抗KIT抗体及其用途制造技术

本发明专利技术在一个方面提供的是免疫特异性结合于包含第四和/或第五细胞外Ig样域(即，D4和/或D5域)的人KIT抗原的抗体、包含编码这样的抗体的核苷酸序列的多核苷酸和用于产生这样的抗体的表达载体和宿主细胞。所述抗体能抑制KIT活性，例如配体诱导的受体磷酸化。本发明专利技术还提供的是包含特异性结合于KIT抗原的抗体的试剂盒和药物组合物，以及使用本发明专利技术描述的抗体治疗或处理KIT相关紊乱或疾病的方法及诊断KIT相关紊乱或疾病的方法。

Anti-KIT Antibody and Its Application

【技术实现步骤摘要】
抗KIT抗体及其用途本申请要求于2012年7月25日申请的美国临时申请第61/675,751号和于2012年7月25日申请的美国临时申请第61/675,762号的在35U.S.C§119(e)下的权益，所述各临时申请以全文引用的方式并入本文中。本申请含有序列表，该序列表作为文件名为“Sequence_Listing_12638-059-228.txt”、于2013年7月18日创建并且大小为152,576个字节的ASCII文本文档同时提交。该序列表以全文引用的方式并入本文中。1.领域本文提供的是特异性结合于KIT多肽的抗体、其抗原结合片段、这样的抗体的缀合物(conjugate)、编码这样的抗体的多核苷酸、用于产生这样的抗体的载体和宿主细胞、包含免疫特异性结合于KIT抗原的抗体的试剂盒和药物组合物，及用于治疗或处理KIT相关紊乱的用途和方法，以及诊断方法。2.背景KIT(或c-Kit)是由c-kit基因编码的III型受体酪氨酸激酶。KIT包含五个细胞外免疫球蛋白(Ig)样域、单个跨膜区、抑制性细胞质近膜域和由激酶插入区段隔开的断裂细胞质激酶域(参见例如，Yarden等人,Nature,1986,323:226-232；Ullrich和Schlessinger,Cell,1990,61:203-212；Clifford等人,J.Biol.Chem.,2003,278:31461-31464)。编码KIT受体的人c-kit基因已经克隆，如Yarden等人,EMBOJ.,1987,6:3341-3351所描述。KIT也称为CD117或干细胞因子受体(“SCFR”)，因为它是干细胞因子(“SCF”)配体(也称为Steel因子或Kit配体)的受体。结合于KIT的前三个细胞外Ig样域的SCF配体诱导受体二聚化，并因此通过近膜域和激酶域中的特定酪氨酸残基的磷酸化来活化固有酪氨酸激酶活性(参见例如，Weiss和Schlessinger,Cell,1998,94:277-280；Clifford等人,J.Biol.Chem.,2003,278:31461-31464)。已证明Stat、Src、ERK和AKT信号传导途径的成员是KIT信号传导的下游信号转导子(transducers)。相信KIT的第四(D4)和第五(D5)细胞外Ig样域介导受体二聚化(参见例如，国际专利申请公布号WO2008/153926；Yuzawa等人,Cell,2007,130:323-334)。已在诸如肥大细胞、干细胞、脑细胞、黑色素母细胞、卵巢细胞和癌细胞(例如白血病细胞)等多种细胞类型中检测到KIT的表达。功能损失性(loss-of-function)KIT突变的研究表明KIT对造血祖细胞、肥大细胞、黑色素细胞、原始生殖细胞和Cajal间质细胞的正常生长非常重要(参见例如，Besmer,P.,Curr.Opin.CellBiol.,1991,3:939-946；Lyman等人,Blood,1998,91:1101-1134；Ashman,L.K.,Int.J.Biochem.CellBiol.,1999,31:1037-1051；Kitamura等人,Mutat.Res.,2001,477:165-171；Mol等人,J.Biol.Chem.,2003,278:31461-31464)。此外，KIT在血细胞生成、黑色素生成和配子生成中起重要作用(参见Ueda等人,Blood,2002,99:3342-3349)。已暗示异常KIT活性与多种癌症有关。例如，导致KIT的不依赖SCF的组成性活化的功能获得性(gain-of-function)KIT突变在某些癌细胞中被发现并且与例如白血病(例如慢性髓细胞白血病)和胃肠道间质瘤等某些癌症相关(参见例如，Mol等人,J.Biol.Chem.,2003,278:31461-31464)。3.概述本文在一个方面提供的是免疫特异性结合于KIT(例如人KIT)的细胞外域的域4(D4)(或D4区)并且抑制KIT活性的抗体、其抗原结合片段及其缀合物，以及相关组合物、试剂和方法。