Lasiodiplodia pseudotheobromae或其发酵产物在防治小麦白粉病菌中的应用，本发明专利技术涉及微生物技术领域，本发明专利技术所述的内生真菌是从中科院武汉植物园采集的药用植物枸骨中分离获得，经微生物分类学鉴定，命名Lasiodiplodia pseudotheobromae(菌株代号LPS-1）,该菌株已保藏在中国典型培养物保藏中心（地址：中国武汉武汉大学），保藏号：CCTCCNO:M2013605。本发明专利技术最显著的特征是菌株液体发酵液及其乙醚萃取物都能产生对小麦白粉菌（Blumeriagraminisf.sp.tritic）有抑制作用的活性产物。该发明专利技术为微生物源农药的进一步研制和开发提供优良的出发菌株，是农业上重要的微生物资源。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】Lasiodiplodia?pseudotheobromae或其发酵产物在防治小麦白粉病菌中的应用，本专利技术涉及微生物
，本专利技术所述的内生真菌是从中科院武汉植物园采集的药用植物枸骨中分离获得，经微生物分类学鉴定，命名Lasiodiplodia?pseudotheobromae(菌株代号LPS-1）,该菌株已保藏在中国典型培养物保藏中心（地址：中国武汉武汉大学），保藏号：CCTCCNO:M2013605。本专利技术最显著的特征是菌株液体发酵液及其乙醚萃取物都能产生对小麦白粉菌（Blumeriagraminisf.sp.tritic）有抑制作用的活性产物。该专利技术为微生物源农药的进一步研制和开发提供优良的出发菌株，是农业上重要的微生物资源。【专利说明】Las i od i p I od i a pseudotheobromae或其发酵产物在防治小麦白粉病菌中的应用
本专利技术属于微生物
，涉及一种植物内生真菌在生防领域中的应用，特别涉及植物内生真菌Lasiodiplodia pseudotheobromae或其发酵产物在防治小麦白粉病菌中的应用。
技术介绍
植物内生真菌是指生活在植物体内或其生活史的一定阶段处于健康植物体内，而不引起该植物任何外在病症的一类微生物。植物内生真菌是一种新的微生物资源，能产生多种结构类型的代谢产物，具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤、抗虫、调节植物生长等多种生物活性(Tan RX & Zou WX, 2001)。由于植物内生真菌能产生结构新颖、功能独特的代谢产物而成为新化合物、新药物筛选的潜在资源，从健康植物中分离内生真菌，筛选活性高、结构新颖的抗菌化合物具有广阔的前景(Strobel G, et al.2004)。Lasiodiplodia pseudo theobromae作为热带和亚热带树木的重要致病真菌已被广泛研究。Alves等2008年首、伙像览Lasiodiplodia属的I个新种Lasiodiplodiapseudo theobromae, Alves等用ITS和EFl-α序列分析之前被鉴定为Ζ.theobromae的菌株时，发现了另一L.pseudotheobromae (Alves A, et al.2008)。Zhao 等 2010年报道在中国南部热带和亚热带地区的林木上分离出L.pseudotheobromae，研究表明该菌可寄生包括果树在内的多种植物(Zhao JP, et al.2010)。然而，目前尚没有文献报道Lasiodiplodia pseudo theobromae可作为一种生防菌，更没有文献报道该菌种可以防治小麦白粉病菌(沒graminis f.sp.tri ti ) ?
