一种去岩藻糖基化的抗Her2抗体冻干粉针剂的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种去岩藻糖基化的抗Her2抗体冻干粉针剂的制备方法，该方法包括以下步骤：(1)将去岩藻糖基化的抗Her2抗体制剂灌装到10ml的西林瓶中，并完成半加塞工作；(2)在0℃条件下，依次经过预冻、升华干燥、解析干燥，得到10ml西林瓶封装的注射用去岩藻糖基化的抗Her2抗体冻干粉针剂。本发明专利技术将去岩藻糖基化的抗Her2抗体冻干粉针剂由50ml西林瓶改成10ml西林瓶灌装，减少二次污染量，提高生产效率，降低生产成本。降低生产成本。

【技术实现步骤摘要】
一种去岩藻糖基化的抗Her2抗体冻干粉针剂的制备方法


[0001]本专利技术属于冻干粉针剂制备领域，特别涉及一种去岩藻糖基化的抗Her2抗体冻干粉针剂的制备方法。

技术介绍

[0002]人源化的抗Her2抗体是由悬养于无菌培养基中的哺乳动物细胞(中国仓鼠卵巢细胞CHO)产生的，用亲合色谱法和离子交换法纯化，包括特殊的病毒灭活的去除程序。抗Her2抗体是一种重组DNA衍生的人源化单克隆抗体，选择性地作用于人表皮生长因子受体
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2(Her2)的细胞外部位，此抗体属IgG1型，含人的框架区，及能与Her
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2结合的鼠抗
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p185 Her2抗体的互补决定区，因此抗Her2抗体在体外及动物实验中均显示可抑制Her2过度表达的肿瘤细胞的增殖。
[0003]蛋白质比传统的有机和无机药物更大和更加复杂，为保持蛋白质的生物学活性，制剂必须至少保持蛋白质的氨基酸核心序列的整体构象完整，同时防止蛋白质的多个官能团发生降解。蛋白质的降解途径可能涉及化学不稳定性(即任何涉及蛋白质修饰的过程，通过成键或键断裂，生成新的化学实体)或物理不稳定性(即蛋白质高级结构的改变)。化学不稳定性可产生自脱酰胺化、外消旋化、水解、氧化、β消除或二硫键交换。物理不稳定性可由变性、聚集、沉淀或吸附所导致。三个最常见的蛋白质降解途径为蛋白质聚集、脱酰胺化和氧化。
[0004]冷冻干燥(冻干)是指把药品溶液在低温下冻结，然后在真空条件下升华干燥，除去冰晶，待升华结束后再进行解析干燥，除去部分结合水的干燥方法。由于冻干药品呈多孔状、能长时间稳定贮存、并易重新复溶于水而恢复活性，因此冷冻干燥技术广泛应用于制备固体蛋白质药物、口服速溶药物及药物包埋剂脂质体等药品。冻干制剂相比液体制剂能显著的提高蛋白药物的稳定性。
[0005]目前，在无菌药品生产过程中，冻干粉针剂是以西林瓶作为内包装。现有的生产抗Her2抗体冻干粉针剂大都使用50ml西林瓶作为包装瓶，规格为440mg/20ml。在治疗转移性乳腺癌时，按照给药量的标准，初次负荷剂量为4mg/kg，维持治疗时每周用量为2mg/kg，70kg的成年人初次负荷剂量为280mg，使用规格为440mg/20ml的抗Her2抗体冻干粉针剂，造成的药品浪费或者药品二次污染量较多。此外，灌装的药粉体积为20ml，药粉体积仅占50ml西林瓶容积的2/5，当瓶子较大而灌装量较少时，会在降低生产效率的同时大大增加生产成本。
[0006]若使用10ml西林瓶进行灌装，规格为100mg/5ml，按照70kg的标准成人体重计算，造成的药品浪费或者药品二次污染量较少。使用10ml西林瓶进行灌装，药液量也不会超过容积的1/2，符合药品灌装标准。但是，与50ml西林瓶相比，10ml西林瓶的瓶内表面积较小，冻干难度较高，采用现有的冻干工艺取得的冻干效果不佳。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的，是提供一种去岩藻糖基化的抗Her2抗体冻干粉针剂的制备方法。本专利技术的去岩藻糖基化的抗Her2抗体，是利用CRISPR/Cas9技术，针对FUT8基因的外显子区域设计sgRNA，构建载体质粒，进而敲除FUT8基因得到的FUT8基因沉默的抗Her2抗体。具体而言，参见专利2020112446131中敲除FUT8基因的方法。
[0008]本专利技术解决了去岩藻糖基化的抗Her2抗体冻干粉针剂由50ml西林瓶改为10ml西林瓶灌装后，冻干难度较高，现有冻干工艺取得的冻干效果不佳的问题。
[0009]本专利技术的目的可以通过以下技术方案实现：
[0010]一种去岩藻糖基化的抗Her2抗体冻干粉针剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
[0011](1)将去岩藻糖基化的抗Her2抗体制剂灌装到10ml的西林瓶中；
[0012](2)在0℃条件下，依次经过预冻、升华干燥、解析干燥，得到10ml西林瓶封装的注射用去岩藻糖基化的抗Her2抗体冻干粉针剂。
[0013]所述预冻的具体操作过程包括：将温度在15min～25min内由0℃降到
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30℃～
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40℃，并在
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30℃～
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40℃条件下保温80min～120min。
[0014]优选的，所述预冻的具体操作过程包括：将温度在20min内由0℃降到
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30℃～
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40℃，并在
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30℃～
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40℃条件下保温100min。
[0015]更优选的，所述预冻的具体操作过程包括：将温度在20min内由0℃降到
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35℃，并在
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35℃条件下保温100min。
[0016]所述升华干燥的具体操作过程包括：将温度在20min～30min内上升到
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8℃～
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13℃，并在
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8℃～
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13℃下保温30min～40min，保持真空度10Pa～20Pa；将温度在150min～220min内上升到
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3℃～
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7℃，并在
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3℃～
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7℃下在保温800min～1000min，保持真空度5Pa～15Pa；将温度在150min～220min内上升到
