本发明专利技术公开了一种从南极磷虾中提取己烯雌酚的方法及高效薄层层析扫描检测方法，以南极磷虾为原料，用甲醇提取，过滤后用旋蒸仪蒸干滤液，得到含己烯雌酚的粗提物。南极磷虾己烯雌酚的检测采用高效薄层层析扫描法，展开剂为体积比为四氯化碳：乙酸乙酯：丙酮：冰醋酸：甲苯：环己烷=78-80：9-11：9-11：2-4：3d：2d的混合液，染色剂为10%硫酸乙醇溶液。用CAMAG薄层层析扫描仪-Ⅲ，以400nm吸收波长扫描检测，通过检测样品和标准品的吸光度计算得到己烯雌酚的含量，该方法操作简单、快速、准确、可靠。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种从南极磷虾中提取己烯雌酚的方法及高效薄层层析扫描检测方法。
技术介绍
己烯雌酚分子式为C18H20O2，分子量为268.35道尔顿，又称女性素、人造求偶素等，属于雌激素类物质，与天然雌二醇具有相同药理与治疗作用，可用于治疗妇科疾病、促进动物生长等。南极磷虾（Euphausia superba），是一种生活在南极洲水域的磷虾，以群集方式生活，有时密度可达每立方米10000-30000只。它们以微小的浮游植物作为食物，身长大约6cm，重约2g，最长寿命可达6年。它们是南极生态系统的关键物种，若以生物质能来说，它们可能是地球上最成功的生物物种。因南极磷虾蕴藏量巨大，加上群体的生活容易捕捞，所以吸引很多国家对它进行开发。目前，南极磷虾最主要用途是作为鱼饲料。而在挪威、加拿大等国则把南极磷虾虾油提取出来作为保健品，价格约2000元/kg。由于南极磷虾含有大量氟（约2400mg kg-1），不能直接食用。因而，以南极磷虾为原料，开发天然药物，对其综合利用，具有广阔的应用前景。己烯雌酚的检测主要采用酶联免疫检测、荧光免疫分析、放射性受体测定等免疫检测的方法以及气相色谱、高效液相色谱、生物分析法进行，但是这些检测方法有如下的不足之处：检测过程耗时长、费用高、可能会引起环境污染等。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种操作简单、快速、准确、可靠的南极磷虾己烯雌酚的检测方法。本专利技术是通过以下技术方案实现的：一种分析己烯雌酚的高效薄层层析扫描检测方法，步骤如下：（1）取待检测的样品液和1.0mg mL-1的标准液5μL点于同一块GF254高效薄层硅胶板上，以体积比为四氯化碳：乙酸乙酯：丙酮：冰醋酸：甲苯：环己烷=78-80：9-11：9-11：2-4：3d：2d的展开剂，在展开缸内展开，展距为9.5cm，展完后晾干展板；（2）用10%硫酸乙醇溶液染色，然后置于100℃-110℃条件下烘烤5-10分钟；（3）用CAMAG薄层扫描仪-Ⅲ扫描，扫描波长400nm，通过检测样品和标准品吸光度计算得到己烯雌酚的含量。样品液是通过将己烯雌酚粗提物溶于5mL甲醇中制的。己烯雌酚粗提物的提取方法，包括以下步骤：（1）取干的南极磷虾（w）和甲醇(v)以1：8-11的比例在35℃、350w、40kHz的条件下超声提取，过滤提取液；（2）将上述滤液置于旋蒸仪中蒸干，得到己烯雌酚的粗提物。在展开缸内展开时，先将展开剂在室温条件下预平衡35-45分钟，再放入高效薄层板，继续在室温条件下展开，当展距达到4.5cm时，取出薄层板，室温下晾干10分钟，再将薄层板放入展开缸中，展开到展距为9.5cm。制作标准曲线：（1）精密称取1.0000mg己烯雌酚标准品（中国食品药品检定研究院）溶于1.0mL甲醇，得浓度为1.0mg mL-1的标准液；（2）取上述配置好的己烯雌酚标准品溶液2μL、3μL、4μL、7μL、8μL，点样于同一GF254高效薄层硅胶板，按己烯雌酚的高效薄层层析扫描检测方法条件展开，晾干；（3）用10%硫酸乙醇溶液染色后，用CAMAG薄层扫描仪-Ⅲ，400nm吸收波长扫描，经薄层扫描仪软件wincats1.4.1统计得到回归方程Y=-285.7233+643.4958X，相关性系数r=0.99946，RSD=2.57%。