血浆肾素的质谱分析制造技术

提供了利用质谱法测量血浆样本中肾素活性的方法。该方法总体包括电离来自样本的纯化的血管紧张素1和检测生成的血管紧张素1离子的量。然后将所检测的血管紧张素1离子的量关联于样本中生成的血管紧张素1的量，该血管紧张素1的量进而被关联于样本中的肾素活性。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】提供了利用质谱法测量血浆样本中肾素活性的方法。该方法总体包括电离来自样本的纯化的血管紧张素1和检测生成的血管紧张素1离子的量。然后将所检测的血管紧张素1离子的量关联于样本中生成的血管紧张素1的量，该血管紧张素1的量进而被关联于样本中的肾素活性。【专利说明】血浆肾素的质谱分析本申请是申请日为2009年8月7日、申请号为200980130208.2、题为“血浆肾素的质谱分析”的专利申请的分案申请。专利
本专利技术涉及肾素活性的测量。在一个具体方面，本专利技术涉及通过HPLC-质谱法测量血浆肾素活性的方法。专利技术背景下列专利技术背景的描述只是提供用来辅助理解本专利技术，并非承认描述或构成本专利技术的现有技术。如Fredline等Clin.Chem.45:659-664(1999)所述，肾素是通过肾小球旁细胞分泌到血液中的蛋白水解酶。肾素作用于血管紧张素原，生成被称作血管紧张素I(Angl)的十肽。Angl被血管紧张素转换酶进一步切割，形成被称作血管紧张素2 (Ang2)的八肽。Ang2刺激细胞生长、钠的肾小管运输和醛固酮释放。Ang2是人最有效的血管加压剂之一，并在血压调控中起重要作用。Ang2由于其循环浓度非常低和半衰期极短而难于直接测量；比Ang2更稳定的Angl为测量肾素-血管紧张素系统的状态提供了更好的分析物。由Angl的生成速率确定“血浆肾素活性”(PRA)被临床用于高血压的诊断和控制。确定PRA的经典方法是放射免疫测定(RIA)，参见Sealey，Clin.Chem.37:1811-1819(1991) ;Shionoiri 等，Horm Res.37:171-175 (1992)。典型的放射免疫测定通过在试管中同时制备一系列标准和未知的混合物而进行，各混合物包含相同浓度的标记抗原和特异性抗体。适当的反应时间后，通过多种技术中之一将标记抗原的抗体结合(B)部分与游离(F)部分分离。将标准品的B/F比作为未标记抗原浓度的函数作图(标准曲线)，且通过将观测到的B/F比与标准曲线进行比较来确定未知的抗原浓度。放射免疫测定法基于竞争性结合原理，且所用的抗体可进行与其它血浆蛋白如内源血管紧张素的非特异性结合。这种潜在的交叉反应性可引起PRA的过高评价。另一个方法是在用RIA定量前利用HPLC从其它血管紧张素中分离Angl (参见下列实例:Meng 等,J.Am.Soc.Nephrol.6:1209-1215(1995) ；Meng 等,J.Chromatogr.21, 614(1):19-25(1993) ；Kohara 等，P印tidesl2:1135-1141 (1991))。已利用紫外光、荧光和质谱检测发展了用于定量Angl的这些HPLC法(参见下列实例=Klickstein等，AnalBiocheml20:146-150(1982) ；Miyazaki 等,JChromatogr.490:43-51(1989)和 Fredline等，Clin.Chem.45:659-664(1999))。例如，Fredline等描述了利用HPLC-电喷雾-串联质谱法进行血浆肾素活性的测量。在进行该测量中，Fredline等在水敏性酶抑制剂(即，苯甲基磺酰氟(PMSF))存在下温育血浆样本，并通过观测具有(m/z)649的前体离子的碰撞诱导解离来测量温育期间生成的血管紧张素I量。专利技术概述本专利技术提供了通过质谱法测量样本中血管紧张素I的量和测量样本中血浆肾素活性的方法，所述质谱法包括串联质谱法。一方面，提供测量样本中血管紧张素I的量的方法。