本发明专利技术属于海洋生物技术领域，本发明专利技术提供了一种发形霞水母多肽生长因子，命名为Cc-GRN-1，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO:1所示。本发明专利技术还提供了上述发形霞水母多肽生长因子的制备方法及其应用。本发明专利技术的发形霞水母多肽生长因子具有显著的促细胞增殖作用，在研制损伤修复药物方面有良好的应用前景。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术属于海洋生物
，本专利技术提供了一种发形霞水母多肽生长因子，命名为Cc-GRN-1，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO:1所示。本专利技术还提供了上述发形霞水母多肽生长因子的制备方法及其应用。本专利技术的发形霞水母多肽生长因子具有显著的促细胞增殖作用，在研制损伤修复药物方面有良好的应用前景。【专利说明】一种发形霞水母多肽生长因子及其制备方法和应用
本专利技术属于海洋生物
，具体涉及一种发形霞水母多肽生长因子及其制备方法和应用。
技术介绍
水母(jellyfish)是一类胶质状的浮游动物，种类繁多，数量巨大，分布广泛，在海洋生态系统中占有重要地位。水母的基本结构是由伞体、缘膜、口腕、触手、附属器等组成，伞体呈扁平圆盘形或球形，伞体腹面有口，口下悬垂口腕，伞体边缘和口腕上长有许多触手，长者达数十米，其上密布刺丝囊。刺丝囊是触手上一种特化细胞——刺细胞的特化细胞器，状如小囊，内含毒液，是刺胞动物的防御与进攻武器。当触手触及其他动物时，立即缠绕受害者，刺丝囊发射刺丝穿入人体皮肤或小动物体内，同时释放出毒液。水母生殖腺发达，繁殖能力强，生长发育速度极快，同时也具有非常强的再生能力。水母捕食或防御天敌进攻的过程中，一方面，细长丝状的触手容易出现断裂、脱落或者被天敌咬去许多，但受损部位很快可长出新的触手，以维持水母个体的正常活动与功能，水母触手表现出了超强的损伤修复能力；另一方面，水母触手上刺丝囊数量巨大，需经细胞快速、大量增殖产生，而且捕食、防御过程会消耗大量刺丝囊，损耗的刺丝囊也需要及时补充，因此推测触手中存在着刺细胞快速增殖和刺丝囊补充的动态过程。水母触手的超强损伤修复能力和刺细胞的快速增殖能力提示，水母触手，特别是刺细胞中，可能存在高活性生长因子。颗粒体蛋白前体(Progranulin, PGRN)是一种参与发育调节、伤口愈合、血管发生、神经元细胞生长和维持以及炎症反应等多种生理病理过程的分泌型生长因子，亦称为颗粒体蛋白/上皮肽前体(GEP)、PC细胞衍生的生长因子(PCDGF)、acrogranin或G80。它首先作为生长因子从条件组织培养基中纯化得到，是一种含593个氨基酸残基的分泌性糖蛋白，表观分子量88kDa。PGRN包括I个信号肽序列和7.5个颗粒体蛋白(granulin，GRN)模序(X2_3CX5_6CX5CCX8CCX6CCXDX2HCCPX4CX5_6CX2)，每个模序都含有 12 个半胱氨酸并形成6对二硫键，在空间结构上，4个β_折叠的“发夹”结构依次呈梯状折叠。共有序列的C末端包含保守序列CCXDX2HCCP，被认为具有金属酶结合位点以及参与调节功能。PGRN可以被细胞外的蛋白酶如嗜中性粒细胞分泌的弹性蛋白酶水解成小的多肽片段GRN，这些多肽片段的分子量从6kDa到25kDa大小不等，均保留生物学活性:可促进细胞生长，并可能与炎症有关(参见文献:Lu R, G Serrero, et al.1nhibition of PC cell-derived growthfactor(PCDGF, epthelin/granulin precursor)expression by antisense PCDGF cDNAtransfection inhibits tumorigenictiy of the human breast carcinoma cell lineMDA-MB-468.Proc Natl Acad Sci USA,2000，97(8):3993-3998)。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种来源于发形霞水母，新的多肽生长因子；本专利技术的另一目的在于提供该多肽生长因子的制备方法，以及在制备损伤修复药物中的应用。