一种鸡毒支原体新型基因工程亚单位疫苗制造技术

本发明专利技术提供了一种免疫组合物及亚单位疫苗，所述免疫组合物包括一种蛋白，所述蛋白选自以下的一种或者两种以上的任意组合：采用SEQ ID NO:1或3或5或7或9的核酸分子或者与SEQ ID NO:1或3或5或7或9的核苷酸序列95％以上相同的核酸分子编码的鸡毒支原体相关蛋白。该疫苗使用真核表达，产品的抗原性、免疫原性与天然蛋白质相似，表达水平较高，免疫原性强，保护效果好，对鸡没有致病性，并且本发明专利技术的疫苗可以通过生物反应器大规模无血清悬浮培养制备，同时大大降低了疫苗生产成本。

A New Genetically Engineered Subunit Vaccine of Mycoplasma gallisepticum

【技术实现步骤摘要】
一种鸡毒支原体新型基因工程亚单位疫苗
本申请涉及动物免疫药物
，具体涉及一种鸡毒支原体新型基因工程疫苗的制备方法与应用。
技术介绍
鸡毒支原体(MycoplasmaGalliscepticum，MG)感染是鸡呼吸道病的一种，主要引起慢性呼吸道病、气囊炎和窦炎，临床上主要表现为咳嗽、流鼻涕，呼吸时发出罗音，严重时张口呼吸。据统计，鸡毒支原体感染鸡群后，雏鸡的弱雏率增加10％左右，蛋鸡的产蛋率下降10％-20％，肉鸡的体重减少38％，出栏期延长，饲料转化率降低21％，并可间接地引起大量的药费开支，是危害养鸡业的重要疾病之一。鸡毒支原体(MG)是支原体目，支原体科，支原体属的一个致病种，为很小的原核生物，无细胞壁，仅细胞膜包裹。目前鸡毒支原体的防治主要有疫苗预防和药物治疗。鸡毒支原体的感染特征主要在气管粘膜的纤毛上和气囊上定植，而气管纤毛末端和气囊上没有血管，而药物是通过血液运输到达作用部位，再通过扩散作用于毒支原体，因此药物只能减少气管纤毛和气囊上定植的毒支原体数量和减轻临床症状，而不能完将其杀灭，而鸡毒支原体感染一般为一次感染会终生处于持续性感染的带菌状态，因此从目前来看，疫苗可以有效提供保护。目前用于预防、控制鸡毒支原体感染的疫苗都是传统灭活疫苗，但鸡毒支原体培养困难，需要血清，抗原含量低。同时在鸡毒支原体培养过程中，由于培养温度、培养基成分等条件发生变化以及自身的不断复制，鸡毒支原体表面的抗原蛋白极易发生突变以及缺失，导致灭活疫苗存在免疫保护力较弱的问题。因此，研究新的免疫力强的疫苗势在必行。研究开发以基因工程疫苗为主的新型疫苗是本世纪的主导方向。
技术实现思路
本专利技术旨在提供一种免疫组合物，以解决现有技术中的问题。为了实现上述目的，根据本专利技术的一个方面，提供了一种免疫组合物，包括一种蛋白，所述蛋白选自以下的一种或者两种以上的任意组合：采用SEQIDNO:1的核酸分子或者与SEQIDNO:1的核苷酸序列95％以上相同的核酸分子编码的鸡毒支原体粘附素蛋白MGC1；采用SEQIDNO:3的核酸分子或者与SEQIDNO:3的核苷酸序列95％以上相同的核酸分子编码的鸡毒支原体粘附素蛋白MGC2；采用SEQIDNO:5的核酸分子或者与SEQIDNO:5的核苷酸序列95％以上相同的核酸分子编码的鸡毒支原体粘附素蛋白MGC3。采用SEQIDNO:7的核酸分子或者与SEQIDNO:7的核苷酸序列95％以上相同的核酸分子编码的鸡毒支原体血凝相关蛋白VLH3；采用SEQIDNO:9的核酸分子或者与SEQIDNO:9的核苷酸序列95％以上相同的核酸分子编码的鸡毒支原体血凝相关蛋白VLH5。优选的技术方案是，所述的鸡毒支原体粘附素蛋白MGC1包含SEQIDNO:2的氨基酸序列或者与SEQIDNO:2的全长氨基酸序列95％以上相同的氨基酸序列；所述的鸡毒支原体粘附素蛋白MGC2包含SEQIDNO:4的氨基酸序列或者与SEQIDNO:4的全长氨基酸序列95％以上相同的氨基酸序列；所述的鸡毒支原体粘附素蛋白MGC3包含SEQIDNO:6的氨基酸序列或者与SEQIDNO:6的全长氨基酸序列95％以上相同的氨基酸序列。