抗CCR7抗体药物缀合物制造技术

本申请披露了抗CCR7抗体、其抗原结合片段、以及所述抗体或抗原结合片段的抗体药物缀合物。本发明专利技术还涉及使用这些抗体、抗原结合片段和抗体药物缀合物治疗或预防癌症的方法。本文还披露了制备这些抗体、抗原结合片段和抗体药物缀合物的方法，以及使用这些抗体和抗原结合片段作为诊断试剂的方法。

Anti-CCR7 Antibody Drug Conjugate

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗CCR7抗体药物缀合物相关申请的交叉引用本申请要求2017年2月3日提交的美国临时申请号62/454,476的权益，将其内容特此通过引用以其全文并入。序列表本申请包含按ASCII格式以电子方式提交并特此通过引用以其全文并入的序列表。创建于2018年1月10日的所述ASCII副本名为PAT057594-WO-PCT_SL.txt且大小为387,054字节。
本专利技术总体上涉及抗CCR7抗体、抗体片段及其免疫缀合物，以及它们用于治疗或预防癌症的用途。
技术介绍
CC-趋化因子受体7(CCR7)最初在1993年鉴定为淋巴细胞特异性受体(参见例如，Birkenbach等人,JVirol.[病毒学杂志]1993年4月；67(4):2209-20)。其表达局限于免疫细胞的亚群，如初始T细胞、中枢记忆T细胞(Tcm)、调节性T细胞(Treg)、初始B细胞、NK细胞和成熟抗原呈递树突细胞(DC)。CCR7调节免疫细胞向淋巴器官的和在淋巴器官内的归巢，并且因此在平衡免疫和耐受中起关键作用(参见例如等人,NatRevImmunol.[天然免疫学评论]2008年5月；8(5):362-71)。CCR7是A类视紫红质样G蛋白偶联受体(GPCR)，具有两个配体CCL21和CCL19。CCR7结构尚未完全解析，然而，已发现某些基序对受体活性至关重要(参见例如，Legler等人,IntJBiochemCellBiol.[国际生物化学与分子生物学杂志]2014年7月1日)。CCR7和癌症还已知CCR7(也称为EBI1、BLR2、CC-CKR-7、CMKBR7、CD197和CDw197)在许多恶性肿瘤中过表达，这些恶性肿瘤包括B细胞恶性肿瘤(例如，CLL、MCL、伯基特淋巴瘤)、T细胞恶性肿瘤(例如，ATLL)、HNSCC、ESCC、胃癌、NSCLC、结肠直肠癌、胰腺癌、甲状腺癌、乳腺癌和宫颈癌等。CCR7在例如结肠直肠癌、ESCC、胰腺癌、HNSCC和胃癌中的过表达与晚期肿瘤阶段、淋巴结转移和生存率低相关(参见例如，Malietzis等人,JournalofSurgicalOncology[外科肿瘤学杂志]2015；112:86-92；Irino等人,BMCCancer[BMC癌症]2014,14:291；Guo等人,OncologyLetters[肿瘤学快报]5:1572-1578,2013；Xia等人,OralDis.[口腔疾病]2015年1月；21(1):123-31；Du等人,GastricCancer.[胃癌]2016年3月16日)。此外，已显示在例如HNSCC中的CCR7表达在对化学疗法的抗性中起作用(参见例如，Wang等人,JNCIJNatlCancerInst[美国癌症研究所杂志](2008)100(7):502-512。)。在某些癌症类型，如胰腺癌和鼻咽癌(NPC)中，已知CCR7促进癌症干细胞样细胞转移和球体形成(参见例如，Zhang等人,PLOSONE[公共科学图书馆综合]11(8)；Lun等人,PLOSONE[公共科学图书馆综合]7(12))。CCR7在细胞迁移、侵袭性和EMT(上皮-间充质转化)中的作用在体外和体内的各种癌症类型，如乳腺癌和胰腺癌中进行了描述(参见例如，Pang等人,Oncogene[癌基因](2015),1-13；Sperveslage等人,Int.J.Cancer[国际癌症杂志]:131,E371-E381(2012))。已被描述为CCR7信号传导必需的关键途径包括b-抑制蛋白(Arrestin)介导的p38/ERK1/2和Rho信号传导(参见例如，Noor等人,JNeuroinflammation[神经炎症杂志]2012年4月25日；9:77)。已知许多癌症相关过程诱导CCR7表达。在HNSCC中，显示CCR7表达由NF-kB和AP1转录因子经由直接结合CCR7启动子中的位点诱导(Mburu等人,J.Biol.Chem.[生物化学杂志]2012,287:3581-3590)。特别地，CCR7表达受肿瘤微环境中的各种因素调节。在该背景下，已知CCR7表达在HNSCC中经由b-防御素3/NF-kB途径诱导(参见例如，Mburu等人,Carcinogenesis[癌变]第32卷第2期第168-174页,2010)并且在乳腺肿瘤细胞中经由内皮素受体A和缺氧诱导因子-1诱导(参见例如，Wilson等人,CancerRes[癌症研究]2006；66:11802-11807)。