本发明专利技术公开了一种制备冷沉淀的方法，它包括如下步骤：（1）融化：取新鲜冰冻血浆，升温，得温度为0～5℃融化血浆；（2）过滤：在融化血浆温度为0～5℃的条件下，过滤，得滤液和滤渣；（3）离心：在滤液温度为0～5℃的条件下，离心，得沉淀；（4）合并步骤（2）得到的滤渣和步骤（3）得到的沉淀，即为冷沉淀。本发明专利技术制备方法简单，制备的冷沉淀收率高，人凝血因子Ⅷ含量高，工业应用前景良好。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种制备冷沉淀的方法，它包括如下步骤：（1）融化：取新鲜冰冻血浆，升温，得温度为0～5℃融化血浆；（2）过滤：在融化血浆温度为0～5℃的条件下，过滤，得滤液和滤渣；（3）离心：在滤液温度为0～5℃的条件下，离心，得沉淀；（4）合并步骤（2）得到的滤渣和步骤（3）得到的沉淀，即为冷沉淀。本专利技术制备方法简单，制备的冷沉淀收率高，人凝血因子Ⅷ含量高，工业应用前景良好。【专利说明】—种冷沉淀的制备方法以及用其制备凝血因子WI制剂的方法
本专利技术涉及血液制品的制备方法，特别涉及一种冷沉淀的制备方法以及用其制备凝血因子珊的方法。
技术介绍
冷沉淀是新鲜冰冻血浆在低温条件下不溶解的白色沉淀物，主要含有第珊因子、纤维蛋白原、血管性血友病因子(VWF)、第XIII因子以及纤连蛋白等成分，是制备人凝血因子VDI制剂的原料。目前，血浆的冷沉淀制备方法有两种:快速融化离心法和虹吸法。虹吸法制得的冷沉淀中，人凝血因子VIII含量低，目前通常采用快速融化离心法。快速融化离心法的具体步骤为:取出待制备冷沉淀的新鲜冰冻血浆，置4±2°C冰箱中过夜融化或在4 ± 2°C水浴装置中融化；当血浆基本融化时，取出血浆，在4± 2°C的环境下离心，离心的沉淀即为冷沉淀。但是，该方法制得的冷沉淀的量较少，通常每吨血浆仅得到8.9kg冷沉淀，冷沉淀中人凝血因子珊的含量为39.951IU/g (见营长永等，“人凝血因子VIII分离纯化工艺研究”，山东大学硕士学位论文)，对冷沉淀进一步分离纯化制得的人凝血因子VDI制剂的量也比较少，造成血浆资源的浪费。【专利技术内容】为了解决上述问题，本专利技术提供了一种新的冷沉淀制备方法。本专利技术制备冷沉淀`的方法，它包括如下步骤:( I)融化:取新鲜冰冻血浆，升温，得温度为O~5°C融化血浆；(2)过滤:在融化血浆温度为O~5°C的条件下，过滤，得滤液和滤渣；(3)离心:在滤液温度为O~5°C的条件下，离心，得沉淀；(4)合并步骤(2)得到的滤渣和步骤(3)得到的沉淀，即为冷沉淀。步骤(1)所述融化包括如下两个步骤:a、预融化:将新鲜冰冻血浆静置于O~2°C环境中，使血浆升温至-10°C~0°C ；b、融化:再升温，得O~5 °C融化血浆。步骤a中，所述环境温度为0°C。步骤b中，所述升温的方法是25~37°C水浴。步骤(2)中，所述过滤采用堰式滤器过滤。步骤(3)中，所述离心的离心力为14000~15900g。优选地，所述离心采用型号为GQ142的高速管式离心机离心。本专利技术制备凝血因子VDI的方法，它包括如下步骤:a、按照前述方法制备冷沉淀；b、溶解冷沉淀；C、用聚乙二醇沉淀法沉淀，离心，得上清；d、SD法病毒灭活；e、采用离子交换层析法或者用氯化钠/甘氨酸盐析法纯化；f、除菌、分装、冻干、干热灭活，即可。步骤b中，溶解冷沉淀采用的缓冲液为0.02MTris缓冲液。步骤c中，所述聚乙二醇沉淀法采用30%聚乙二醇沉淀。步骤e中，所述离子交换层析采用的凝胶为Toyopearl DEAE650M,缓冲液为0.0OlM~0.05M的枸橼酸钠缓冲液。步骤e中，所述盐析法采用氯化钠/甘氨酸沉淀。采用本专利技术方法制备冷沉淀，每吨血浆可以制备得到11.14kg冷沉淀，其人凝血因子珊的含量为39.43IU/g，有效提高了单位血浆制得的冷沉淀的量，也提高了单位血浆制得的人凝血因子珊制剂的量，经济效益好，充分利用了血浆资源，具有良好的市场应用前景显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。 以下通过实施例形式的【具体实施方式】，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。