在一个方面，本文提供的是免疫特异性结合于人KIT的D4的抗体或其抗原结合片段，包含：(i)轻链可变区(“VL”)，包含分别具有SEQIDNO:19、SEQIDNO:20和SEQIDNO:21的氨基酸序列的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3；和(ii)重链可变区(“VH”)，包含分别具有SEQIDNO:16、SEQIDNO:17和SEQIDNO:18的氨基酸序列的VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3。在一个实施方式中，本文提供的抗体或其抗原结合片段的VL和VH在人类中是非免疫原性的。在一个特定的实施方式中，所述抗体能在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中以至少0.45μg/mL的效价表达。在一个特定的实施方式中，所述抗体能在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中以至少0.3μg/mL、至少0.6μg/mL、至少0.75μg/mL或至少1μg/mL的效价表达。在某一个方面，本文提供的是免疫特异性结合于人KIT的D4的抗体或其抗原结合片段或其缀合物，包含：轻链可变区(“VL”)，包含氨基酸序列：DIVMTQSPSXK1LSASVGDRVTITCKASQNVRTNVAWYQQKPGKAPKXK2LIYSASYRYSGVPDRFXK3GSGSGTDFTLTISSLQXK4EDFAXK5YXK6CQQYNSYPRTFGGGTKVEIK(SEQIDNO:12)，其中XK1为具有芳族或脂族羟基侧链的氨基酸，XK2为具有脂族或脂族羟基侧链的氨基酸，XK3为具有脂族羟基侧链的氨基酸，XK4为具有脂族羟基侧链的氨基酸或为P，XK5为具有带电荷或酸性侧链的氨基酸，和XK6为具有芳族侧链的氨基酸；和重链可变区(“VH”)，包含分别具有SEQIDNO:16、SEQIDNO:17和SEQIDNO:18的氨基酸序列的VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3。在一个特定的方面，本文提供的是免疫特异性结合于人KIT的D4的抗体(或其片段或其缀合物)，包含：(i)VL，包含分别具有SEQIDNO:19、SEQIDNO:20和SEQIDNO:21的氨基酸序列的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3；和(ii)VH，包含氨基酸序列：QVQLVQSGAEXH1KKPGASVKXH2SCKASGYTFTDYYINWVXH3QAPGKGLEWIARIYPGSGNTYYNEKFKGRXH4TXH5TAXH6KSTSTAYMXH7LSSLRSEDXH8AVYFCARGVYYFDYWGQGTTVTVSS(SEQIDNO:11)，其中XH1为具有脂族侧链的氨基酸，XH2为具有脂族侧链的氨基酸，XH3为具有极性或碱性侧链的氨基酸，XH4为具有脂族侧链的氨基酸，XH5为具有脂族侧链的氨基酸，XH6为具有酸性侧链的氨基酸，XH7为具有酸性或酰胺衍生物侧链的氨基酸，和XH8为具有脂族羟基侧链的氨基酸。在一个特定的实施方式中，XK1为氨基酸F或S，XK2为氨基酸A或S，XK3为氨基酸T或S，XK4为氨基酸S或P，XK5为氨基酸D或T，和XK6为氨基酸F或Y。在某一个实施方式中，XK1为氨基酸S，XK本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.抗体或其抗原结合片段，其免疫特异性结合于人KIT，包含：(i)轻链可变区(“VL”)，包含分别具有SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20和SEQ ID NO:21的氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3；和(ii)重链可变区(“VH”)，包含分别具有SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18的氨基酸序列的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3；其中所述VL和VH在人类中是非免疫原性的。

【技术特征摘要】
