一种载rtPA纳米粒及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种载rtPA纳米粒及其制备方法，该载rtPA纳米粒包含一内核，核芯为rtPA，核壳主要由PLGA和油酸修饰的Fe3O4组成，核壳表面覆盖或部分覆盖壳聚糖膜和附于壳聚糖膜表面的cRGD。该纳米粒对血栓具有靶向性，能够在MRI监控下，同时具有靶向治疗和诊断双重作用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于药物制剂领域，涉及一种载rtPA纳米粒及其制备方法，具体涉及一种Fe3O4-PLGA-rtPA/CS-cRGD纳米粒。
技术介绍
rtPA(Recombinant Tissue Plasminogen Activator)又称为重组组织型纤溶酶原激活剂，又名艾通立、爱通立Actilyse，是主要用于急性心肌梗塞的溶栓治疗；血流不稳定的急性大面积肺栓塞的溶栓疗法的药物。rtPA是一种糖蛋白，可激活纤溶酶原成为纤溶酶，当静脉使用时，在循环系统中只有与其纤维蛋白结合后才表现出活性，其纤维蛋白亲和性很高。当和纤维蛋白结合后，本品被激活，诱导纤溶酶原成为纤溶酶，溶解血块，但对整个凝血系统各组分的系统性作用是轻微的，因而不会出现出血倾向。本品不具抗原性，所以可重复使用。用于急性心肌梗塞的溶栓治疗；用于血流不稳定的急性大面积肺栓塞的溶栓疗法；用于急性缺血性脑卒中的溶栓治疗时，必须在脑梗塞症状发生的3小时内进行治疗，且需经影像检查（如CT扫描）除外颅内出血的可能。动脉血栓形成,如颈总动脉、冠状动脉、下肢动脉血栓形成等作为一种严重威胁人类生命的疾病，愈来愈受到广大医学工作者的重视。早期准确诊断、及时治疗能挽救缺血坏死组织，减少并发症，降低死亡率。超声、CT、MRI等新技术的发展，为动脉血栓形成的诊断提供了一种新的成像方法，但对其早期准确诊断仍然受限。动脉血栓形成的治疗方法主要包括溶栓治疗和介入治疗，后者虽然疗效快，但具有创伤性，而在早期仍主张溶栓治疗。然而，目前多用的溶栓剂如组织型纤溶酶原激活剂(tPA)和rtPA缺乏组织特异性，不能选择性地作用于病变部位，大剂量用药易引发出血或溶栓后血管再闭塞，限制了它的临床应用。将溶栓药物靶向血栓部位，增加血栓局部药物浓度，从而特异、高效地溶解血栓是目前溶栓治疗的一个研究热点。超声微泡造影剂作为载体工具运送基因、药物，以及在微泡表面结合配体对靶组织进行靶向显影已获得了巨大成功。分子影像学是传统的医学影像技术与现代分子生物学相结合而产生的一门新兴交叉学科，是非侵入性地对活体内的参与生理和病理过程的分子，进行定性或定量可视化的一种全新的科学观察方法与手段。在分子和细胞水平，对影像的深入研究，将带来方便快捷高质量的影像技术，将有可能解决目前研究方面存在的诸多问题。MRI分子影像学具有较高的组织分辨率、多参数、多方位成像等优点，近年来发展迅速，目前，MRI的分辨率已达到微米级，可同时获得解剖及生理信息，这些正是核医学、光学、超声成像等成像技术的劣势。因此，靶向造影剂和分子影像学尤其是MRI分子影像学的发展有望促进动脉血栓的准确诊断及溶栓治疗技术的发展。
技术实现思路
本专利技术提供了一种载rtPA纳米粒，包含一内核,核芯为rtPA,核壳主要由PLGA和油酸修饰的Fe3O4组成，核壳表面覆盖或部分覆盖壳聚糖膜和附于壳聚糖膜表面的cRGD。上述本专利技术的载rtPA纳米粒，PLGA和油酸修饰Fe3O4的投料质量比为100：1～1.5,优选100：1.3，壳聚糖与cRGD的质量比为4～6:1，优选5：1，所述rtPA占纳米粒总重量的0.1～0.2%，优选0.12%。本专利技术的另一目的在于提供了一种制备载rtPA纳米粒的方法，其中，所述载rtPA纳米粒包含一内核,核芯为rtPA,核壳主要由PLGA和油酸修饰的Fe3O4组成，核壳表面覆盖或部分覆盖壳聚糖膜和附于壳聚糖膜表面的cRGD，该方法包括以下步骤：1）CS膜的制备：将CS溶解于1%醋酸溶液中，脱去气泡后，倒入成膜模具中，流延平整，放入烘箱中烘干，再浸泡于5%氢氧化钠溶液中，然后用双蒸水漂洗直至pH=7，得到CS膜，自然风干备用。2）CS-cRGD膜的制备：摩尔比为1.5:1的适量的EDC和NHS溶于PBS溶液中，用氢氧化钠将其pH调节至7，加入cRGD后与步骤1）的CS膜反应，得到CS-cRGD膜，用双蒸水反复洗涤以除去未反应的物质，自然风干备用。