一种猪肺炎支原体与副猪嗜血杆菌、猪链球菌、胸膜肺炎放线杆菌四联灭活疫苗及其应用制造技术

本发明专利技术涉及兽用生物制品技术领域，具体涉及一种猪肺炎支原体与副猪嗜血杆菌、猪链球菌、胸膜肺炎放线杆菌四联灭活疫苗，包括灭活的猪肺炎支原体菌株HNMhy1血清型抗原、灭活的副猪嗜血杆菌菌株HNHPS1血清型抗原、灭活的副猪嗜血杆菌菌株HN1570血清型抗原、灭活的猪链球菌菌株HNSS1血清型抗原、灭活的胸膜肺炎放线杆菌菌株HNAPP1血清型抗原和免疫佐剂，五种菌株均有良好的免疫原性，可以很好的预防临床猪肺炎支原体、副猪嗜血杆菌、猪链球菌和胸膜肺炎放线杆菌型的感染，安全性好，免疫效果好、免疫期长，同时可以达到一针防多病，降低成本。

A Mycobacterium pneumoniae and Haemophilus Haemophilus Haemophilus, Streptococcus suis, Actinobacillus pleuropneumoniae quadruple inactivated vaccine and its application

【技术实现步骤摘要】
一种猪肺炎支原体与副猪嗜血杆菌、猪链球菌、胸膜肺炎放线杆菌四联灭活疫苗及其应用
：本专利技术属于兽用生物制品
，具体涉及一种猪肺炎支原体与副猪嗜血杆菌血清4型、5型、猪链球菌2型、胸膜肺炎放线杆菌1型四联灭活疫苗制备及应用。
技术介绍
：猪肺炎支原体（Mycoplasmahyopneumoniae，Mhp）是猪支原体肺炎（MycoplasmalpneumoniaofSwine，MPS）的主要病原。猪支原体肺炎是一种慢性、接触性传染病，具有高发病率和低病死率的特点，主要表现为食欲减退、发热、咳嗽、气喘、呼吸困难等症状，患病猪生长缓慢，饲料转化率下降，常诱发其他病原的感染，特别是免疫抑制性病原如猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcinereproductiveandrespiratorysyndrome，PRRSV）、猪圆环病毒2型（Porcinecirovirus2，PCV-2），引起免疫抑制诱导，常因同时继发细菌感染引起死亡，是世界上最主要的猪病之一。本病广泛存在于世界各地，持续感染且难以治愈，同时由于感染猪较高的治疗费用并造成生产性能降低，从而给养猪业造成严重危害。副猪嗜血杆菌（Haemophilusparasuis,HPS）是巴氏杆菌科的一种革兰氏阴性多形态小杆菌，为猪副猪嗜血杆菌病的病原菌，主要引起猪的多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎。本病在全世界范围内广泛存在，德国学者Glsser于1910年首先报道，又称为革拉氏病（Glsser'sdisease）。副猪嗜血杆菌可以感染各种年龄段的猪，主要发生在断奶后和保育阶段，主要感染2周龄到4月龄的猪，发病率一般在10%～15%，严重时死亡率可达50%，该病已成为近年来断奶、保育仔猪死亡的主要原因之一，是临床混合感染的主要病原之一，给养猪业造成较大的经济损失，严重影响养猪业的健康发展。副猪嗜血杆菌临床血清型较多，标准分型有15个血清型，临床上还有20%以上的不可分型菌株，该病原呈世界性分布，各地流行菌株血清型不一，各血清型之间缺乏免疫交叉保护能力。疫苗免疫接种是防控副猪嗜血杆菌病的最佳途径，应根据流行的血清型选择对应的单价或多价疫苗。国内副猪嗜血杆菌血清4型、5型是报道最流行的血清型。猪链球菌（StreptococcusSuis,SS）是国家规定的一种二类动物疫病，它是一类人畜共患的急性、热性的传染性疾病，是引起猪链球菌病的主要病原，主要引起猪脑膜炎以及败血症等疫病。根据猪链球菌的荚膜多糖抗原可将之分为35个血清型，即1～34型和1/2型。对猪致病性较强的是1型、2型、1/2型、7型和9型。其中猪链球菌2型是流行最广、致病性最强的血清型，其次是9型、7型、1型。近几年来，猪2型链球菌引起的猪链球菌病呈上升趋势。该病以急性败血症为主，发病急，死亡快，给养猪业造成巨大的经济损失，并且猪2型链球菌可以引起了人的感染和死亡。