生防菌株BS71及其在防治农作物黄曲霉毒素污染中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种生防菌株BS71及其在防治农作物黄曲霉毒素污染中的应用，所述的生防菌株BS71为枯草芽孢杆菌（Bacillus?subtilis）BS71，保藏编号为CGMCC?No.8191。所述的应用包括：制备含所述生防菌株BS71的生防菌剂；将所述的生防菌剂施在所述的农作物上。本发明专利技术的生防菌株对黄曲霉的拮抗作用强烈，可用于黄曲霉毒素污染的防治。且本发明专利技术提供了黄曲霉毒素污染的生物防治方法，不使用化学农药，具有无毒、不易产生抗药性、环境和生物安全等优点，具有广阔的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于作物病害防控
，尤其涉及一种生防菌株BS71及其在防治农作物黄曲霉毒素污染中的应用。
技术介绍
黄曲霉毒素（Aflatoxin，以下简写成AFT）主要是黄曲霉(Aspergillus flavus)和寄生曲霉(A.parasiticus)的代谢产物，是迄今发现的污染农产品毒性最强的一类生物毒素。据世界粮农组织估计，目前世界范围内有25％的农作物产品受真菌毒素的污染，其中主要就是AFT。在我国花生、玉米等作物的黄曲霉毒素污染严重影响着食品安全和农产品出口竞争力。由于AFT污染所带来的巨大经济损失和健康危害，人们一直在探索控制AFT污染的有效措施。选育抗病虫品种是控制黄曲霉毒素的重要途径之一，但由于选育抗AFT的作物品种周期长，在生产中广泛应用还尚需时日。目前控制农产品AFT比较有效的是生物防治，美国近来在AFT生物防治研究方面已取得重大进展，即：利用不产AFT的黄曲霉菌株NRRL21882能有效防治花生AFT污染，其防效可达90%以上，使花生中AFT的含量能有效控制在限量标准范围内。我国在AFT生物防治方面研究还刚刚起步。已有研究发现，一株不产黄曲毒素的黄曲霉菌株A051可用来控制农产品黄曲霉毒素的污染（ZL200810120929.2），由乳酪杆菌、枯草芽孢杆菌和异常汉逊酵母复合培养液在抑制黄曲霉生长和降解毒素方面有一定作用（CN201110190287.5）。公开号为CN102816725A的中国专利文献还公开了一种枯草芽孢杆菌T-500，该菌株虽然对多种病原菌具有拮抗作用，但是对黄曲霉菌的抑制率仅为35.7%，效果较差。我国微生物资源丰富，挖掘其它控制黄曲霉毒素污染的潜在生防菌，对有效控制我国黄曲霉毒素污染意义重大。
技术实现思路
本专利技术提供了一种生防菌株BS71，对黄曲霉菌菌丝生长、孢子萌发有较好的抑制作用，对储存过程中农作物黄曲霉毒素污染具有较好的防治效果。本专利技术提供了一种生防菌株BS71，分类命名枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis），完整命名为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）BS71，已于2013年9月16日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为：CGMCC No.8191。该菌株BS71在LB培养基上菌落表面粗糙、不透明，呈现皱缩、白色，能够形成芽孢，能移动，需氧型。本专利技术还提供了所述生防菌株BS71在防治农作物黄曲霉毒素污染中的应用。实验发现，本专利技术的生防菌株BS71对黄曲霉菌菌丝生长、孢子萌发有较好的抑制作用，对储存过程中花生、玉米黄曲霉毒素污染具有较好的防治效果，因此，可将该生防菌株BS71用于防治农作物的黄曲霉毒素污染。所述的农作物具体可以为花生或玉米，其中，所述花生的品种具体可以为鲁花9号。所述应用具体包括：（1）制备含所述生防菌株BS71的生防菌剂；（2）将所述的生防菌剂喷施在所述的植物上。喷施生防菌剂时，选择农作物易被黄曲霉毒素污染的时期进行喷施,喷施至植物表面水珠流动即可。如对花生黄曲霉毒素污染进行防治时，可在储藏期将所述的生防菌剂喷施在花生果实上，喷施至花生果实表面水珠流动即可，喷施结束后可将花生置于常温储存。为达到较好的防治效果，所述的生防菌剂中，所述生防菌株BS71的浓度优选为1×108～1010CFU/mL，更优选为1×108CFU/mL。