抗体药物缀合物抗体药物缀合物(“ADC”)已用于在癌症治疗中局部递送细胞毒性剂(参见例如，Lambert,Curr.OpinionInPharmacology[药理学新见]5:543-549,2005)。ADC允许靶向递送药物部分，其中可以实现具有最小毒性的最大功效。ADC包含针对结合经靶向用于治疗干预的细胞的能力而选择的抗体，该抗体与针对其细胞抑制或细胞毒活性而选择的药物连接。从而，抗体与靶细胞的结合将药物递送至需要其治疗效果的位点。已经披露了许多识别并选择性结合靶细胞(例如，癌细胞)的抗体用于在ADC中使用。尽管对ADC进行了大量工作，但与特定的目的靶标结合的抗体不足以预测ADC应用的成功。可以影响ADC治疗效果的因素(除了靶标内在特征之外)的实例包括需要定制微调的各个方面，如作为靶介导处置(TMDD)与功效驱动暴露之间平衡的最佳抗体亲和力、对Fc介导的功能(抗体依赖性细胞介导的细胞毒性，ADCC)的评价、缀合方法(位点特异性与否)、与每种抗体缀合的药物/有效负载分子的比率(“DAR”或“药物抗体比率”)、接头的可裂解性或稳定性、ADC的稳定性、以及ADC聚集的趋势。仍然需要具有改善特性的抗体、连接方法和细胞毒性有效负载，以用作有效的ADC治疗组合物和方法。
技术实现思路
本申请披露了一种结合人CCR7蛋白的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段与相同同种型的野生型抗体相比具有降低的或没有显著的效应子功能。在一个实施例中，该抗体或其抗原结合片段具有降低的或没有显著水平的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)活性。在一个实施例中，该抗体或其抗原结合片段包含沉默的Fc区。在一些实施例中，该抗体在该Fc区中包含选自以下的突变：D265A；P329A；P329G；N297A；D265A和P329A；D265A和N297A；L234和L235A；P329A、L234A和L235A；以及P329G、L234A和L235A。在一个实施例中，该抗体或其抗原结合片段没有显著的细胞杀伤活性。在一个实施例中，该抗体或其抗原结合片段以相对于表达较低水平的CCR7的细胞更大的亲和力结合表达较高水平的CCR7的细胞。在一些实施例中，该抗体或其抗原结合片段以相对于表达较低水平的CCR7的正常细胞更大的亲和力结合表达较高水平的CCR7的癌细胞。在一些实施例中，该抗体或其抗原结合片段未显著消耗表达CCR7的正常造血细胞。在一个实施例中，本申请披露了一种结合CCR7的抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段包含：a.重链可变区，该重链可变区包含SEQIDNO:1的HCDR1(重链互补性决定区1)、SEQIDNO:2的HCDR2(重链本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种结合人CCR7蛋白的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段与相同同种型的野生型抗体相比具有降低的或没有显著的效应子功能。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2017.02.03 US 62/454,4761.一种结合人CCR7蛋白的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段与相同同种型的野生型抗体相比具有降低的或没有显著的效应子功能。2.如权利要求1所述的抗体，其中该抗体或其抗原结合片段具有降低水平的或没有显著水平的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)活性。3.如权利要求1或2所述的抗体，其中该抗体或其抗原结合片段包含沉默的Fc区。4.如权利要求3所述的抗体，其中该抗体或其抗原结合片段在该Fc区中包含选自以下的突变：D265A；P329A；P329G；N297A；D265A和P329A；D265A和N297A；L234和L235A；P329A、L234A和L235A；以及P329G、L234A和L235A。5.如权利要求1-4中任一项所述的抗体，其中该抗体或其抗原结合片段没有显著的细胞杀伤活性。6.如权利要求1-5中任一项所述的抗体，其中该抗体或其抗原结合片段以相对于表达较低水平的CCR7的细胞更大的亲和力结合表达较高水平的CCR7的细胞。7.如权利要求6所述的抗体，其中该抗体或其抗原结合片段以相对于表达较低水平的CCR7的正常细胞更大的亲和力结合表达较高水平的CCR7的癌细胞。