本专利技术检测己烯雌酚的高效薄层扫描检测方法，其精密度、重复性、稳定性、回收率情况以及展开剂配方确定、染色时间及染色温度的确定、检测波长的确定如下：1.精密度测定精密吸取样品液，在同一块高效薄层硅胶板上水平点样5μl，展开，晾干，用10%硫酸乙醇溶液染色后用CAMAG薄层扫描仪-Ⅲ，以400nm吸收波长扫描得峰面积分别为3234.1，3301.3，3256.4，3199.2，3260.1，RSD=1.15%。2.重复性测定精密吸取样品液，在五块高效薄层硅胶板上分别点样5μl，展开，晾干，用10%硫酸乙醇溶液染色后用CAMAG薄层扫描仪-Ⅲ，以400nm吸收波长扫描的峰面积分别为3234.1，3310.2，3320.3，3299.3，3298.5，RSD=1.03%。3.稳定性测定吸取样品液5μL于高效薄层板上点样，展开，晾干，10%硫酸乙醇溶液染色后用CAMAG薄层扫描仪-Ⅲ，以400nm吸收波长扫描，以后每隔10分钟扫描一次，记录每次的峰面积，计算相应RSD值，多次试验证明，染色后20-60分钟内比较稳定，平均RSD=1.64%。具体数据如表1所示：表120min30min40min50min60min平均RSD1428.91425.81394.71390.11378.71.60%1470.31463.51431.51426.91417.01.64%1492.41489.11454.91446.81439.11.68%4.回收率试验精密吸取6μL样品液3次，分别加入2.853μg，5.706μg，7.838μg己烯雌酚标准品，点样，展开，晾干，用10%硫酸乙醇溶液染色后用CAMAG薄层扫描仪-Ⅲ，以400nm吸收波长扫描，计算得平均回收率为102.3%，RSD=0.87%。数据如表2所示：表2样品量/μg加入标准品量/μg测得量/μg回收率%5.7062.8538.610101.85.7065.70611.602103.35.7068.55914.410101.75.展开剂配方确定当展开剂设定为不同的配方时，每一种组合，都进行了多次的比例调试，分离效果如表3所示：表36.检测波长的确定由图1-图4的检测样品和标准品在不同波长时的扫描图像可知，当波长设定为400nm时，样品与标准品波长扫描图像最为吻合。本专利技术的有益效果：本专利技术以南极磷虾为材料提取己烯雌酚，南极磷虾生物量大，以其开发天然药物，对于含量微少的物质可通过加大其基数量来进行提取研究。利用高效薄层层析扫描检测方法分析雌酮的含量，自动化程度高，灵敏性强。与其他检测方法相比较，高效薄层层析检测法需要更少的试剂，这对环境有着较好的保护作用；整个分析检测过程十分短暂。以体积比四氯化碳：乙酸乙酯：丙酮：冰本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种己烯雌酚的高效薄层层析扫描检测方法，其特征在于，步骤如下：
（1）取待检测的样品液和1.0mg mL-1的标准液5μL点于同一块GF254高效薄层硅胶板上，
以体积比为四氯化碳：乙酸乙酯：丙酮：冰醋酸：甲苯：环己烷=78-80：9-11：9-11：2-4：
3d：2d的混合液为展开剂，在展开缸内展开，展距为9.5cm，展完后晾干展板；
（2）用10%硫酸乙醇溶液染色，然后置于100℃-110℃条件下下烘烤5-10分钟；
（3）用CAMAG薄层扫描仪-Ⅲ扫描，扫描波长400nm，通过检测样品和标准品的吸光度
计算得到己烯雌酚的含量。
2.如权利要求1所述的己烯雌酚的高效薄层层析扫描检测方法，其特征在于，所...
【专利技术属性】
技术研发人员：马善利，刘代成，
申请(专利权)人：山东师范大学，
类型：发明
国别省市：
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