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2℃～2℃，并在
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2℃～2℃下保温300min～500min，保持真空度5Pa～15Pa；将温度在100min～150min内上升到3℃～8℃，并在3℃～8℃下保温150min～220min，保持真空度5Pa～15Pa。
[0017]优选的，所述升华干燥的具体操作过程包括：将温度在25min内上升到
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8℃～
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13℃，并在
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8℃～
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13℃下保温35min，保持真空度15Pa；将温度在180min内上升到
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3℃～
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7℃，并在
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3℃～
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7℃下在保温900min，保持真空度10Pa；将温度在180min内上升到
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2℃～2℃，并在
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2℃～2℃下保温400min，保持真空度10Pa；将温度在120min内上升到3℃～8℃，并在3℃～8℃下保温180min，保持真空度10Pa。
[0018]更优选的，所述升华干燥的具体操作过程包括：将温度在25min内上升到
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10℃，并在
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10℃下保温35min，保持真空度15Pa；将温度在180min内上升到
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5℃，并在
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5℃下在保温900min，保持真空度10Pa；将温度在180min内上升到0℃，并在0℃下保温400min，保持真空度10Pa；将温度在120min内上升到5℃，并在5℃下保温180min，保本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种去岩藻糖基化的抗Her2抗体冻干粉针剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将去岩藻糖基化的抗Her2抗体制剂灌装到10ml的西林瓶中；(2)在0℃条件下，依次经过预冻、升华干燥、解析干燥，得到10ml西林瓶封装的注射用去岩藻糖基化的抗Her2抗体冻干粉针剂。2.根据权利要求1所述的去岩藻糖基化的抗Her2抗体冻干粉针剂的制备方法，其特征在于，所述预冻的具体操作过程包括：将温度在15min～25min内由0℃降到
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30℃～
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40℃，并在
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30℃～
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40℃条件下保温80min～120min。3.根据权利要求2所述的去岩藻糖基化的抗Her2抗体冻干粉针剂的制备方法，其特征于，所述预冻的具体操作过程包括：将温度在20min内由0℃降到
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30℃～
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40℃，并在
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30℃～
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40℃条件下保温100min。4.根据权利要求2或3所述的去岩藻糖基化的抗Her2抗体冻干粉针剂的制备方法，其特征在于，所述预冻的具体操作过程包括：将温度在20min内由0℃降到
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35℃，并在
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35℃条件下保温100min。5.根据权利要求1所述的去岩藻糖基化的抗Her2抗体冻干粉针剂的制备方法，其特征在于，所述升华干燥的具体操作过程包括：将温度在20min～30min内上升到
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8℃～
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13℃，并在
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8℃～
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13℃下保温30min～40min，保持真空度10Pa～20Pa；将温度在150min～220min内上升到
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3℃～
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7℃，并在
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3℃～
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7℃下在保温800min～1000min，保持真空度5Pa～15Pa；将温度在150min～220min内上升到
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2℃～2℃，并在
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2℃～2℃下保温300min～500min，保持真空度5Pa～15Pa；将温度在100min～150min内上升到3℃～8℃，并在3℃～8℃下保温150min～220min，保持真空度5Pa～15Pa。6.根据权利要求5所述的去岩藻糖基化的...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴崇兵，姜晓玲，高超，马昀，肖哲媛，
申请(专利权)人：盛禾中国生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：