【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物芯片和诊断试剂
，具体涉及，其针对多种蚊媒传染病病原体设计特异性核酸探针并与多重聚合酶链反应(PCR)技术结合、采用液相芯片同步快速检测多种蚊媒病原体及其分型。
技术介绍
蚊媒传染病是指有蚊虫叮咬人体而传播的疾病，近年来呈逐年上升趋势。蚊媒传染病一旦发生流行或暴发，将给社会稳定、人民群众的健康、生活、生产带来极大影响。根据国境口岸传染病排查需要，将黄热病、登革热、流行性乙型脑炎(日本脑炎)、疟疾、西尼罗热及基孔肯雅热六种疾病作为口岸重点关注的蚊媒传染病。这六种疾病在非洲等国家广泛流行、极易造成国际间的流行和传播，而这些疾病均有发热等症状，没有实验室的检测结果很难确诊。在对上述病原体检测方面，目前常规的检测手段包括分离培养方法、免疫学方法，以及核酸检测方法，如PCR、多重PCR、RT_PCR和基于Taqman探针技术的实时荧光PCR方法等。但这些方法或多或少存在一些缺陷:如分离培养方法在技术上比较困难，且获得病原学诊断和药敏结果常需要3~5天以上，在临床上难以及早进行病原学诊断和耐药性测定，无法满足临床救治危重感染者的需要；免疫学方法检测病毒的特异性抗体时，不仅需分别在患者感染的急性期及恢复期采集双份血清，并且还可能存在抗原抗体间的交叉反应而干扰检测，不利于疾病的早期诊断；在核酸检测方法方面，PCR、多重PCR、RT-PCR方法及基于Taqman探针技术的实时荧光PCR方法等的灵敏度高，特异性好，适合于快速检测鉴定，但这些方法大多基于单一反应或较少数重数的多重反应的检测，在对临床样本进行检测时，对每一个样本的数十种指标进...
【技术保护点】
一种检测多种蚊媒病原体的试剂盒，其特征在于该试剂盒包括用于检测下列病原体的探针：黄热病毒的探针YFV‑PF、基孔肯雅病毒的探针CHIKV‑PF、西尼罗病毒WNV‑PF、乙型脑炎病毒的探针JEV‑PF、登革I型病毒的探针DV1‑PF、登革Ⅱ型病毒的探针DV2‑PF、登革Ⅲ型病毒的探针DV3‑PF、登革Ⅳ型病毒的探针DV4‑PF、间日疟原虫的探针PV‑PF、三日疟原虫的探针PM‑PF、卵形疟原虫的探针PO‑PF和恶性疟原虫的探针PF‑PF，上述探针的核苷酸序列分别依次如SEQ ID NO：1‑12所示。
【技术特征摘要】
1.一种检测多种蚊媒病原体的试剂盒，其特征在于该试剂盒包括用于检测下列病原体的探针:黄热病毒的探针YFV-PF、基孔肯雅病毒的探针CHIKV-PF、西尼罗病毒WNV-PF、乙型脑炎病毒的探针JEV-PF、登革I型病毒的探针DV1-PF、登革II型病毒的探针DV2-PF、登革III型病毒的探针DV3-PF、登革IV型病毒的探针DV4-PF、间日疟原虫的探针PV-PF、三日疟原虫的探针PM-PF、卵形疟原虫的探针PO-PF和恶性疟原虫的探针PF-PF，上述探针的核苷酸序列分别依次如SEQ ID NO:1-12所示。2.根据权利要求1所述的检测多种蚊媒病原体的试剂盒,其特征在于所述试剂盒还包括用于扩增下列病原体目的片段的PCR引物对: 黄热病毒的引物对YFV-F和YFV-R，其序列参见SEQ ID NO:13-14 ； 基孔肯雅病毒的引物对CHIKV-F和CHIKV-R，其序列参见SEQ ID NO:15-16 ； 西尼罗病毒的引物对WNV-F和WNV-R，其序列参见SEQ ID NO: 17-18 ； 乙型脑炎病毒的引物 对JEV-F和JEV-R，其序列参见SEQ ID NO: 19-20 ； 登革I型病毒的引物对DVl-F和DV1-R，其序列参见SEQ ID NO:21-22 ; 登革II型病毒的引物对DV2-F和DV2-R，其序列参见SEQ ID NO:23-24 ; 登革III型病毒的引物对DV3-F和DV3-R，其序列参见SEQ ID NO:25-26 ； 登革IV型病毒的引物对DV4- F和DV4-R，其序列参见SEQ ID NO:27-28 ； 疟原虫的通用引物对PU-F2和PU-R2，其序列参见SEQ ID NO:29-30。3.根据权利要求2所述的检测多种蚊媒病原体的试剂盒，其特征在于每对引物对中有一个5’端修饰有生物素标记，每个探针5’端均带有胺基化修饰且连有C12邻接臂序列、并分别与相应突光标记的微球偶联。4.根据权利要求2或3所述的检测多种蚊媒病原体的试剂盒，其特征在于所述试剂盒还包括反转录引物混合液，其反转录引物序列参见SEQ ID N0:31-3...
【专利技术属性】
技术研发人员：史玲莉，闫冀焕，李云，滑娜，沈军，吴志茹，兰景，李薇，付晓昀，
申请(专利权)人：河北国际旅行卫生保健中心，
类型：发明
国别省市：河北;13
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