一种高效防治多种作物枯萎病的生防复合菌剂LAS制造技术

本发明专利技术公开了一种高效防治多种作物枯萎病的生防复合菌剂LAS，由芽胞杆菌JC65、蜡状芽孢杆菌CH01、枯草芽胞杆菌SM16组成。将3种细菌单剂按照各菌活菌数量1:1:1配成混合制剂，合剂中活菌总浓度为1×10

【技术实现步骤摘要】
一种高效防治多种作物枯萎病的生防复合菌剂LAS
本专利技术涉及一种高效防治多种作物枯萎病的生防复合菌剂LAS，属于农业生物防治

技术介绍
西瓜、黄瓜、甜瓜和南瓜在全球范围内的农业作物产量中占有举足轻重的地位，其中枯萎病害是影响上诉4种农业作物产量和品质的主要病害之一。枯萎病是由尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporumf.sp.)引起一种毁灭性的土传性病害，俗称萎凋病、死秧病等，在世界范围内均有发生。随着种植面积的扩大和连茬种植更加重了枯萎病的发生。目前，枯萎病害防治主要的措施还是使用化学药剂。虽然化学药剂可以在一定程度上防治枯萎病，但是与此同时，土壤中许多有益的微生物也会受到不同程度的伤害。有些化学药剂的使用会造成土壤污染和化学农药残留等严重的问题。除此之外，选育抗病品种和加强田间管理措施对防治病害也有一定的作用。但是抗病品种的选育周期长，且枯萎病菌致病力变异大，抗性极易消失养。农业措施中比较有效的是轮作倒茬，尤其是水旱轮作，能够有效的降低土壤中菌量，减少病害发生，但在实际应用中存在一定困难。一是西瓜、黄瓜、南瓜和甜瓜属于高经济值作物；二是由于枯萎菌菌能够在土壤中存活十几到几十年，短期轮作达不到预期目的；三是种植大多数非寄主植物不能减少微菌核在土壤中的数量，而且非寄主的根分泌物仍能为微菌核存活提供营养。在这种发展情况下，不少目光开始转移到生物防治手段。生物防治与其他方法相比，具有安全、有效、持久的特点，特别是避免了化学防治带来的一系列问题。生防制剂对病害防治效果好，对人畜无毒，不污染环境，无残留；对病虫害的杀伤特异性强，不伤害天敌，有益生物，能保持生态平衡；生产原料和有效成分为天然产物易降解，可回归大自然，保证可持续发展；可用生物技术和基因工程的方法对微生物进行改；多种因素和成分发挥作用，病原菌难以产生抗药性。据报道，枯萎病的生防真菌主要有木霉菌、粘帚霉，但上述生防菌防治效果不够理想，主要原因是这些生防菌在寄主根际定殖能力差。枯萎病生防细菌中比较有前途的种类是芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、荧光假单胞菌、芽孢杆菌等。一般说来，多种生防菌混合使用其效果比单一生防菌要好。另外，将生防菌剂和农业栽培措施结合起来使用，可为生防菌提供一个良好的栖境，使其能尽量发挥其本身的防治潜能。
技术实现思路
本专利技术目的是提供一种高效防治多种作物枯萎病的微生物组合物及由其制备的微生物复合菌剂。本专利技术的另一目的是提供该微生物组合物及由其制备的微生物复合菌剂的应用。本专利技术的目的可通过以下技术方案实现：一种高效防治多种作物枯萎病的微生物组合物，由以下3种细菌组成,分别是：芽胞杆菌JC65(Bacillussp.)，于2010年12月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCCNo.4475；蜡状芽孢杆菌CH01(Bacilluscereuse),于2015年11月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCCNO.11677；枯草芽胞杆菌SM16为(Bacillussubtilis)，于2009年06月18日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCCNo.3127。本专利技术所述的微生物组合物在防治枯萎病和促进作物生长方面的应用。优选将所述的三种菌株JC65、CH01和SM16发酵后的湿菌与本实验室的菌体保藏液(属本实验室已授权专利，专利号ZL02112559.7，公开专利号CN1358838，公开日：2002年7月17日)按1：40(g/ml)配成菌剂，可室温保存2～3年。该复合菌剂可以稀释后于西瓜苗移栽时浇灌施用。本专利技术所述的微生物组合物在制备防治枯萎病和促进作物生长的微生物复合菌剂中的应用。本专利技术所述的微生物组合物制备的微生物复合菌剂。本专利技术所述的微生物复合菌剂,优选通过以下方法制备得到：将所述的菌株JC65、CH01和SM16分别接种到LB平板上划线，28℃生化培养箱中培养14-16h，待长出单菌落后，挑取单菌落接入含有5mL的LB培养液的试管中，置于28℃，200r/min的摇床中培养，制成种子液；以1％的接种量将种子液接种于装有500mL的LB培养液的三角瓶里，置于28℃，200r/min的摇床中培养48h，将3种菌液浓度稀释到5×107CFU/mL后按照1:1:1的比例混合均匀，即为所述的微生物复合菌剂。