技术实现思路
本专利技术人从药用枸骨中分离的一株内生真菌L.pseudotheobromae,并意外地发现其具有拮抗小麦白粉病菌的生物活性。因此，本专利技术的目的在于提供该内生真菌Lasiodiplodia pseudo theobromae及其发酵产物在防治小麦白粉病菌中的应用。 为了实现本专利技术的目的，专利技术人从药用植物枸骨中分离到一株内生真菌LPS-1，并对其进行了分类鉴定，确定为Lasiodiplodia pseudo theobromae,并将菌株代号命名为葡萄座腔菌于 2013 年 11 月 27 日保藏在中国典型培养物保藏中心(地址:中国武汉武汉大学)，保藏号=CCTCC NO: M 2013605。另外，本专利技术人对所分离的内生真菌LPS-1做了进一步的形态学、同源性、培养方法和生物活性等方面的特征进行了研究，具体结果如下: 1、内生真菌LPS-1的形态特征 (I)无性世代:LPS_1在马铃薯-葡萄糖琼脂培养基(potato dextrose agar, PDA)上25°C培养3d后在光学显微镜下观察照片，在PDA培养基上菌丝初期呈白色疏松状，后期菌丝逐渐变成黑色。其菌落形态特征见图1。(2)有性世代:在2%水琼脂平板表面摆放灭菌的松针，在平板中接入内生真菌LPS-1，放置到25°C培养箱，紫外灯和普通灯光下12小时光照与黑暗交替培养2-5周。在Olympus 1X81型万能显微镜下观察并测量50个单孢大小，孢子的大小范围为平均值土误差，侧丝测量25个数据。分生孢子器中有透明的侧丝，圆柱形，初期无隔，成熟后有I~5个隔。偶见分支，侧丝尖端钝圆，在侧丝的基部和中部偶尔有膨大现象，长45.4± 10.4 μ m，宽3.5±0.5μπι。分生孢子初期无色，无隔，椭圆形或圆形，端部钝圆，壁厚。随着孢子成熟，孢子变成茶褐色，中央形成一层隔膜，且具有纵条纹，孢子大小为22.1~28.5 X 13.1~16.5μπι (平均值±标准偏差=25.3 ± 1.5X14.5±0.7μπι，长宽比=1.7±0.1)。其有性形态特征见图2。2、内生真菌LPS-1的同源性特征 运用PCR技术，扩增采用ITS通用引物ITSl和ITS4，LPS-1菌株ITS序列与Genebank中其它真菌的ITS序列进行比对，找出相似性最高，亲缘关系最近的真菌，LPS-1菌株的ITS序列与pseudo theobromae的ITS序列相似度为100%。综合形态学特征，将LPS-1菌株鉴定为L.pseudo theobromae ?其ITS同源性的系统发育树见图4。3、内生真菌LPS-1的发酵培养特征 培养基:麦精19.95g/L，蔗糖50 g/L，硝酸钠7.5 g/L，七水硫酸镁3.561 g/L，去离子水1L。培养温度:25°C 发酵时间:7天 发酵条件:静态培养 4、内生真菌发酵液萃取物对小麦白粉菌活性测定 内生真菌LPS-1液体发酵培养7天，得总发酵液，经离心或过滤得菌丝和菌液部分，用乙醚萃取，浓缩成浸膏，得到乙醚提取物。准确称取LPS-1菌株发酵液的乙醚提取物0.01g，并加入10 mL无菌水，超声波震荡充分溶解，最终配置成浓度为1000 mg/L的母液。采用离体叶段法，将母液配置成10 mg/L的工作液，用Poter喷雾塔均匀喷施到小麦离体叶段上，自然晾干，24小时后接种新鲜的小麦白粉病菌，另设阴性对照组(乙醚处理)和空白对照组(纯水处理)，置于17°C培养室进行培养。7天后调查发病情况，结果见图3。本专利技术的优点:本专利技术首次从药用植物枸骨中分离到一株内生真菌LPS-1，并发现其对小麦白粉菌具有较高的拮抗活性，从而可以将该内生真菌LPS-1作为生防菌应用于小麦白粉菌引起的植物疾病的防治中。另外，由于内生真菌LPS-1发酵液的乙醚萃取物具有更高的生防活性，因此可以继续利用该植物内生真菌资源获得天然生物活性物质，为其开发和应用以及探讨内生真菌的生理生态功能提供依据。【专利附图】【附图说明】图1为内生真菌LPS-1在PDA培养基生长3天(左图)和7天(右图)的菌落形态。图2为内生真菌LPS-1有性世态的侧丝、产孢细胞和分生孢子的形态图；d.侧丝(X400) ； e.产孢细胞(X200) ;f.未成熟的分生孢子(X400) ;g.成熟的孢子(X400)。图3各组对小麦白粉病菌的防治效果图；从左至右分别是阴性对照组、空白对照组、LPS-1萃取物处理组。图本文档来自技高网...
【技术保护点】
Lasiodiplodia pseudotheobromae或其发酵产物在防治小麦白粉菌中的应用。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：喻大昭，向礼波，龚双军，杨立军，张学江，曾凡松，薛敏峰，汪华，史文琦，
申请(专利权)人：湖北省农业科学院植保土肥研究所，
类型：发明
国别省市：湖北;42
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。