另外，该病经常与猪圆环病毒、猪繁殖与呼吸综合征、猪的附红细胞体病以及非典型猪瘟混合感染，所以一旦发生此病将很难控制，从而给养殖户造成重大经济财产损失，给我国养猪业的发展带来巨大的困难。因此该病的研究对畜牧业及公共卫生业上均有重要意义。传染性胸膜肺炎放线杆菌（ActinobacillusPleuropneumoniae,APP）是引起猪传染性胸膜肺炎（PorcineinfectionPleuropneumonia）的病原，是一种猪的高度接触性传染性呼吸道疾病，主要表现为爆发性流行，以纤维素性、出血性、坏死性肺炎为特征，发病率在8.5%~100%之间，死亡率在0.4%~100%之间，是当前育肥猪和种猪死亡的主要原因之一。因此传染性胸膜肺炎放线杆菌的防治对于养猪业的健康发展具有重大的意义。胸膜肺炎放线杆菌血清型多达15种，且目前还有很多不能定型的临床分离菌株，各血清型之间缺乏有效的交叉免疫保护，不同国家、地区和猪场流行的优势血清型又不尽相同，因此，APP的分离鉴定和分型在该病的防治中尤为重要。国内流行的血清型主要是1，2，3，5，7型，APP外毒素在致病与免疫中起着重要作用，APP一共有4种外毒素，即毒素ApxⅠ、ApxⅡ、ApxⅢ和ApxⅣ，而且毒素ApxⅠ和ApxⅡ在APP毒力方面起着关键作用。不同血清型分泌的外毒素不一样。血清1型能同时分泌毒素ApxⅠ、ApxⅡ和ApxⅣ，是所有血清型毒株中毒力最强、免疫原性最好的毒株，同时也是我国流行的一种优势血清型毒株。猪肺炎支原体在临床上与副猪嗜血杆菌、猪链球菌、胸膜肺炎放线杆菌经常混合感染或继发感染，几者症状相似，且药物治疗效果均不佳，因此，亟需一种新的具有安全、免疫原性好的多价菌株制备的疫苗对支原体肺炎、副猪嗜血杆菌、猪链球菌、胸膜肺炎放线杆菌病进行防治。
技术实现思路
：针对目前猪肺炎支原体与副猪嗜血杆菌、猪链球菌、胸膜肺炎放线杆菌混合感染，各血清型之间缺少免疫交叉保护的问题，本专利技术提供一种猪肺炎支原体与副猪嗜血杆菌血清4型、5型、猪链球菌2型、胸膜肺炎放线杆菌1型四联灭活疫苗。本专利技术解决其技术问题所采用的方案是：一种猪肺炎支原体与副猪嗜血杆菌、猪链球菌、胸膜肺炎放线杆菌四联灭活疫苗，包括灭活的猪肺炎支原体菌株HNMhy1血清型抗原、灭活的副猪嗜血杆菌菌株HNHPS1血清型抗原、灭活的副猪嗜血杆菌菌株HN1570血清型抗原、灭活的猪链球菌菌株HNSS1血清型抗原、灭活的胸膜肺炎放线杆菌菌株HNAPP1血清型抗原。上述的一种猪肺炎支原体与副猪嗜血杆菌、猪链球菌、胸膜肺炎放线杆菌四联灭活疫苗，所述菌株HNMhy1为猪肺炎支原体，于2017年5月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCCNO：13858；所述菌株HNHPS1为血清4型副猪嗜血杆菌（Haemophilusparasuis），于2016年11月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCCNO：13335；所述菌株HN1570为血清5型副猪嗜血杆菌（Haemophilusparasuis），于2018年11月09日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCCNO：16802；所述菌株HNSS1为2型猪链球菌（Streptococcussuis），于2016年11月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCCNO：13334；所述菌株HNAPP1为1型胸膜肺炎放线杆菌（Actinobaciluspleuropneumoniae）,于2016年11月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCCNO：13333。上述的一种猪肺炎支原体与副猪猪嗜血杆菌、猪链球菌、胸膜肺炎放线杆菌四联灭活疫苗，所述灭活的猪肺炎支原体菌株HNMhy1血清型抗原、灭活的副猪嗜血杆菌菌株HNHPS1血清型抗原、灭活的副猪嗜血杆菌菌株HN1570血清型抗原、灭活的猪链球菌菌株HNSS1血清型抗原和灭活的胸膜肺炎放线杆菌菌株HNAPP本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种猪肺炎支原体与副猪嗜血杆菌、猪链球菌、胸膜肺炎放线杆菌四联灭活疫苗，其特征在于：包括灭活的猪肺炎支原体菌株HNMhy1血清型抗原、灭活的副猪嗜血杆菌菌株HNHPS1血清型抗原、灭活的副猪嗜血杆菌菌株HN1570血清型抗原、灭活的猪链球菌菌株HNSS1血清型抗原、灭活的胸膜肺炎放线杆菌菌株HNAPP1血清型抗原。