8.如权利要求1-7中任一项所述的抗体，其中该抗体或其抗原结合片段未显著消耗表达CCR7的正常造血细胞。9.一种结合CCR7的抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段包含：a.重链可变区，该重链可变区包含SEQIDNO:1的HCDR1(重链互补性决定区1)、SEQIDNO:2的HCDR2(重链互补性决定区2)、和SEQIDNO:3的HCDR3(重链互补性决定区3)；和轻链可变区，该轻链可变区包含SEQIDNO:17的LCDR1(轻链互补性决定区1)、SEQIDNO:18的LCDR2(轻链互补性决定区2)、和SEQIDNO:19的LCDR3(轻链互补性决定区3)；b.重链可变区，该重链可变区包含SEQIDNO:4的HCDR1、SEQIDNO:5的HCDR2、和SEQIDNO:6的HCDR3；和轻链可变区，该轻链可变区包含SEQIDNO:20的LCDR1、SEQIDNO:21的LCDR2、和SEQIDNO:22的LCDR3；c.重链可变区，该重链可变区包含SEQIDNO:7的HCDR1、SEQIDNO:8的HCDR2、和SEQIDNO:9的HCDR3；和轻链可变区，该轻链可变区包含SEQIDNO:23的LCDR1、SEQIDNO:24的LCDR2、和SEQIDNO:25的LCDR3；d.重链可变区，该重链可变区包含SEQIDNO:10的HCDR1、SEQIDNO:11的HCDR2、和SEQIDNO:12的HCDR3；和轻链可变区，该轻链可变区包含SEQIDNO:26的LCDR1、SEQIDNO:27的LCDR2、和SEQIDNO:28的LCDR3；e.重链可变区，该重链可变区包含SEQIDNO:33的HCDR1、SEQIDNO:34的HCDR2、和SEQIDNO:35的HCDR3；和轻链可变区，该轻链可变区包含SEQIDNO:49的LCDR1、SEQIDNO:50的LCDR2、和SEQIDNO:51的LCDR3；f.重链可变区，该重链可变区包含SEQIDNO:36的HCDR1、SEQIDNO:37的HCDR2、和SEQIDNO:38的HCDR3；和轻链可变区，该轻链可变区包含SEQIDNO:52的LCDR1、SEQIDNO:53的LCDR2、和SEQIDNO:54的LCDR3；g.重链可变区，该重链可变区包含SEQIDNO:39的HCDR1、SEQIDNO:40的HCDR2、和SEQIDNO:41的HCDR3；和轻链可变区，该轻链可变区包含SEQIDNO:55的LCDR1、SEQIDNO:56的LCDR2、和SEQIDNO:57的LCDR3；h.重链可变区，该重链可变区包含SEQIDNO:42的HCDR1、SEQIDNO:43的HCDR2、和SEQIDNO:44的HCDR3；和轻链可变区，该轻链可变区包含SEQIDNO:58的LCDR1、SEQIDNO:59的LCDR2、和SEQIDNO:60的LCDR3；i.重链可变区，该重链可变区包含SEQIDNO:65的HCDR1、SEQIDNO:66的HCDR2、和SEQIDNO:67的HCDR3；和轻链可变区，该轻链可变区包含SEQIDNO:81的LCDR1、SEQIDNO:82的LCDR2、和SEQIDNO:83的LCDR3；j.重链可变区，该重链可变区包含SEQIDNO:68的HCDR1、SEQIDNO:69的HCDR2、和SEQIDNO:70的HCDR3；和轻链可变区，该轻链可变区包含SEQIDNO:84的LCDR1、SEQIDNO:85的LCDR2、和SEQIDNO:86的LCDR3；k.重链可变区，该重链可变区包含SEQIDNO:71的HCDR1、SEQIDNO:72的HCDR2、和SEQIDNO:73的HCDR3；和轻链可变区，该轻链可变区包含SEQIDNO:87的LCDR1、SEQIDNO:88的LCDR2、和SEQIDNO:89的LCDR3；l.重链可变区，该重链可变区包含SEQIDNO:74的HCDR1、SEQIDNO:75的HCDR2、和SEQIDNO:76的HCDR3；和轻链可变区，该轻链可变区包含SEQIDNO:90的LCDR1、SEQIDNO:91的LCDR2、和SEQIDNO:92的LCDR3；m.重链可变区，该重链可变区包含SEQIDNO:596的HCDR1、SEQIDNO:597的HCDR2、和SEQIDNO:598的HCDR3；和轻链可变区，该轻链可变区包含SEQIDNO:612的LCDR1、SEQIDNO:613的LCDR2、和SEQIDNO:614的LCDR3；n.重链可变区，该重链可变区包含SEQIDNO:599的HCDR1、SEQIDNO:600的HCDR2、和SEQIDNO:601的HCDR3；和轻链可变区，该轻链可变区包含SEQIDNO:615的LCDR1、SEQIDNO:616的LCDR2、和SEQIDNO:617的LCDR3；o.