2012.07.25 US 61/675,751;2012.07.25 US 61/675,7621.抗体或其抗原结合片段，其免疫特异性结合于人KIT，包含：(i)轻链可变区(“VL”)，包含分别具有SEQIDNO:19、SEQIDNO:20和SEQIDNO:21的氨基酸序列的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3；和(ii)重链可变区(“VH”)，包含分别具有SEQIDNO:16、SEQIDNO:17和SEQIDNO:18的氨基酸序列的VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3；其中所述VL和VH在人类中是非免疫原性的。2.权利要求1所述的抗体或抗原结合片段，其中：(a)(i)所述VL包含氨基酸序列：DIVMTQSPSXK1LSASVGDRVTITCKASQNVRTNVAWYQQKPGKAPKXK2LIYSASYRYSGVPDRFXK3GSGSGTDFTLTISSLQXK4EDFAXK5YXK6CQQYNSYPRTFGGGTKVEIK(SEQIDNO:12)，其中XK1为具有芳族或脂族羟基侧链的氨基酸，XK2为具有脂族或脂族羟基侧链的氨基酸，XK3为具有脂族羟基侧链的氨基酸，XK4为具有脂族羟基侧链的氨基酸或为P，XK5为具有带电荷或酸性侧链的氨基酸，和XK6为具有芳族侧链的氨基酸；和(ii)所述VH包含分别具有SEQIDNO:16、SEQIDNO:17和SEQIDNO:18的氨基酸序列的VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3，和SEQIDNO:18；(b)(i)所述VL包含分别具有SEQIDNO:19、SEQIDNO:20和SEQIDNO:21的氨基酸序列的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3；和(ii)所述VH包含氨基酸序列：QVQLVQSGAEXH1KKPGASVKXH2SCKASGYTFTDYYINWVXH3QAPGKGLEWIARIYPGSGNTYYNEKFKGRXH4TXH5TAXH6KSTSTAYMXH7LSSLRSEDXH8AVYFCARGVYYFDYWGQGTTVTVSS(SEQIDNO:11)，其中XH1为具有脂族侧链的氨基酸，XH2为具有脂族侧链的氨基酸，XH3为具有极性或碱性侧链的氨基酸，XH4为具有脂族侧链的氨基酸，XH5为具有脂族侧链的氨基酸，XH6为具有酸性侧链的氨基酸，XH7为具有酸性或酰胺衍生物侧链的氨基酸，和XH8为具有脂族羟基侧链的氨基酸；或(c)(i)所述VL包含氨基酸序列：DIVMTQSPSXK1LSASVGDRVTITCKASQNVRTNVAWYQQKPGKAPKXK2LIYSASYRYSGVPDRFXK3GSGSGTDFTLTISSLQXK4EDFAXK5YXK6CQQYNSYPRTFGGGTKVEIK(SEQIDNO:12)，其中XK1为具有芳族或脂族羟基侧链的氨基酸，XK2为具有脂族或脂族羟基侧链的氨基酸，XK3为具有脂族羟基侧链的氨基酸，XK4为具有脂族羟基侧链的氨基酸或为P，XK5为具有带电荷或酸性侧链的氨基酸，和XK6为具有芳族侧链的氨基酸；和(ii)所述VH包含氨基酸序列：QVQLVQSGAEXH1KKPGASVKXH2SCKASGYTFTDYYINWVXH3QAPGKGLEWIARIYPGSGNTYYNEKFKGRXH4TXH5TAXH6KSTSTAYMXH7LSSLRSEDXH8AVYFCARGVYYFDYWGQGTTVTVSS(SEQIDNO:11)，其中XH1为具有脂族侧链的氨基酸，XH2为具有脂族侧链的氨基酸，XH3为具有极性或碱性侧链的氨基酸，XH4为具有脂族侧链的氨基酸，XH5为具有脂族侧链的氨基酸，XH6为具有酸性侧链的氨基酸，XH7为具有酸性或酰胺衍生物侧链的氨基酸，和XH8为具有脂族羟基侧链的氨基酸。3.权利要求2所述的抗体或抗原结合片段，其中(a)XK1为氨基酸F或S，XK2为氨基酸A或S，XK3为氨基酸T或S，XK4为氨基酸S或P，XK5为氨基酸D或T，和XK6为氨基酸F或Y；(b)XH1为氨基酸L或V，XH2为氨基酸L或V，XH3为氨基酸K或R，XH4为氨基酸V或A，XH5为氨基酸L或I，XH6为氨基酸E或D，XH7为氨基酸Q或E，和XH8为氨基酸S或T；或(c)XK1为氨基酸F或S，XK2为氨基酸A或S，XK3为氨基酸T或S，XK4为氨基酸S或P，XK5为氨基酸D或T，XK6为氨基酸F或Y，XH1为氨基酸L或V，XH2为氨基酸L或V，XH3为氨基酸K或R，XH4为氨基酸V或A，XH5为氨基酸L或I，XH6为氨基酸E或D，XH7为氨基酸Q或E，和XH8为氨基酸S或T。4.权利要求1所述的抗体或抗原结合片段，其中：(i)所述VL包含的氨基酸序列：与SEQIDNO:7有至少90％同一性，与SEQIDNO:8有至少88％同一性，与SEQIDNO:9有至少87％同一性，或与SEQIDNO:10有至少84％同一性；和(ii)所述VH包含的氨基酸序列:与SEQIDNO:2有至少93％同一性，与SEQIDNO:3有至少92％同一性，与SEQIDNO:4有至少90％同一性，与SEQIDNO:5有至少87％同一性，或与SEQIDNO:6有至少86％同一性。5.