类RF的含量与RA的活动性无密切关系；IgG类RF的含量与RA患者的滑膜炎、血管炎和关节外症状密切相关。IgA类RF见于RA、硬皮病、Felty综合征和SLE，是RA临床活动的一个指标。IgD类RF研究甚少。IgE类RF除RA患者外，也见于Felty综合征和青年型RA。在RA患者，高效价的RF存在并伴有严重的关节功能受限时，常提示预后不良。在非类风湿患者中，RF的阳性率随年龄的增加而增加，但这些人以后发生RA者极少。 2001年（Nature）杂志报导了GPI抗体与RA相关后，GPI及GPI抗体在RA诊断意义，成为研究的热点。GPI最早在1968年因非球形红细胞溶血性贫血而得到认识，是糖酵解和糖异生的重要酶类。在T细胞受体的转基因小鼠模型(K／B，N)中，小鼠所发生的炎症性关节炎与人类RA相似，而 且会持续产生抗GPI抗体。2001年Schubert等报道GPI与RA有关，在患者关节滑液和血浆中存在高滴度GPI抗体和可溶性GPl分子。Schaller等在RA血清、关节液中检测到高水平的抗GPI抗体(64％)，且特异性(95％)高。但是随后的一些研究该抗体在RA病人的阳性率很低。新近研究发现GPI在RA病人血清和关节液中明显增高，可能成为RA病人早期诊断和病情活动的标记之一。 CCP、RF因子和GPI在单独诊断RA的过程中各有优缺点: 传统的抗环瓜氨酸多肽（CCP）抗体的检测方法有很多，如间接免疫荧光（Indirectmmunofluorescence，IIF）、酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked Immunosorbent Assay，ELISA)、免疫印迹法（Immunoblotting test,IBT)、免疫金标渗滤法（Immunofiltration Assay,IFA）。 RF因子目前检测的方法主要有酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked Immunosorbent Assay，ELISA)和胶乳颗粒增强比浊法。 GPI目前主要的检测方法为酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked Immunosorbent Assay，ELISA)和胶体金免疫渗滤法。 间接免疫荧光存在检测时间长，需要专业人员操作，检测方法不易标准化，使检测常规化和普及有一定难度。 ELISA法操作程序烦琐，需要二个小时左右，亦需要专业人员利用酶标仪读取结果，这在基层实验室和小型门诊较难达到，试验过程受温度等条件的限制，给检测带来不便。目前市场上商品化抗CCP抗体检测试剂盒主要为ELISA试剂盒。 免疫印迹法（Immunoblotting test,IBT）采用胶体金或酶标记抗原或者抗体，其检测过程需要多次孵育和洗涤，不能满足快速检测之需；检测背景不清楚易产生假阳性，对检测结果的判读带来不便。 免疫金标渗滤法（Immunofiltration Assay,IFA）以斑点免疫印迹法（Immunoblotting,DIB）为原理，采用胶体金标记抗原抗体。其检测时间需要10分钟左右，但对操作人员的技术要求较高，只适合研究人员使用，不适合基层和小型诊所推广。 胶乳颗粒增强比浊法（particle-enhanced turbidimetric immunoassay,PETIA）是近年来出现的一种较为稳定、准确的体液蛋白均相免疫比浊检 测方法。其一是抗原或抗体量大大过剩时易出现可溶性复合物，造成测定误差，测定单克隆蛋白时这种更易出现。其二是应维持反应管中抗体蛋白量始终过剩，这个值要预先测定，使仪器的测定范围在低于生理范围到高于正常范围之间；其三是受血脂的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测类风湿性关节炎的试纸卡，包括上盖和下底，所述上盖和下底之间卡合连接，其特征在于，在所述上盖和下底之间并排设置有CCP胶体金检测试纸条，RF胶体金检测试纸条和GPI胶体金检测试纸条；在所述上盖上并排设置有三个上部视窗、并排设置有三个中部视窗和并排设置有三个加样孔，其中每一中部视窗位于对应的上部视窗和加样孔之间；所述CCP胶体金检测试纸条对应于成一列排列的一个上部视窗、一个中部视窗和一个加样孔，所述RF胶体金检测试纸条对应于成一列排列的一个上部视窗、一个中部视窗和一个加样孔，所述GPI胶体金检测试纸条对应于成一列排列的一个上部视窗、一个中部视窗和一个加样孔；三排中部视窗分别用以观察CCP胶体金检测试纸条，RF胶体金检测试纸条和GPI胶体金检测试纸条的显示状况，三排上部视窗分别用以观察CCP胶体金检测试纸条，RF胶体金检测试纸条和GPI胶体金检测试纸条所对应的检测项目。

【技术特征摘要】
1.一种检测类风湿性关节炎的试纸卡，包括上盖和下底，所述上盖和下底之间卡合连接，其特征在于，在所述上盖和下底之间并排设置有CCP胶体金检测试纸条，RF胶体金检测试纸条和GPI胶体金检测试纸条；在所述上盖上并排设置有三个上部视窗、并排设置有三个中部视窗和并排设置有三个加样孔，其中每一中部视窗位于对应的上部视窗和加样孔之间；所述CCP胶体金检测试纸条对应于成一列排列的一个上部视窗、一个中部视窗和一个加样孔，所述RF胶体金检测试纸条对应于成一列排列的一个上部视窗、一个中部视窗和一个加样孔，所述GPI胶体金检测试纸条对应于成一列排列的一个上部视窗、一个中部视窗和一个加样孔；三排中部视窗分别用以观察CCP胶体金检测试纸条，RF胶体金检测试纸条和GPI胶体金检测试纸条的显示状况，三排上部视窗分别用以观察CCP胶体金检测试纸条，RF胶体金检测试纸条和GPI胶体金检测试纸条所对应的检测项目。 
2.如权利要求1所述的检测类风湿性关节炎的试纸卡，其特征在于，所述三个加样孔互联互通，形成一个共用的加样孔。 
3.如权利要求1所述的检测类风湿性关节炎的试纸卡，其特征在于，在所述下底上并排设置有三条安装槽，其中每条安装槽对应于成一列排列的一个上部视窗、一个中部视窗和一个加样孔；所述CCP胶体金检测试纸条，RF胶体金检测试纸条和GPI胶体金检测试纸条分别安放在三条安装槽内。 
4.如权利要求1所述的检测类风湿性关节炎的试纸卡，其特征在于，在所述上盖的背面设置有若干卡扣，在所述下底的正面设置有若干卡槽，其中一个卡扣对应于一个卡槽，当所述上盖与下底卡合在一起时，每一卡扣卡入对应的卡槽中。 
5.如权利要求4所述的检测类风湿性关节炎的试纸卡，其特征在于，在所述上盖的背面设置有六个卡扣，在所述下底的正面设置有六个卡槽，其中在上盖的背面四个角各设置一个卡扣，在上盖的背面左、右两侧...

【专利技术属性】
技术研发人员：包骏，韩永俊，孙潇，张宇婷，张腊梅，
申请(专利权)人：上海科新生物技术股份有限公司，
类型：新型
国别省市：上海;31