一种从贻贝中提取抗冻蛋白肽的方法及其在食品冷藏保鲜中的应用技术

本发明专利技术公开了一种从贻贝中提取抗冻蛋白肽的方法及其在食品冷藏保鲜中的应用，通过以下步骤制备：步骤1，清洗贻贝，加入水，贻贝与水的质量体积比1：5，对贻贝肉打浆处理；步骤2，调节pH至8.0‑11.0，离心后取上清液，再调节pH值至3.0‑5.0，静置后离心，得到下层沉淀蛋白；步骤3，将所得蛋白溶于蒸馏水中，添加蛋白酶水解；步骤4，反应结束后，加热使酶失活，冰水浴快速冷却后离心，上清液透析，透过液原样冷冻干燥，即得。本发明专利技术还提供该蛋白肽在食品冷藏保鲜中的应用，将该贻贝抗冻蛋白肽与壳聚糖、石榴皮醇提物及牛蒡醇提物复配，根据贻贝肽的抗冻效果，壳聚糖成膜特点及牛蒡醇提取物和石榴皮醇提物的抑菌功能，协同作用增强食品保鲜效果。

A Method of Extracting Antifreeze Protein Peptide from Mussel and Its Application in Food Preservation

The invention discloses a method for extracting antifreeze protein peptide from mussel and its application in food refrigeration and freshness preservation. The method is prepared by following steps: step 1, cleaning mussel, adding water, the mass-volume ratio of mussel to water is 1:5, beating mussel meat; step 2, adjusting pH to 8.0 11.0, taking supernatant after centrifugation, adjusting pH value to 3.0 5.0, centrifuging after static storage, and obtaining mussel meat. In step 3, the protein was dissolved in distilled water and hydrolyzed with protease. In step 4, after the reaction, the enzyme was inactivated by heating. After rapid cooling in ice bath, centrifugation, dialysis of supernatant was carried out, and then freeze-dried through the original solution. The invention also provides the application of the protein peptide in food refrigeration and preservation. The mussel antifreeze protein peptide is compounded with chitosan, alcohol extract of pomegranate peel and alcohol extract of Arctium lappa. According to the antifreeze effect of the mussel peptide, the characteristics of chitosan film formation and the antimicrobial function of alcohol extract of Arctium lappa and alcohol extract of pomegranate peel, the synergistic effect of the antifreeze protein peptide enhances the food preservation effect.