抗体或其抗原结合片段，其免疫特异性结合于人KIT，其中所述抗体或抗原结合片段包含：(i)VL，包含分别具有SEQIDNO:19、20和21的氨基酸序列的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3；和VH，包含SEQIDNO:2的氨基酸序列；(ii)VL，包含分别具有SEQIDNO:19、20和21的氨基酸序列的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3；和VH，包含SEQIDNO:3的氨基酸序列；(iii)VL，包含分别具有SEQIDNO:19、20和21的氨基酸序列的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3；和VH，包含SEQIDNO:4的氨基酸序列；(iv)VL，包含分别具有SEQIDNO:19、20和21的氨基酸序列的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3；和VH，包含SEQIDNO:5的氨基酸序列；(v)VL，包含分别具有SEQIDNO:19、20和21的氨基酸序列的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3；和VH，包含SEQIDNO:6的氨基酸序列；(vi)VL，包含分别具有SEQIDNO:59、60和61的氨基酸序列的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3；和VH，包含SEQIDNO:2的氨基酸序列；(vii)VL，包含分别具有SEQIDNO:59、60和61的氨基酸序列的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3；和VH，包含SEQIDNO:3的氨基酸序列；(viii)VL，包含分别具有SEQIDNO:59、60和61的氨基酸序列的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3；和VH，包含SEQIDNO:4的氨基酸序列；(ix)VL，包含分别具有SEQIDNO:59、60和61的氨基酸序列的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3；和VH，包含SEQIDNO:5的氨基酸序列；(x)VL，包含分别具有SEQIDNO:59、60和61的氨基酸序列的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3；和VH，包含SEQIDNO:6的氨基酸序列；(xi)VL，包含分别具有SEQIDNO:66、67和68的氨基酸序列的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3；和VH，包含SEQIDNO:2的氨基酸序列；(xii)VL，包含分别具有SEQIDNO:66、67和68的氨基酸序列的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3；和VH，包含SEQIDNO:3的氨基酸序列；(xiii)VL，包含分别具有SEQIDNO:66、67和68的氨基酸序列的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3；和VH，包含SEQIDNO:4的氨基酸序列；(xiv)VL，包含分别具有SEQIDNO:66、67和68的氨基酸序列的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3；和VH，包含SEQIDNO:5的氨基酸序列；(xv)VL，包含分别具有SEQIDNO:66、67和68的氨基酸序列的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3；和VH，包含SEQIDNO:6的氨基酸序列；(xvi)VL，包含SEQIDNO:7的氨基酸序列，和VH，包含分别具有SEQIDNO:16、17和18的氨基酸序列的VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3；(xvii)VL，包含SEQIDNO:8的氨基酸序列，和VH，包含分别具有SEQIDNO:16、17和18的氨基酸序列的VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3；(xviii)VL，包含SEQIDNO:9的氨基酸序列，和VH，包含分别具有SEQIDNO:16、17和18的氨基酸序列的VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3；(xix...

【专利技术属性】
技术研发人员：亚龙·哈达利，伊丽莎白·M·曼德尔鲍什，弗朗西斯·约瑟夫·凯尔，蒂莫西·大卫·琼斯，劳拉·克莱尔·亚历山德拉·佩里，
申请(专利权)人：塞尔德克斯医疗公司，
类型：发明
国别省市：美国,US