重链可变区，该重链可变区包含SEQIDNO:602的HCDR1、SEQIDNO:603的HCDR2、和SEQIDNO:604的HCDR3；和轻链可变区，该轻链可变区包含SEQIDNO:618的LCDR1、SEQIDNO:619的LCDR2、和SEQIDNO:620的LCDR3；或p.重链可变区，该重链可变区包含SEQIDNO:605的HCDR1、SEQIDNO:606的HCDR2、和SEQIDNO:607的HCDR3；和轻链可变区，该轻链可变区包含SEQIDNO:621的LCDR1、SEQIDNO:622的LCDR2、和SEQIDNO:623的LCDR3。10.一种结合CCR7的抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段包含：a.包含SEQIDNO:13的氨基酸序列的重链可变区(VH)和包含SEQIDNO:29的氨基酸序列的轻链可变区(VL)；b.包含SEQIDNO:45的氨基酸序列的重链可变区(VH)和包含SEQIDNO:61的氨基酸序列的轻链可变区(VL)；c.包含SEQIDNO:77的氨基酸序列的重链可变区(VH)和包含SEQIDNO:93的氨基酸序列的轻链可变区(VL)；或d.包含SEQIDNO:608的氨基酸序列的重链可变区(VH)和包含SEQIDNO:624的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。11.一种结合CCR7的抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段包含：a.包含SEQIDNO:15的氨基酸序列的重链，和包含SEQIDNO:31的氨基酸序列的轻链；b.包含SEQIDNO:47的氨基酸序列的重链，和包含SEQIDNO:63的氨基酸序列的轻链；c.包含SEQIDNO:79的氨基酸序列的重链，和包含SEQIDNO:95的氨基酸序列的轻链；或d.包含SEQIDNO:610的氨基酸序列的重链，和包含SEQIDNO:626的氨基酸序列的轻链。12.如权利要求1-11中任一项所述的抗体，其中该抗体或其抗原结合片段包含一个或多个半胱氨酸取代。13.如权利要求12所述的抗体，其中该抗体或其抗原结合片段包含一个或多个半胱氨酸取代，该一个或多个半胱氨酸取代选自该抗体或其抗原结合片段的S152C、S375C、或S152C和S375C两者，其中该位置是根据EU系统编号的。14.如权利要求1-13中任一项所述的抗体，其中所述抗体是单克隆抗体。15.一种抗体药物缀合物，该抗体药物缀合物包括下式Ab-(L-(D)m)n或其药学上可接受的盐；其中Ab是根据权利要求1至14中任一项所述的抗体或其抗原结合片段；L是接头；D是药物部分；m是从1至8的整数；并且n是从1至12的整数。16.如权利要求15所述的抗体药物缀合物，其中所述m是1。17.如权利要求15或16中任一项所述的抗体药物缀合物，其中所述n是约3至约4。18.如权利要求15-17中任一项所述的抗体药物缀合物，其中所述接头选自下组，该组由以下组成：可裂解接头、不可裂解接头、亲水性接头、预先带电荷的接头、和基于二羧酸的接头。19.如权利要求18所述的抗体药物缀合物，其中该接头衍生自交联试剂，该交联试剂选自下组，该组由以下组成：N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯(SPDP)、N-琥珀酰亚胺基4-(2-吡啶基二硫代)戊酸酯(SPP)、N-琥珀酰亚胺基4-(2-吡啶基二硫代)丁酸酯(SPDB)、N-琥珀酰亚胺基-4-(2-吡啶基二硫代)-2-磺基-丁酸酯(磺基-SPDB)、N-琥珀酰亚胺基碘乙酸酯(SIA)、N-琥珀酰亚胺基(4-碘乙酰基)氨基苯甲酸酯(SIAB)、马来酰亚胺PEGNHS、N-琥珀酰亚胺基4-(马来酰亚胺基甲基)环己烷羧酸酯(SMCC)、N-磺基琥珀酰亚胺基4-(马来酰亚胺基甲基)环己烷羧酸酯(磺基-SMCC)和2,5-二氧代吡咯烷-1-基17-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-5,8,11,14-四氧代-4,7,10,13-四氮杂十七碳-1-酸酯(CX1-1)。20.如权利要求18所述的抗体药物缀合物，其中所述接头具有以下式(IIA)：其中*与该...

【专利技术属性】
技术研发人员：S·本德，T·查尔顿，A·格拉金，B·H·盖尔斯坦格尔，S·M·格拉泽，S·卡斯布哈特拉，M·克努特，S·罗特曼，S·鲁，G·斯普拉贡，宇野哲郎，
申请(专利权)人：诺华股份有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士,CH