【具体实施方式】实施例1用本专利技术方法制备冷沉淀1、实验仪器堰式滤器:型号是FL-2023堰式罐形过滤器；连续离心机:GQ142的高速管式离心机离心。2、实验方法( I)新鲜健康人血浆采集后，-20 V保存，不超过3年；(2)预融化:将新鲜冰冻血浆2500L (即2575Kg，人凝血因子VDI的含量为2500，000IU)，放置在环境温度为0°C的条件下，升温至-10°c~o°c ；(3)融化:在25°C水浴中融化，将血浆升温至O~5°C，得融化血浆；(4)过滤:在维持融化血浆温度为O~5°C条件下，采用堰式滤器过滤过滤，得滤液和滤渣；(5)离心:在维持滤液温度为O~5°C条件下，采用连续离心机对滤液进行离心，离心力为15900g，得沉淀；(6)合并步骤(4)得到的滤渣和步骤(5)得到的沉淀，即为冷沉淀。称量冷沉淀的重量,检测冷沉淀中人凝血因子VDI的含量。2、检测结果经过检测,步骤(4)的滤洛重量为6.18kg,其人凝血因子VDI的含量为41IU/g,步骤(5)的沉淀中，滤渣重量为22.5kg，其人凝血因子VDI的含量为39IU/g，将二者合并后得到的本专利技术冷沉淀，总重量为28.68Kg，冷沉淀中人凝血因子VDI的含量为39.43IU/g。因此，采用本专利技术方法制备冷沉淀，每吨血浆可以制备得到11.14kg冷沉淀，其人凝血因子VDI的含量为39.43IU/g，其中，过滤获得冷沉淀为2.4Kg，占比21.55%，其人凝血因子VDI的含量为41IU/g，离心获得冷沉淀为8.74Kg，占比78.45%，其人凝血因子VDI的含量为39IU/g。实施例2用本专利技术方法制备冷沉淀1、实验仪器堰式滤器:型号是FL-2023堰式罐形过滤器；连续离心机:GQ142的高速管式离心机离心。2、实验方法(I)新鲜健康人血浆采集后，-20 V保存，不超过3年；(2)预融化:将新鲜冰冻血浆2500L (即2575Kg，人凝血因子VDI的含量为2500，000IU)，放置在环境温度为2°C的条件下，升温至-10°c~0°C ；(3)融化:在37°C水浴中融化，将血浆升温至O~5°C，得融化血浆；(4)过滤:在维持融化血浆温度为O~5°C条件下，采用堰式滤器过滤过滤，得滤液和滤渣；(5)离心:在维持滤液温度为O~5°C条件下，采用连续离心机对滤液进行离心，离心力为14000g，得沉淀；(6)合并步骤(4)得`到的滤渣和步骤(5)得到的沉淀，即为冷沉淀。实施例3采用本专利技术冷沉淀制备人凝血因子VDI制剂1、实验方法实施例1步骤(4)过滤获得的冷沉淀(滤渣)300g (重复三次)以及实施例1步骤(5)离心获得的冷沉淀(沉淀)(重量分别为3.8kg、3.525kg、2kg)分别按照如下方法纯化制备人凝血因子VDI:(I)将冷沉淀用0.02M氨丁三醇(Tris)缓冲液溶解，30%聚乙二醇沉淀，离心，得上清；(2)上清合并澄清后，加入Tween-80和磷酸三丁酯使其最终浓度分别为1%和0.3%, 250C ±1°C处理6小时，完成第一次病毒灭活(即SD病毒灭活)；(3)氯化钠/氨基酸盐析:SD病毒灭活结束后，加入液体体积15% (w/v)的氯化钠和7.5% (w/v)的甘氨酸进行沉淀，4000rpm离心,收集沉淀；(4)超滤配制:用含0.01M枸橼酸钠、0.0OlM氯化钙、0.1本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种制备冷沉淀的方法，其特征在于：它包括如下步骤：（1）融化：取新鲜冰冻血浆，升温，得温度为0～5℃融化血浆；（2）过滤：在融化血浆温度为0～5℃的条件下，过滤，得滤液和滤渣；（3）离心：在滤液温度为0～5℃的条件下，离心，得沉淀；（4）合并步骤（2）得到的滤渣和步骤（3）得到的沉淀，即为冷沉淀。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：牟蕾，鲁涛，初毅波，苗松，邓红，王黔川，李伟，余伟，
申请(专利权)人：成都蓉生药业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：四川;51
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。