所述的鸡毒支原体血凝相关蛋白VLH3包含SEQIDNO:8的氨基酸序列或者与SEQIDNO:8的全长氨基酸序列95％以上相同的氨基酸序列；所述的鸡毒支原体血凝相关蛋白VLH5包含SEQIDNO:10的氨基酸序列或者与SEQIDNO:10的全长氨基酸序列95％以上相同的氨基酸序列。本专利技术的另一目的在于提供一种所述的免疫组合物用于生产用于在受试动物中诱导针对鸡毒支原体抗原的免疫反应的药剂的用途。本专利技术的又一目的在于提供一种所述的免疫组合物用于生产用于预防鸡毒支原体感染的药剂的用途。本专利技术的又一目的在于提供一种免疫组合物，包括一种用于编码鸡毒支原体血凝相关蛋白或者粘附素蛋白的核酸分子，所述核酸分子选自以下的一种或者两种以上的任意组合：SEQIDNO:1的顺序核苷酸序列或者与SEQIDNO:1的核苷酸序列95％以上相同的顺序核苷酸序列；SEQIDNO:3的顺序核苷酸序列或者与SEQIDNO:3的核苷酸序列95％以上相同的顺序核苷酸序列；SEQIDNO:5的顺序核苷酸序列或者与SEQIDNO:5的核苷酸序列95％以上相同的顺序核苷酸序列；SEQIDNO:7的顺序核苷酸序列或者与SEQIDNO:7的核苷酸序列95％以上相同的顺序核苷酸序列；SEQIDNO:9的顺序核苷酸序列或者与SEQIDNO:9的核苷酸序列95％以上相同的顺序核苷酸序列。本专利技术的又一目的在于提供一种所述的核酸分子用于生产用于在受试动物中诱导针对鸡毒支原体抗原的免疫反应的药剂的用途。本专利技术的又一目的在于提供一种所述的核酸分子用于生产用于预防动物受鸡毒支原体感染的药剂的用途。本专利技术的又一目的在于提供一种蛋白组合物，其选自由以下组成的组：所述的鸡毒支原体粘附素蛋白MGC1包含SEQIDNO:2的氨基酸序列或者与SEQIDNO:2的全长氨基酸序列95％以上相同的氨基酸序列；所述的鸡毒支原体粘附素蛋白MGC2包含SEQIDNO:4的氨基酸序列或者与SEQIDNO:4的全长氨基酸序列95％以上相同的氨基酸序列；所述的鸡毒支原体粘附素蛋白MGC3包含SEQIDNO:6的氨基酸序列或者与SEQIDNO:6的全长氨基酸序列95％以上相同的氨基酸序列。所述的鸡毒支原体血凝相关蛋白VLH3包含SEQIDNO:8的氨基酸序列或者与SEQIDNO:8的全长氨基酸序列95％以上相同的氨基酸序列；所述的鸡毒支原体血凝相关蛋白VLH5包含SEQIDNO:10的氨基酸序列或者与SEQIDNO:10的全长氨基酸序列95％以上相同的氨基酸序列。本专利技术的又一目的在于提供一种适用于在受试动物体内产生针对鸡毒支原体的免疫反应的免疫组合物，包含：所述的鸡毒支原体粘附素蛋白与血凝相关蛋白和佐剂。优选的技术方案是，所述佐剂选自：白油(M52)、硬脂酸铝、司本、吐温的一种或者两种以上的组合。本专利技术公开了一种Sf9细胞表达的鸡毒支原体重组亚单位疫苗的制备方法和应用，并证明该疫苗能够在鸡体内产生较强的体液免疫，免疫后的鸡能够抵御鸡毒支原体感染，属于动物疫苗与兽用生物制品
