本发明专利技术涉及从洗涤剂中分离蛋白质的试剂、在洗涤剂存在的情况下检测蛋白质的试剂及其应用方法。分离试剂含有环状寡聚物诸如环糊精和纤维素衍生物诸如2-羟乙基纤维素。在组合标准蛋白质复合染料应用时，试剂允许以毫微克水平在电泳凝胶中检测蛋白质。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】蛋白质检测本专利技术涉及从洗涤剂中分离蛋白质的试剂、在洗涤剂存在的情况下检测蛋白质的试剂及其应用方法。本专利技术的背景通常发现蛋白质与洗涤剂结合。例如，在从细胞中提取蛋白质时，洗涤剂常常用于分裂细胞膜，以使其分裂。洗涤剂还通常在利用凝胶电泳分离蛋白质混合物时被应用。由于洗涤剂不利地影响考马斯染料与蛋白质结合时的颜色变化，所以洗涤剂必需通过若干洗涤步骤被去除，导致染色程序延长和复杂。还已知一些洗涤剂诸如十二烷基硫酸钠使蛋白质变性。因此，常常期望在其随后的应用之前从洗涤剂中分离蛋白质。WO2007/125372公开蛋白质检测试剂，其含有考马斯染料与糊精诸如环糊精。据其声称，糊精的存在克服与考马斯染料一起存在的洗涤剂的困难。因此，不需要进行通常要求的费力的洗涤步骤。然而，已经发现WO2007/125372中公开的试剂——含有酸诸如磷酸——常常稳定性差并且由于不期望的沉淀而具有高的背景染色。仍需要提供另外的试剂，以从洗涤剂中分离蛋白质。还需要提供另外的高灵敏度和稳定性试剂，以检测蛋白质。专利技术概述本专利技术提供组合物（下文称为“分离组合物”），用于从洗涤剂中分离蛋白质，所述组合物包括a）纤维素衍生物，和b）环状寡聚物。本专利技术还提供方法（下文称为“分离方法”），用于从洗涤剂中分离蛋白质，所述方法，包括1）使含蛋白质样品和洗涤剂与溶液接触，所述溶液包括a）纤维素衍生物，和b）环状寡聚物；和2）从洗涤剂中分离蛋白质。本专利技术还提供方法（下文称为“染色方法”），以检测和/或量化蛋白质，包括i）使含蛋白质样品与包括环状寡聚物的第一溶液接触；ii）使含蛋白质样品与包括蛋白质复合染料的第二溶液接触；和iii）检测和/或量化染料/蛋白质复合物的形成。优选地，第一或第二溶液中的至少一种包括pKa为4或更小的酸。优选地，第一溶液包括纤维素衍生物。本专利技术还提供组合物（下文称为“染色组合物”），以检测蛋白质，包括：a）蛋白质复合染料；b）环状寡聚物；和c）羟基羧酸。优选地，染色组合物中的羟基羧酸是酒石酸。优选地，染色组合物包括纤维素衍生物。专利技术详述本专利技术组合物通常含有纤维素衍生物。“本专利技术组合物”意为上述“染色组合物”和/或“分离组合物”。同样，“本专利技术方法”意为上述“染色方法”和/或“分离方法”。“纤维素衍生物”意为其中至少一些游离羟基基团已经被烷基、羟烷基或羧基烷基基团官能化的纤维素。优选地，纤维素衍生物包括具有两个或三个碳原子的羟烷基或羧基烷基基团。因而，优选纤维素衍生物包括羟乙基、羟丙基、羧甲基和羧乙基。优选纤维素衍生物选自羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素和羧甲基纤维素。优选地，纤维素衍生物选自羟乙基纤维素、羟丙基纤维素和羟丙基甲基纤维素。因此，用于本专利技术组合物的优选纤维素衍生物包括具有如下通式的重复单元：其中，R表示R’、R”或R”’，其中R’表示H或CH2CH2OH（即，羟乙基纤维素），R”表示H或CH2CH(OH)CH3（即，羟丙基纤维素），和R”’表示H、CH3或CH2CH(OH)CH3（即，羟丙基甲基纤维素）。