【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】脂质纳米粒子的冻干组合物
[0001]本专利技术涉及不含核酸的脂质纳米粒子的冻干组合物和使用该冻干组合物的包封核酸的脂质纳米粒子的制造方法。
技术介绍
[0002]为了将使用siRNA等寡核酸的核酸疗法、使用mRNA或pDNA的基因疗法投入实际应用,需要有效且安全的核酸递送载体。病毒载体是具有高表达效率的核酸递送载体,但正在开发可以更安全地使用的非病毒核酸递送载体。
[0003]由于使用具有季胺的阳离子性脂质的阳离子性脂质体带正电荷,因此它们可以与带负电荷的核酸通过静电相互作用形成脂质复合物(lipoplex),从而可以将核酸递送至细胞内。此外,利用季胺与核酸发生静电相互作用,制备不含核酸的阳离子性脂质体的冻干组合物,并通过与核酸的水溶液进行再水合形成脂质复合物,因此也可以作为基因导入试剂使用(专利文献1、2)。
[0004]然而,通过这种方法制备成的脂质复合物难以控制粒径,并且来自带正电荷的阳离子脂质的细胞毒性成为问题。
[0005]因此,使用有在酸性条件下带正电荷且在中性附近不带电荷的在分子内具有叔胺的离子性脂质的脂质纳米离子(称为脂质纳米粒子(LipidNanoparticle),或LNP)被开发,并且目前最通常使用的是使用非病毒核酸递送载体(非专利文献1)。
[0006]作为使用有分子内具有叔胺的离子性脂质的脂质纳米粒子,也有在离子性脂质中添加分解性基团的例子(专利文献3)。
[0007]如上所述,已经开发出各种非病毒载体,但核酸通常是不稳定的化合物,因此其作为制剂的稳 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种冻干组合物,其是脂质纳米粒子的冻干组合物,该脂质纳米粒子的冻干组合物不含核酸而包含离子性脂质、甾醇、PEG脂质、在pH1~6具有缓冲作用的酸性缓冲液成分及冷冻保护剂,其中,冷冻保护剂与总脂质的重量比为10:1~1000:1。2.根据权利要求1所述的冻干组合物,其进一步包含磷脂。3.根据权利要求1或2所述的冻干组合物,其中,冷冻保护剂与总脂质的重量比为30:1~1000:1。4.根据权利要求1~3中任一项所述的冻干组合物,其中,冷冻保护剂的浓度以冻干前的组合物计为80~800mg/mL。5.根据权利要求1~4中任一项所述的冻干组合物,其中,冷冻保护剂的浓度以冻干前的组合物计为160~800mg/mL。6.根据权利要求1~5中任一项所述的冻干组合物,其中,离子性脂质是由式(1)表示的化合物:[化1]式(1)中,R
1a
和R
1b
各自独立地表示碳原子数为1~6的亚烷基,X
a
和X
b
各自独立地表示碳原子数为1~6且叔氨基数为1的非环状烷基叔氨基,或碳原子数为2~5且叔氨基数为1~2的环状亚烷基叔氨基,R
2a
和R
2b
各自独立地表示碳原子数为8以下的亚烷基或氧二亚烷基,Y
a
和Y
b
各自独立地表示酯键、酰胺键、氨基甲酸酯键、醚键或脲键,Z
a
和Z
b
各自独立地表示由碳原子数为3~16且具有至少1个芳香环且任选地具有杂原子的芳香族化合物衍生的二价基团,R
3a
和R
3b
各自独立地表示来自具有羟基的脂溶性维生素与琥珀酸酐或戊二酸酐的反应物的残基、或来自具有羟基的甾醇衍生物与琥珀酸酐或戊二酸酐的反应物的残基、或碳原子数为12~22的脂肪族烃基。7.根据权利要求1~6中任一项所述的冻干组合物,其中,冷冻保护剂是二糖。8.根据权利要求1~6中任一项所述的冻干组合物,其中,冷冻保护剂是蔗糖。9.一种包封核酸的脂质纳米粒子的制造方法,其包括以下步骤:a)将包含离子性脂质、甾醇及PEG脂质的醇溶液与在pH1~6具有缓冲作用的酸性缓冲液混合,制备不含核酸的脂质纳米粒子悬浮液的步骤,b)将不含核酸的脂质纳米粒子悬浮液与冷冻保护剂混合,得到包含80~800mg/mL的冷冻保护剂、pH1~6的混合物的步骤,c)将步骤b得到的混合物冻干,得到冻干组合物的步骤,d)将冻干组合物与包含核酸且任选包含0~25v/v%的醇的水溶液混合,任选将混合物
在0~95℃下温育0~60分钟,得到包封核酸的脂质纳米粒子的步骤,以及e)通过透析、超滤或稀释,将得到的包封核酸的脂质纳米粒的外水相更换为中性缓冲溶液的步骤。10.根据权利要求9所述的方法,其进一步包含如下步骤:在步骤a中,制备脂质纳米粒子悬浮液后,通过透析、超滤或稀释,将外水相更换为在pH1~6具有缓冲作用的其他酸性缓冲液。11.根据权利要求9或10所述的方法,其中,在步骤a中,醇溶液进一步包含磷脂。12.根据权利要求9~11中任一项所述的方法,其中,在步骤b中,混合物中的冷冻保护剂的浓度为160~800mg/mL。13.根据权利要求9~12中任一项所述的方法,其中,离子性脂质是式(1)表示的化合物:[化2]式(1)中,R
1a
和R
1b
各自独立地表示碳原子数为1~6的亚烷基,X
a
和X
b
各自独立地表示碳原子数为1~6且叔氨基数为1的非环状烷基叔氨基,或碳原子数为2~5且叔氨基数为1~2的环状亚烷基叔氨基,R
2a
和R
2b
各自独立地表示碳原子数为8以下的亚烷基或氧二亚烷基,Y
a
和Y
b
各自独立地表示酯键、酰胺键、氨基甲酸酯键、醚键或脲键,Z
a
和Z
b
各自独立地表示由碳原子数为3~16且具有至少1个芳香环且任选地具有杂原子的芳香族化合物衍生的二价基团,R
3a
和R
3b
各自独立地表示来自具有羟基的脂溶性维生素与琥珀酸酐或戊二酸酐的反应物的残基、或来自具有羟基的甾醇衍生物与琥珀酸酐或戊...
【专利技术属性】
技术研发人员:丹下耕太,中井悠太,玉川晋也,种市樱,秋田英万,田中浩挥,白根大贵,萩原伸哉,
申请(专利权)人:国立大学法人千叶大学,
类型:发明
国别省市:
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