所述生防菌剂可通过如下方法进行制备：（1）将所述生防菌株BS71于培养基中培养至OD600为0.5～0.8，获得种子液；（2）将种子液接种于发酵培养液中扩大培养，调节发酵液中生防菌株BS71的浓度至1×108～1010CFU/mL，获得所述生防菌剂。所述的培养基可选用LB液体培养基。其中，所述种子液的接种量优选为1～2%（v/v），优选为1%（v/v）。以每升计，所述发酵培养液的配方为：葡萄糖，18～22g；L-谷氨酸，2.4～2.6g；L-天门冬酰胺，2.4～2.6g；KH2PO4，0.8～1.2g；MgSO4·7H2O，0.4～0.6g；KCl，0.4～0.6g；酵母粉，0.8～1.2g；L-苯丙氨酸，2～3×10-3g；MnSO4·H2O，5～6×10-3g；CuSO4·5H2O，0.16～0.18×10-3g；FeSO4·7H2O，0.15～0.17×10-3g；调节pH值为7.0。作为进一步优选，以每升计，所述发酵培养基液的配方为：葡萄糖，20g；L-谷氨酸，2.5g；L-天门冬酰胺，2.5g；KH2PO4，1g；MgSO4·7H2O，0.5g；KCl，0.5g；酵母粉，1g；L-苯丙氨酸，2×10-3g；MnSO4·H2O，5×10-3g；CuSO4·5H2O，0.16×10-3g；FeSO4·7H2O，0.15×10-3g；调节pH值为7.0。该发酵培养液由Landy培养基改良而来，更有利于本专利技术所述枯草芽孢杆菌的增殖。本专利技术中，所述扩大培养是发酵罐中进行的，所述扩大培养的温度为28～30℃，优选为30℃，所述扩大培养的时间为20～24h。在该培养条件下，在保证菌活力的同时使其具有较快的增殖速度。扩大培养过程中，发酵液pH值维持在7.0，溶氧量20%，通气量5-7m3/小时，转速240～260r/min，罐压0.05-0.1KPa。发酵液出罐后梯度稀释涂板检测并调节菌悬液浓度为1×108～1010CFU/mL。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：（1）本专利技术的生防菌株BS71为枯草芽孢杆菌，生防菌BS71菌体和上清在平板拮抗试验中显示对黄曲霉菌菌丝生长、孢子萌发有较好的抑制作用，可将其应用于农作物黄曲霉毒素污染中的生物防治。（2）光照培养箱进行的花生黄曲霉毒素污染防治试验效果显示，本专利技术的生防菌株BS71能有效抑制病菌在花生表面的生长，防效高达82.56%，在常温贮藏条件下，本专利技术的生防菌株BS71对花生黄曲霉毒素污染的防效仍可达到70%以上，防治效果好，因此可利用该生防菌株BS71防治花生黄曲霉毒素污染。（3）本专利技术生防菌株BS71应用于农作物黄曲霉毒素污染中的防治，可完全克服因化学农药的使用所带来的一系列问题，因而有利于农产品的无公害生产，农民可以不用或减少其他化学农药的用量，这不仅可为农民节省开支，而且有利于提高产品质量。附图说明图1为生防菌BS71的菌落形态图。图2为生防菌BS71平板拮抗黄曲霉菌菌丝生长。<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种生防菌株BS71，其特征在于，命名为枯草芽孢杆菌（Bacillus 
subtilis）BS71，保藏编号为CGMCC No.8191。
2.如权利要求1所述的生防菌株BS71在防治农作物黄曲霉毒素污染
中的应用。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的农作物为花生。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述花生的品种为鲁花9
号。
5.如权利要求1～4任一项所述的应用，其特征在于，所述的应用包
括：
（1）制备含所述生防菌株BS71的生防菌剂；
（2）将所述的生防菌剂施在所述的农作物上。
6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的生防菌剂中，所
述生防菌株BS71的浓度为1×108～1010CFU/mL。
7.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述生防菌剂可通过如
下方法进行制备：
（1）将所述生...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈云，尹燕妮，马忠华，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：