【技术实现步骤摘要】
新型CRISPR酶和系统及应用
[0001]本专利技术涉及基因编辑领域,特别是规律成簇的间隔短回文重复
(CRISPR)
。
具体而言,本专利技术筛选到了一类新型的
Cas
酶,并基于该新型
Cas
酶开发了相应的基因编辑工具及其应用
。
技术介绍
[0002]CRISPR/Cas
技术是一种被广泛使用的基因编辑技术,它通过
RNA
引导对基因组上的靶序列进行特异性结合并切割
DNA
产生双链断裂,利用生物非同源末端连接或同源重组进行定点基因编辑
。
[0003]CRISPR/Cas9
系统是最常用的
II
型
CRISPR
系统,它识别3’‑
NGG
的
PAM
基序,对靶标序列进行平末端切割
。CRISPR/Cas Type V
系统是一类新发现的
CRISPR
系统,它具有5’‑
TTN
的基序,对靶标序列进行粘性末端切割,例如
Cpf1,C2c1,CasX,CasY。
然而目前存在的不同的
CRISPR/Cas
各有不同的优点和缺陷
。
例如
Cas9,C2c1
和
CasX
均需要两条
RNA
进行指导
RNA
,而
Cpf1
...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.
一种
Cas
蛋白,其特征在于,所述
Cas
蛋白为以下
I
‑
III
任一所述的
Cas
蛋白:
I、Cas
蛋白的氨基酸序列与
SEQ ID No.1
‑6任一序列相比,具有至少
80
%
、
至少
85
%
、
至少
90
%
、
至少
91
%
、
至少
92
%
、
至少
93
%
、
至少
94
%
、
至少
95
%
、
至少
96
%
、
至少
97
%
、
至少
98
%
、
至少
99
%
、
至少
99.1
%
、
至少
99.2
%
、
至少
99.3
%
、
至少
99.4
%
、
至少
99.5
%
、
至少
99.6
%
、
至少
99.7
%
、
至少
99.8
%
、
或至少
99.9
%的序列同一性,并且基本保留了其源自的序列的生物学功能;
II、
所述
Cas
蛋白的氨基酸序列与
SEQ ID No.1
‑6任一序列相比,具有一个或多个氨基酸的置换
、
缺失或添加的序列,并且基本保留了其源自的序列的生物学功能;
III、
所述
Cas
蛋白包含
SEQ ID No.1
‑6任一所示的氨基酸序列
。2.
一种融合蛋白,所述融合蛋白包括权利要求1所述的
Cas
蛋白和其他的修饰部分
。3.
一种分离的多核苷酸,其特征在于,所述多核苷酸为编码权利要求1所述
Cas
蛋白的多核苷酸序列,或编码权利要求2所述融合蛋白的多核苷酸序列
。4.
一种
gRNA
,其特征在于,所述
gRNA
能够结合权利要求1所述的
Cas
蛋白
。5.
一种同向重复序列,其特征在于,所述同向重复序列包含
SEQ ID No.19
‑
24
任一所示的序列
。6.
一种载体,其特征在于,所述载体包含权利要求3所述的多核苷酸以及与之可操作连接的调控元件
。7.
一种
CRISPR
‑
Cas
系统,其特征在于,所述系统包括权利要求1所述的
Cas
蛋白以及至少一种权利要求4所述的
gRNA。8.
一种载体系统,其特征在于,所述载体系统包括一种或多种载体,该一种或多种载体包括:
a)
第一调控元件,该第一调控元件可操作地与权利要求4所述的
gRNA
连接,
b)
第二调控元件,该第二调控元件可操作地与权利要求1所述的
Cas
蛋白连接;其中组分
(a)
和
(b)
位于该系统的相同或不同载体上
。9.
一种组合物,其特征在于,所述组合物包含:
(i)
蛋白组分,其选自:权利要求1所述的
Cas
蛋白或权利要求2所述的融合蛋白;
(ii)
核酸组分,其选自:权利要求4所述的
gRNA
,或编码权利要求4所述的
gRNA
的核酸,或权利要求4所述的
gRNA
的前体
RNA
,或编码权利要求4所述的
gRNA
的前体
RNA
核酸;所述蛋白组分与核酸组分相互结合形成复合物
。10.
一种活化的
CRISPR
复合物,所述活化的
CRISPR
复合物包含:
(i)
蛋白组分,其选自:权利要求1所述的
Cas
蛋白或权利要求2所述的融合蛋白;
(ii)
核酸组分,其选自:权利要求4所述的
gRNA
,或编码权利要求4所述的
gRNA
的核酸,或权利要求4所述的
gRNA
的前体
RNA
,或编码权利要求4所述的
gRNA
的前体
RNA
核酸;
(iii)
结合在权利要求4所述的
gRNA
上的靶序列
。11.
一种工程化的宿主细胞,其特征在于,所述宿主细胞包含权利要求1所述的
Cas
蛋白,或权利要求2所述的融合蛋白,或权利要求3所述的多核苷酸,或...
【专利技术属性】
技术研发人员:李珊珊,赵庆芝,刘锐恒,
申请(专利权)人:山东舜丰生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。