特别优选的纤维素衍生物选自羟乙基纤维素和羟丙基甲基纤维素（即，R表示R’或R”）。最优选的纤维素衍生物是羟乙基纤维素（即，R表示R’）诸如2-羟乙基纤维素。本专利技术组合物还含有环状寡聚物。“环状寡聚物”意为形成环（或大环）的寡聚物。换言之,“环状寡聚物”不意为环状单体单元的寡聚物（尽管这些可被术语诸如环状低聚糖包含）而是形式为单体单元的连续环的寡聚物。合适的环状寡聚物具有亲水基团诸如羟基，以使它们溶于水性溶液。环状寡聚物是环形的，并具有内腔。优选地，环状寡聚物有一定大小，以便其内腔可容纳分子诸如染料、表面活性剂或洗涤剂。优选的环状寡聚物选自环状低聚糖、杯芳烃、葫芦脲（cucurbituril）、柱芳烃（pillararene）或其衍生物。“环状低聚糖”意为低聚糖或由糖分子制成的化合物，其形成环（或大环）。任何类型的环状低聚糖理论上均可被利用，尽管优选利用仅含一种类型糖分子的环状低聚糖。优选地，环状低聚糖的环含有5至12个糖分子，更优选地，6至8个糖分子，最优选地，6个糖分子。优选环状低聚糖选自环糊精（或环-α(1→4)-葡糖苷）、环葡聚糖（环-α(1→6)-葡糖苷）、环凝胶多糖（环-β(1→3)-葡糖苷）、环甘露聚糖（环-α(1→4)-甘露糖苷）、环果聚糖（环-β(1→2)-果苷糖）和环催乳激素（环-β(1→4)-半乳糖苷）。可用于本专利技术组合物的特别优选的环糊精选自α-环糊精（环-α(1→4)-葡己糖苷）、β-环糊精（环-α(1→4)-葡庚糖苷）和γ-环糊精（环-α(1→4)-葡辛糖苷），其中α-环糊精（环-α(1→4)-葡己糖苷）是最优选的。优选杯芳烃选自杯[4]芳烃、杯[6]芳烃和杯[8]芳烃。优选葫芦脲选自葫芦脲[6]脲和葫芦[8]脲。优选柱芳烃选自柱[5]芳烃和柱[6]芳烃。术语“环状寡聚物”和“环状低聚糖”和上述各具体的环状寡聚物/低聚糖还包含这些化合物的衍生物诸如低聚糖，其中，游离羟基基团已经被官能化，或含有亲水基团和/或能够与水氢键合的基团的环状寡聚物。这些类型的衍生物是优选的，因为它们提高环状寡聚物在水中的溶解度。合适的衍生物包括环状寡聚物，例如任意上述具体环状寡聚物或环状低聚糖，其中，游离羟基基团中的一个或多个已经用C1-4烷基、羧甲基、磺酰基、乙酰基、羟乙基或羟丙基官能化。亲水的和/或能够与水氢键合的衍生基团包括羧甲基、磺酰基、羟乙基或羟丙基。本专利技术组合物通常是水性溶液。因为蛋白质可对离子强度敏感，所以优选利用去离子水，以形成本专利技术组合物，尽管这不是必要的。分离组合物通常使蛋白质游离并可用于进一步的应用，诸如用于形成蛋白质-染料复合物。因此，分离组合物优选地不含有任何蛋白质复合染料。“蛋白质-复合染料”意为蛋白质-染料复合物的形成时显示光学性质变化的任意部分，诸如吸收光谱的变化或发射光谱的变化。本专利技术组合物中任选的另外的成分包括增溶剂，以在洗涤剂-环状寡聚物复合物形成时帮助避免蛋白质集结。可利用的合适的增溶剂包括醇诸如甲醇、乙醇和异丙醇，其中乙醇是特别优选的。本专利技术分离组合物中每种成分的典型量总结在下表中（所有量均作为百分比w/v，即克/ml给出）：组分典型量优选量最优选量环状寡聚物0.1-20%0.5-6%2-5%纤维素衍生物0.01-2%0.05-1%0.1-0.5%增溶剂（例如乙醇）0-10%0.5-4%1-3%上面表中的量是彼此独立的，并且代表本专利技术分离组合物中含有的每种成分的典型和优选量。