3）载rtPA纳米粒的制备：采用双乳化溶剂挥发法，将PLGA和油酸修饰Fe3O4溶解于二氯甲烷中，作为油相，加入1mg/mL的rtPA溶液作为内水相，冰浴冷却，超声声震，得到棕色产物，取步骤2）制得的CS-cRGD溶解于0.5%的醋酸溶液中，再与3%PVA溶液混合均匀，后加入到棕色产物中作为外水相，搅拌，并调节pH至6-7，搅拌均匀，最后加入2%异丙醇溶液，室温下搅拌使二氯甲烷充分挥发，离心分离洗涤得到Fe3O4-PLGA-rtPA/CS-cRGD纳米粒，冷冻干燥得到载rtPA纳米粒。在一优选实施方案中，本专利技术的一种制备载rtPA纳米粒的方法，包括以下步骤：1）CS膜的制备：100mg CS充分溶解于10ml1%醋酸溶液中，超声波脱去气泡后，倒入四氟乙烯模具中，流延平整，放入40℃烘箱中烘干，再将其取出置入5%氢氧化钠溶液中浸泡半小时，用双蒸水充分漂洗直至pH=7，得到CS膜自然风干备用。2）CS-cRGD膜的制备：摩尔比为1.5:1的适量的EDC和NHS溶于PBS溶液中，用氢氧化钠将其pH调节至7，加入0.05mM的cRGD和步骤1）的CS膜，在4℃下反应24小时，得到CS-cRGD膜，用双蒸水反复洗涤以除去未反应的物质，自然风干备用。3）载rtPA纳米粒的制备：采用双乳化溶剂挥发法，称取100mgPLGA和100uL Fe3O4溶解于2ml二氯甲烷中，作为油相，加入0.2mL1mg/mL的rtPA溶液作为内水相，冰浴超声声震，得到棕色产物，取50mg步骤2）制得的CS-cRGD溶解于5ml0.5%的醋酸溶液中，再与5ml3%PVA溶液混合均匀后加入到棕色产物中作为外水相，搅拌，并调节pH至6-7，均质5分钟，最后加入20mL2%异丙醇溶液，室温下搅拌2小时以使有机溶剂充分挥发，离心洗涤Fe3O4-PLGA-rtPA/CS-cRGD纳米粒，冷冻干燥即得。术语：“cRGD”定义为精氨酰-甘氨酰-天冬氨酸环肽；“PLGA”定义为聚乳酸羟基乙酸；“CS”定义为壳聚糖，“rtPA”定义为重组组织型纤溶酶原激活剂；“EDC”定义为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺；“NHS”定义为N-羟基琥珀酰亚胺；“PBS溶液”又称磷酸盐缓冲溶液；PVA定义为聚乙烯醇，这些术语都是本领域惯用的。“CS-cRGD-Fe3O4-PLGA-rtPA纳米粒”与“Fe3O4-PLGA-rtPA/CS-cRGD纳米粒”具有等同含义，均是代表本专利技术的rtPA纳米粒的基本结构。本专利技术的rtPA纳米粒,有益效果:本专利技术的rtPA纳米粒即Fe3本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种载rtPA纳米粒，包含一内核，核芯为rtPA，核壳主要由PLGA和油酸修饰Fe3O4组成，核壳表面覆盖或部分覆盖壳聚糖CS膜和附于壳聚糖CS膜表面的cRGD。

【技术特征摘要】
1.一种载rtPA纳米粒，包含一内核，核芯为rtPA，核壳主要由PLGA和油酸修饰Fe3O4组成，
核壳表面覆盖或部分覆盖壳聚糖CS膜和附于壳聚糖CS膜表面的cRGD。
2.如权利要求1所述的纳米粒，PLGA和油酸修饰Fe3O4的投料质量比为100:1～1.5。
3.如权利要求2所述的纳米粒，PLGA和油酸修饰Fe3O4的投料质量比为100:1.3。
4.如权利要求1所述的纳米粒,壳聚糖与cRGD的质量比为4～6:1。
5.如权利要求4所述的纳米粒,壳聚糖与cRGD的质量比为5:1。
6.如权利要求1所述的纳米粒,所述rtPA占纳米粒总重量的0.1～0.2%。
7.如权利要求6所述的纳米粒,所述rtPA占纳米粒总重量的0.12%
8.一种制备权利要求1的纳米粒的方法，该方法包括以下步骤：
1）CS膜的制备：将CS溶解于1%醋酸溶液中，脱去气泡后，倒入成膜模具中，流延平
整，放入烘箱中烘干，再浸泡于5%氢氧化钠溶液中，然后用双蒸水漂洗直至pH=7，得到CS
膜，自然风干备用。
2）CS-cRGD膜的制备：摩尔比为1.5:1的适量的EDC和NHS溶于PBS溶液中，用氢氧化
钠将其pH调节至7，加入cRGD与步骤1）的CS膜反应，得到CS-cRGD膜，用双蒸水反复洗
涤以除去未反应的物质，自然风干备用。
3）载rtPA纳米粒的制备：采用双乳化溶剂挥发法，将PLGA和油酸修饰Fe3O4溶解于二
氯甲烷中，作为油相，加入1mg/mL的rtPA溶液作为内水相，冰浴冷却，超声声震，得到棕
色产物，将CS-cRGD溶解于0.5%的醋酸溶液中，再与3...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭大静，周君，张瑜，敖梦，郑元义，王志刚，
申请(专利权)人：重庆医科大学附属第二医院，
类型：发明
国别省市：重庆;85