【技术实现步骤摘要】
一种从贻贝中提取抗冻蛋白肽的方法及其在食品冷藏保鲜中的应用
本专利技术涉及水产食品加工
，具体地涉及一种从贻贝中提取抗冻蛋白肽的方法及其在食品冷藏保鲜中的应用。
技术介绍
贻贝属软体动物门，瓣鳃纲，是一种营足丝附着生活的双壳类软体动物。含有多种对人体有益的营养物质，被人们誉为“海中鸡蛋”。干制贻贝肉（淡菜）中含蛋白质65.2%，另外还含有多种矿物质元素、不饱和脂肪酸、抗菌肽等多种功能性物质。我国所产的贻贝大部分以鲜销为主，少数加工成冻品和方便食品，与其它的海产食品相比较而言，贻贝的附加值极低，资源浪费较为严重。因此，深入探究贻贝深加工技术对拓宽贻贝产业具有重要意义。我国水产品深加工进程缓慢，目前我国对虾加工的主要问题是产品附加值低，加工方式主要是保藏虾或冷冻虾。对虾大多加工成冷冻的虾仁出售，虾仁富含水分和蛋白质，但是在冷冻状态下容易流失组织中的蛋白质和水分，进而影响了对虾的风味，且降低了对虾的营养价值；另一方面虾仁所含的赖氨酸发生非酶褐变生成生成大分子的黑色物质,使虾体变黑，影响感官。因此，对加工工艺进行改造，研制出高效的保鲜和延缓黑变的方法对促进对虾加工产业的发展具有重要的意义。19世纪60年代，Devries在南极鱼类的血液里发现抗冻蛋白，到目前，科学家们已陆续从鱼类、昆虫、细菌真菌及植物中发现抗冻蛋白。抗冻蛋白可以吸附在冰晶表面，阻挡冰晶的生长，降低冰点，抑制冰晶重结晶，降低有机体所受冰晶伤害。目前使用较多的水产品保鲜技术有防冻剂和抑菌剂。白靖公开了一种利用植酸钠、肉豆蔻酸、海藻酸钠、茶多酚、乳酸链球菌素等组成的保鲜配方（专利申请号：CN2017113324055）；另外，白靖还公开了一种由植酸钠、牛至油、蜂胶、硫酸亚铁、溶菌酶、竹叶抗氧化物和冬酞胺等组成的保鲜配方（专利申请号：CN2017113324074）。白靖这两个用于食品保鲜的配方虽然原料廉价易得，生产成本低，但是这两个配方只是能够抑制微生物生长，而不能减少冷冻过程中冰晶的生长对组织的破坏。罗永康公布了一种从鱼皮中提取抗冻蛋白的方法（专利授权号：ZL2013105421869），但是这种方法不能将蛋白有效地水解，并且也没有对水解产物做透析处理；而其作为抗冻保护剂在微生物或冷冻食品的低温冷冻保护中的应用时，其效果也较单一，因为没有兼顾微生物对食品保鲜过程的影响。董珊珊公开了一种从贻贝提取多糖的方法（专利申请号：CN2017110430353）；但是目前还没发现从贻贝提取抗蛋白肽，用于食品保鲜的报道。
技术实现思路
针对现有问题的不足，本专利技术的第一个目的是提供一种从贻贝中提取抗冻蛋白肽的方法。本专利技术的第二个目的是提供一种贻贝抗冻蛋白肽的应用。本专利技术解决其技术问题采用的技术方案是：一种从贻贝中提取抗冻蛋白肽的方法，通过以下步骤制备得到：步骤1，清洗贻贝，加入水，贻贝与水的质量体积比1：5，对贻贝肉打浆处理；步骤2，对步骤1的浆液，调节pH至8.0-11.0，离心后取上清液，再调节pH值至3.0-5.0，静置后离心，得到下层沉淀蛋白；步骤3，将步骤2所得蛋白溶解于蒸馏水中，添加蛋白酶水解，调节温度和pH值，期间通过滴加NaOH保持反应pH不变；步骤4，水解反应结束后，对水解物加热至90℃，使蛋白酶失活，冰水浴快速冷却后离心，上清液依次通过截留分子量不同的透析袋，透过液原样冷冻干燥，即得不同分子量的贻贝抗冻蛋白肽。作为本申请的优选技术方案，所述步骤2中，选用0.1mol/L的NaOH调节pH至8.0-11.0，上清液选用0.1mol/L的HCl调节pH值为3.0-5.0。作为本申请的优选技术方案，所述步骤2中，静置时间为1-3h。作为本申请的优选技术方案，所述步骤3中，蛋白酶为蛋白酶K，且蛋白酶K的添加量为蛋白质量的1%-3%；水解时间为1-3h；pH值维持在5.5-8.0之间；调节温度为35-40℃。作为本申请的优选技术方案，所述步骤3中，蛋白酶为风为蛋白酶，且风味蛋白酶的添加量为蛋白质量的1%-4%；水解时间为2-5h；pH值维持在4.5-7.5之间；调节温度为35-40℃。作为本申请的优选技术方案，所述步骤4中，透析袋的截留分子量为1kDa-6kDa。上述提取方法提取得到的抗冻蛋白肽在食品冷藏保鲜中的应用。作为本申请的优选技术方案，所述食品指虾肉。作为本申请的优选技术方案，所述抗冻蛋白肽作为复配保鲜剂的组成成分使用，该复配保鲜剂的主要成分及对应质量份如下：抗冻蛋白肽2-6份，壳聚糖3-10份，石榴皮醇提物+牛蒡醇提物3-8份。