为了实现本专利技术的目的，本专利技术采用如下技术方案:本专利技术从发形霞水母刺丝囊毒素中分离得到的一种促进细胞增殖的单链多肽Cc-GRN-1，生物信息学分析提示其属于颗粒体蛋白(GRN)家族，查询蛋白质/多肽公共数据库无该多肽序列，尚未见相关文献报道。本专利技术的第一方面，是提供了一种发形霞水母多肽生长因子，命名为Cc-GRN-1，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。本专利技术的多肽生长因子是从发形霞水母刺丝囊毒素中分离得到的一种单链多肽，58个氨基酸，分子量5782.9Da，多肽氨基酸全序列一级结构如下:Asn -Val - He - Cys -Pro - Asp - Gly - Thr - Ser - Phe - Cys - Ala - Ser - Gly - Gln - Thr - Cys - Cys - Lys -Leu - Ser - Ser - Gly - Ser - Tyr - Gly - Cys - Cys - Pro - Leu - Pro - Asn - Ala - Val -Cys - Cys - Ser - Asp - Gly - Val - His - Cys - Cys - Pro - Ser - Gly - Thr - Thr - Cys -Asp - Val - Ser - Gln - Gly - Thr - Cys - Leu - Arg (SEQ ID NO:1)本专利技术的第二方面，是提供了上述的发形霞水母多肽生长因子的制备方法。本专利技术将活体发形霞水母触手剪下，-70°C冻存，采用自溶法制备发形霞水母刺丝囊，利用组织研磨器破碎提取得到水母粗毒素，再经凝胶过滤层析和两次反相高效液相层析(RP-HPLC)分离纯化后即得到。本专利技术的发形霞水母多肽生长因子Cc-GRN-1的制备方法，具体步骤如下:A、准备水母刺丝囊毒素 取冻存的发形霞水母触手解冻，加入2-6倍体积预冷的蒸馏水，用搅拌器缓慢连续搅拌5h以上；混悬液用孔径为450μπι的40目分样筛过滤，收集滤液，3000 X g离心5min，移去上清液，沉淀用无菌人工海水洗涤2-3次，即得刺丝囊；向洗干净的刺丝囊加入50mmol/L、pH3.0的乙酸,转移至破碎管中，然后利用组织研磨器Min1-Beadbeater在转速为4600rpm条件下破碎3_6min，每破碎30s，将破碎管取出置于冰水中冷却lmin，破碎完毕后10000 Xg离心IOmin,收集上清即为水母刺丝囊毒素；上述操作都在0-4°C (如冰水混合物)条件下进行。所述的无菌人工海水，是用以下方法配制得到的:称取NaC128g，MgCl2.6H205g,KC10.8g, CaCl2L 033g,加蒸懼水至1L,混匀后用孔径为0.20 μ m的微孔滤膜过滤。B、Superdex30柱凝胶过滤层析将上述水母刺丝囊毒素用孔径为0.45 μ m的微孔滤膜过滤，滤液上Superdex30柱进行分离纯化，采用50mmol/L、pH3.0的乙酸洗脱,流速为lmL/min, 280nm波长的紫外检测器同步检测并收集洗脱体积110-115mL组分的洗脱峰SE2。我们用基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱(MALD1-T0F-MS)分析得知，其中流出体积110-115mL内的组分(参见图1洗脱峰SE2)含有多肽生长因子Cc-GRN-1。C、C8柱反相高效液相层析(RP-HPLC)将上述流出体积110_115mL组分以含0.本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种发形霞水母多肽生长因子，其特征在于，该多肽生长因子的氨基酸序列如SEQ?ID?NO:1所示。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张黎明，常银龙，肖良，郑杰民，王蓓蕾，王倩倩，尹慢慢，周永红，刘丹，
申请(专利权)人：中国人民解放军第二军医大学，
类型：发明
国别省市：
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