【技术特征摘要】
1.一种猪肺炎支原体与副猪嗜血杆菌、猪链球菌、胸膜肺炎放线杆菌四联灭活疫苗，其特征在于：包括灭活的猪肺炎支原体菌株HNMhy1血清型抗原、灭活的副猪嗜血杆菌菌株HNHPS1血清型抗原、灭活的副猪嗜血杆菌菌株HN1570血清型抗原、灭活的猪链球菌菌株HNSS1血清型抗原、灭活的胸膜肺炎放线杆菌菌株HNAPP1血清型抗原。2.根据权利要求1所述的一种猪肺炎支原体与副猪嗜血杆菌、猪链球菌、胸膜肺炎放线杆菌四联灭活疫苗，其特征在于：所述菌株HNMhy1为猪肺炎支原体，于2017年5月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNO：13858；所述菌株HNHPS1为血清4型副猪嗜血杆菌（Haemophilusparasuis），于2016年11月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNO：13335；所述菌株HN1570为血清5型副猪嗜血杆菌（Haemophilusparasuis），于2018年11月09日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNO：16802；所述菌株HNSS1为2型猪链球菌（Streptococcussuis），于2016年11月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，，保藏编号为CGMCCNO：13334；所述菌株HNAPP1为1型胸膜肺炎放线杆菌（Actinobaciluspleuropneumoniae）,于2016年11月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNO：13333。3.根据权利要求1所述的一种猪肺炎支原体与副猪嗜血杆菌、猪链球菌、胸膜肺炎放线杆菌四联灭活疫苗，其特征在于：所述灭活的猪肺炎支原体菌株HNMhy1血清型抗原、灭活的副猪嗜血杆菌菌株HNHPS1血清型抗原、灭活的副猪嗜血杆菌菌株HN1570血清型抗原、灭活的猪链球菌菌株HNSS1血清型抗原和灭活的胸膜肺炎放线杆菌菌株HNAPP1血清型抗原的比例为1∶1∶1∶1∶1。4.一种猪肺炎支原体与副猪嗜血杆菌、猪链球菌、胸膜肺炎放线杆菌四联灭活疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：增殖：将猪肺炎支原体HNMhy1株、副猪嗜血杆菌4型HNHPS1株、副猪嗜血杆菌5型HN1570株、猪链球菌2型HNSS1株和胸膜肺炎放线杆菌1型HNAPP1株分别繁殖培养，获得猪肺炎支原体HNMhy1株、副猪嗜血杆菌HNHPS1株、副猪嗜血杆菌HN1570株、猪链球菌HNSS1株和胸膜肺炎放线杆菌HNAPP1株菌液，并分别进行活菌计数；灭活：分别向步骤a中获得的猪肺炎支原体HNMhy1株、副猪嗜血杆菌HNHPS1株、副猪嗜血杆菌HN1570株、猪链球菌HNSS1株和胸膜肺炎放线杆菌HNAPP1株菌液中按照菌液体积的0.2%加入甲醛溶液，于37℃灭活24h；浓缩：使用超滤装置分别浓缩灭活后检验合格的猪肺炎支原体HNMhy1株、...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐引弟，王治方，张青娴，朱文豪，许峰，焦文强，李海利，郎利敏，张立宪，游一，王克领，
申请(专利权)人：河南省农业科学院畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：河南,41