本专利技术所述的微生物复合菌剂的制备方法，包括：将所述的菌株JC65、CH01和SM16分别接种到LB平板上划线，28℃生化培养箱中培养14-16h，待长出单菌落后，挑取单菌落接入含有5mL的LB培养液的试管中，置于28℃，200r/min的摇床中培养，制成种子液；以1％的接种量将种子液接种于装有500mL的LB培养液的三角瓶里，置于28℃，200r/min的摇床中培养48h，将3种菌液浓度稀释到5×107CFU/mL后按照1:1:1的比例混合均匀。本专利技术所述的微生物复合菌剂在防治枯萎病和促进作物生长方面的应用。所述的应用优选在作物移栽和播种的时候进行稀释灌根使用。有益效果本专利技术的优点和积极效果表现在：本专利技术是专门针对枯萎病病害开发的生防制剂。因其属于生物制剂，完全没有因化学农药的使用所带来的一系列问题，利于西瓜、黄瓜、南瓜和甜瓜的无公害生产，农民可以不用或减少其他化学农药的用量，这不仅可为农民节省开支，而且有利于这些作物的出口贸易。温室试验表明，LAS合剂能有效控制枯萎病对西瓜的侵染，达到控制病情发生的效果，防病效果有86.7％，促生效果有33.3％；大田试验表明，LAS合剂一方面能控制病情发生，防效保持在75.0％，同时能够促进上诉4种作物的生长，增产增收，促生效果达66.6％；综合温室和大田促生试验发现，LAS合剂能促进上诉4种作物的生长，提高产量。附图说明图1不同生防菌与枯萎病菌的拮抗效果图图2不同生防菌对枯萎病菌生长的抑制图图3西瓜移栽后30天的促生效果图生物材料保藏信息JC65，芽胞杆菌Bacillussp.，于2010年12月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号3号院，中国科学院微生物研究所，菌种保藏号为CGMCCNo.4475。CH01，蜡状芽孢杆菌Bacilluscereuse,于2015年11月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号3号院，中国科学院微生物研究所，菌种保藏号为CGMCCNO.11677。SM16，枯草芽胞杆菌Bacillussubtilis，于2009年06月18日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号3号院，中国科学院微生物研究所，菌种保藏号为CGMCCNo.3127。具体实施方式实施例11.菌株来源：JC65由黄瓜根围土壤中分离得到；SM16和CH01由番茄健株根部土壤中分离得到。2.菌株分离方法：采用平板稀释法(参考中国科学院南京土壤所微生物室.土壤微生物研究法[M].北京：科学出版杜，1985.)。3.菌株筛选依据：西瓜枯萎病病菌与生防菌的拮抗作用测定(对峙培养法，林福呈，李德堡.枯草芽孢杆菌(Bacillussubtil本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种高效防治多种作物枯萎病的微生物组合物，其特征在于由以下3种细菌组成,分别是：芽胞杆菌JC65(Bacillus sp.)，于2010年12月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC No.4475；蜡状芽孢杆菌CH01(Bacillus cereuse),于2015年11月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC NO.11677；枯草芽胞杆菌SM16为(Bacillus subtilis)，于2009年06月18日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC No.3127。

【技术特征摘要】
1.一种高效防治多种作物枯萎病的微生物组合物，其特征在于由以下3种细菌组成,分别是：芽胞杆菌JC65(Bacillussp.)，于2010年12月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCCNo.4475；蜡状芽孢杆菌CH01(Bacilluscereuse),于2015年11月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCCNO.11677；枯草芽胞杆菌SM16为(Bacillussubtilis)，于2009年06月18日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCCNo.3127。2.权利要求1所述的微生物组合物在防治枯萎病和促进作物生长方面的应用。3.权利要求1所述的微生物组合物在制备防治枯萎病和促进作物生长的微生物复合菌剂中的应用。4.权利要求1所述的微生物组合物制备的微生物复合菌剂。5.权利要求4所述的微生物复合菌剂,其特征在于通过以下方法制备得到：将权利要求1所述的菌株JC65、CH01和SM16分别接种到LB平板上划线，28℃生化培养箱中培养14-...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭坚华，蒋春号，米丹丹，郑颖，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32