该方法可包括:(a)电离样本中的血管紧张素1，产生一种或更多种可由质谱法检测的离子；(b)通过质谱法检测血管紧张素I尚子(一种或更多种)的量，其中该尚子选自质/荷比为433.0±0.5、619.4±0.5、647.4±0.5和1297±0.5的离子；以及(c)利用所检测的血管紧张素I离子(一种或更多种)的量来测量样本中血管紧张素I的量。在一些实施方式中，该方法的定量极限是小于或等于0.1ng/mL ;如小于或等于0.05ng/mL ;如约0.03ng/mL。在进一步的实施方式中，该方法包括通过高效液相色谱(HPLC)从样本纯化血管紧张素I。在一些实施方式中，该方法进一步包括用固相萃取柱纯化样本中的血管紧张素I。在其它实施方式中，通过与内标的比较，将血管紧张素I离子(一种或更多种)的量关联于样本中血管紧张素I的量。在一些实施方式中，降解标准品可用于确定血管紧张素I生成后的降解程度。另一方面，提供测量样本中血管紧张素I的量的方法。该方法可包括:(a)电离来自样本的血管紧张素1，产生一种或更多种离子；以及(b)通过质谱法测量至少一种所述尚子的量，其中所述尚子选自具有下列质/荷比的尚子:433.0±0.5、619.4±0.5、647.4±0.5和1297±0.5;以及其中所测的血管紧张素1离子(一种或更多种)的量提供样本中血管紧张素I的量的度量。在一些实施方式中，降解标准品可用于确定血管紧张素I生成后的降解程度。另一方面，提供测量样本中血管紧张素I的量的方法。该方法可包括:(a)在适于样本中的肾素生成血管紧张素I的条件下，温育与水稳定性蛋白酶抑制剂预混合的样本，该水稳定性蛋白酶抑制剂对肾素无效；(b)通过液相色谱从样本中纯化血管紧张素I ;(c)电离纯化的血管紧张素1，产生一种或更多种可由质谱检测的离子；(d)通过质谱检测一种或更多种血管紧张素离子的量；以及(e)利用所测的离子(一种或更多种)量来测量样本中血管紧张素I的量。在一些实施方式中，该方法的定量极限是小于或等于0.1ng/mL ;如小于或等于0.05ng/mL ;如约0.03ng/mL。在进一步的实施方式中，由质谱生成的离子选自选自具有下列质/荷比的离子:433.0±0.5、619.4±0.5、647.4±0.5和1297±0.5。在相关的实施方式中，离子包括具有质/荷比433.0±0.5的前体离子和一种或更多种碎片离子，该碎片离子选自具有质/荷比619.4±0.5和647.4±0.5的离子。在其它实施方式中，通过与内标的比较，将血管紧张素I离子(一种或更多种)的量关联于检测样本中血管紧张素I的量。在其它优选实施方式中，该方法进一步包括用固相萃取柱纯化样本中的血管紧张素I。在其它优选实施方式中，水稳定性蛋白酶抑制剂是氨乙基苄基磺酰氟(aminoethy lbenzy Isulfony I fluoride)。在一些实施方式中，降解标准品可用于确定血管紧张素I生成后的降解程度。另一方面，提供测量样本中血管紧张素I的量的方法。该方法可包括:(a)在适于样本中的肾素生成血管紧张素I的条件下温育样本；(b)通过固相萃取从所述样本中纯化血管紧张素I ;(c)步骤(b)后，通过联机处理的液相色谱进一步纯化血管紧张素I ;(d)电离步骤(C)纯化的血管紧张素1，产生一种或更多种可由质谱法检测的离子；以及(e)通过质谱检测一种或更多种血管紧张素I离子的量，(f)利用所测的离子(一种或更多种)量来测量样本中血管紧张素I的量。在一些优选实施方式中，液相色谱是高效液相色谱(HPLC)。在其它实施方式中，该方法的定量极限是小于或等于0.1ng/mL本文档来自技高网...

【技术保护点】
测量样本中血管紧张素1的量的方法，所述方法包括：(a)电离来自所述样本的血管紧张素1，产生一种或更多种可由质谱检测的离子；(b)通过质谱检测所述血管紧张素离子(一种或更多种)的量，所述离子选自具有质/荷比433.0±0.5、619.4±0.5、647.4±0.5和1297±0.5的离子；以及(c)利用所检测的离子(一种或更多种)的量来测量所述样本中血管紧张素1的量。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：C·E·拜尔斯特姆，R·E·瑞茨，N·J·克拉克，
申请(专利权)人：奎斯特诊断投资公司，
类型：发明
国别省市：美国;US