环状寡聚物的其它优选范围包括0.1至10%w/v，优选地，0.1至4%w/v，更优选地，0.5至4%w/v，例如1至3%w/v。增溶剂的其它优选范围包括0至5%w/v。分离组合物在从洗涤剂分离蛋白质中具有用途。因此，优选分离组合物本身不含有任何洗涤剂/表面活性剂。分离组合物可通过简单地将成分混合在一起而制成，例如以形成水性溶液。然而，优选在加入下一种成分之前确保每种成分充分溶解。这可包括一些适度加热，例如至大约40-50℃。典型地，环状寡聚物溶于去离子水中混合直到获得平衡溶液（例如达大约30分钟至1小时，如果需要可能更长）。纤维素衍生物在此时加入，例如通过形成纤维素衍生物在去离子水中的本文档来自技高网...
【技术保护点】
从洗涤剂中分离蛋白质的组合物，所述组合物包括a）纤维素衍生物，和b）环状寡聚物。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2011.08.19 GB 1114341.9;2011.09.23 GB 1116421.71.从洗涤剂中分离蛋白质的组合物，所述组合物包括a)0.05至2w/v％的2-羟乙基纤维素；b)环状寡聚物；和c)pKa为4或更小的α-羟基羧酸。2.权利要求1所述的组合物，其中所述环状寡聚物选自环状低聚糖、杯芳烃、葫芦脲和柱芳烃。3.权利要求2所述的组合物，其中所述环状低聚糖选自环糊精、环葡聚糖、环凝胶多糖、环甘露聚糖、环果聚糖和环催乳激素。4.权利要求3所述的组合物，其中所述环状寡聚物是环糊精。5.权利要求4所述的组合物，其中所述环糊精是α-环糊精。6.权利要求1-5任一项所述的组合物，其中所述环状寡聚物以0.1至10％w/v的量存在。7.权利要求1-5任一项所述的组合物，进一步包括醇。8.权利要求7所述的组合物，其中所述醇的存在量为0.5至10％w/v。9.权利要求8所述的组合物，其中所述醇是乙醇。10.权利要求9所述的组合物，其中所述乙醇是变性乙醇或无水乙醇。11.权利要求9所述的组合物，其中所述乙醇以1至3w/v％的量存在。12.权利要求1-5任一项所述的组合物，其中所述α-羟基羧酸是酒石酸。13.权利要求1-5任一项所述的组合物，特征在于其不含有任何蛋白质复合染料。14.权利要求1-5任一项所述的组合物，其中所述组合物是水性溶液。15.试剂盒，包括i)第一溶液，包括权利要求14所述的组合物，和ii)第二溶液，包括蛋白质复合染料。16.权利要求15所述的试剂盒，其中所述蛋白质复合染料是考马斯染料。17.检测和/或量化蛋白质的方法，包括i)使含蛋白质样品与包括环状寡聚物和0.05至2w/v％的2-羟乙基纤维素的第一溶液接触；ii)使所述含蛋白质样品与包括蛋白质复合染料的第二溶液接触；和iii)检测和/或量化染料/蛋白质复合物的形成，其中所述第一溶液或所述第二溶液中的至少一个包括pKa为4或更小的α-羟基羧酸，并且其中在检测所述蛋白质之前不需要去除洗涤剂和/或表面活...
【专利技术属性】
技术研发人员：A·T·R·M·A·尼夫斯，B·佩基，
申请(专利权)人：艾昆西恩斯公司，
类型：发明
国别省市：英国;GB
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