，其目的在于提供一种可大规模工业化生产的鸡毒支原体重组亚单位疫苗的制备方法：先构建重组穿梭载体，通过分别克隆包含血凝蛋白VLH3(variablyexpressedlipoproteinandhemagglutininlipoproteins3，后面的3等数字是一个作者的命名，根据基因的簇以及其方向命名，有时也称为pMGA)、VLH5(variablyexpressedlipoproteinandhemagglutininlipoproteins5，命名同上)及粘附素蛋白1(Mycoplasmagallisepticumcytadhesin1，MGC1)、粘附素蛋白2(Mycoplasmagallisepticumcytadhesin2，MGC2)、粘附素蛋白3(Mycoplasmagallisepticumcytadhesin3，MGC3)编码基因到穿梭载体pFastBac1载体上。然后构建重组杆状病毒株，包括蛋白SDS-PA本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种免疫组合物，包括一种蛋白，所述蛋白选自以下的一种或者两种以上的任意组合：采用SEQ ID NO:1的核酸分子或者与SEQ ID NO:1的核苷酸序列95％以上相同的核酸分子编码的鸡毒支原体粘附素蛋白MGC1；采用SEQ ID NO:3的核酸分子或者与SEQ ID NO:3的核苷酸序列95％以上相同的核酸分子编码的鸡毒支原体粘附素蛋白MGC2；采用SEQ ID NO:5的核酸分子或者与SEQ ID NO:5的核苷酸序列95％以上相同的核酸分子编码的鸡毒支原体粘附素蛋白MGC3。采用SEQ ID NO:7的核酸分子或者与SEQ ID NO:7的核苷酸序列95％以上相同的核酸分子编码的鸡毒支原体血凝相关蛋白VLH3；采用SEQ ID NO:9的核酸分子或者与SEQ ID NO:9的核苷酸序列95％以上相同的核酸分子编码的鸡毒支原体血凝相关蛋白VLH5。

【技术特征摘要】
1.一种免疫组合物，包括一种蛋白，所述蛋白选自以下的一种或者两种以上的任意组合：采用SEQIDNO:1的核酸分子或者与SEQIDNO:1的核苷酸序列95％以上相同的核酸分子编码的鸡毒支原体粘附素蛋白MGC1；采用SEQIDNO:3的核酸分子或者与SEQIDNO:3的核苷酸序列95％以上相同的核酸分子编码的鸡毒支原体粘附素蛋白MGC2；采用SEQIDNO:5的核酸分子或者与SEQIDNO:5的核苷酸序列95％以上相同的核酸分子编码的鸡毒支原体粘附素蛋白MGC3。采用SEQIDNO:7的核酸分子或者与SEQIDNO:7的核苷酸序列95％以上相同的核酸分子编码的鸡毒支原体血凝相关蛋白VLH3；采用SEQIDNO:9的核酸分子或者与SEQIDNO:9的核苷酸序列95％以上相同的核酸分子编码的鸡毒支原体血凝相关蛋白VLH5。2.根据权利要求1所述的免疫组合物，所述的鸡毒支原体粘附素蛋白MGC1包含SEQIDNO:2的氨基酸序列或者与SEQIDNO:2的全长氨基酸序列95％以上相同的氨基酸序列；所述的鸡毒支原体粘附素蛋白MGC2包含SEQIDNO:4的氨基酸序列或者与SEQIDNO:4的全长氨基酸序列95％以上相同的氨基酸序列；所述的鸡毒支原体粘附素蛋白MGC3包含SEQIDNO:6的氨基酸序列或者与SEQIDNO:6的全长氨基酸序列95％以上相同的氨基酸序列。所述的鸡毒支原体血凝相关蛋白VLH3包含SEQIDNO:8的氨基酸序列或者与SEQIDNO:8的全长氨基酸序列95％以上相同的氨基酸序列；所述的鸡毒支原体血凝相关蛋白VLH5包含SEQIDNO:10的氨基酸序列或者与SEQIDNO:10的全长氨基酸序列95％以上相同的氨基酸序列。3.权利要求1所述的免疫组合物用于生产用于在受试动物中诱导针对鸡毒支原体抗原的免疫反应的药剂的用途。4.权利要求1所述的免疫组合物用于生产用于预防动物受鸡毒支原体感...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹文龙，孔迪，滕小锘，易小萍，张大鹤，
申请(专利权)人：苏州世诺生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32