作为本申请的优选技术方案，所述复配保鲜剂的使用方法如下：将南美白对虾仁浸入15-20%的复配保鲜剂溶液中，浸泡10-30min，捞出沥干，控干保鲜保水液，-40℃冷冻1h后，真空包装，-20℃冷冻保藏。作为本申请的优选技术方案，所述石榴皮醇提物和牛蒡醇提物的制备方法如下：按质量比1：1称取石榴皮和牛蒡，以料液比1：5-15的比例超声提取，提取时间为20-60min，超声处理的温度为50-70℃，超声的功率为200w-400w，真空减压浓缩，干燥后得粉状物备用。有益效果本专利技术提供的一种从贻贝中提取抗冻蛋白肽的方法及其在食品冷藏保鲜中的应用，与现有技术相比，具有以下有益效果：（1）本专利技术的贻贝抗冻蛋白肽制备方法简单，易实现产业化生产，克服当前贻贝加工简单，附加值低的产业问题；（2）酶解过程使用蛋白酶k和风味蛋白酶，提高了酶解效果，同时，实现抗冻蛋白多样化；（3）本专利技术开发的抗冻蛋白肽，能广泛应用于水产品虾仁等的低温冷冻保护作用，抑制了冰晶对组织结构的破坏，保证了虾仁等水产品的风味；同时，该抗冻蛋白肽与壳聚糖、牛蒡醇提物及石榴皮醇提物复配，利用了壳聚糖狼嚎的成模型的特点，将水产品在壳聚糖溶液中浸泡形成一层保护下薄膜，减慢食品与环境之间的水分传递，减少氧气接触，控制新陈代谢；另一方面，牛蒡富含多酚类物质，石榴皮富含鞣质，其醇提物具有很强的抑菌特点；因此，该生物保鲜剂从抑制腐败菌滋生和抑制冰晶生长两方面达到优质水产食品的质地要求。附图说明图1为本专利技术实施例1-6的冻结水含量图；图2为本专利技术实施例1-6的菌群测定图。具体实施方式以下结合实施例对本专利技术做进一步详细说明。所用试剂或者仪器设备未注明生产厂商的，均视为可以通过市场购买的常规产品。实施例1.（1）清洗贻贝，加入水，贻贝与水的质量体积比1：5，对贻贝肉打浆处理。（2）对步骤（1）的浆液，用0.1mol/LNaOH调节pH为8.0，离心后取上清液，对上清液用0.1mol/LHCl调节pH值为3.0，静置后离心，得到下层沉淀蛋。（3）将贻贝蛋白溶解于蒸馏水中，添加蛋白酶K，添加量为1%（以样品蛋白质算）；水解时间为1h；调节pH值为5.5；调节温度为35℃；期间通过滴加0.1mol/L的NaOH保持反应pH不变。（4）水解反应结束后，对水解物加热至90℃，使蛋白酶失活，冰水浴快速冷却后离心，上清液通过截留分子量1kDa的透析袋，透过液原样冷冻干燥，得到贻贝抗冻蛋白肽6.0g。（5）该贻贝抗冻蛋白肽与壳聚糖、石榴皮醇提物和牛蒡醇提物构成复配保鲜剂，其组成为：贻贝抗冻蛋白肽2份；壳聚糖3份；石榴皮醇提物+牛蒡醇提物3份；制备方法为：将南美白对虾虾仁浸入15％的复配保鲜剂溶本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种从贻贝中提取抗冻蛋白肽的方法，其特征在于，通过以下步骤制备得到：步骤1，清洗贻贝，加入水，贻贝与水的质量体积比1：5，对贻贝肉打浆处理；步骤2，对步骤1的浆液，调节pH至8.0‑11.0，离心后取上清液，再调节pH值至3.0‑5.0，静置后离心，得到下层沉淀蛋白；步骤3，将步骤2所得蛋白溶解于蒸馏水中，添加蛋白酶水解，调节温度和pH值，期间通过滴加NaOH保持反应pH不变；步骤4，水解反应结束后，对水解物加热至90 ℃，使蛋白酶失活，冰水浴快速冷却后离心，上清液依次通过截留分子量不同的透析袋，透过液原样冷冻干燥，即得不同分子量的贻贝抗冻蛋白肽。

【技术特征摘要】
1.一种从贻贝中提取抗冻蛋白肽的方法，其特征在于，通过以下步骤制备得到：步骤1，清洗贻贝，加入水，贻贝与水的质量体积比1：5，对贻贝肉打浆处理；步骤2，对步骤1的浆液，调节pH至8.0-11.0，离心后取上清液，再调节pH值至3.0-5.0，静置后离心，得到下层沉淀蛋白；步骤3，将步骤2所得蛋白溶解于蒸馏水中，添加蛋白酶水解，调节温度和pH值，期间通过滴加NaOH保持反应pH不变；步骤4，水解反应结束后，对水解物加热至90℃，使蛋白酶失活，冰水浴快速冷却后离心，上清液依次通过截留分子量不同的透析袋，透过液原样冷冻干燥，即得不同分子量的贻贝抗冻蛋白肽。2.根据权利要求1所述的从贻贝中提取抗冻蛋白肽的方法，其特征在于，所述步骤2中，选用0.1mol/L的NaOH调节pH至8.0-11.0，上清液选用0.1mol/L的HCl调节pH值为3.0-5.0。3.根据权利要求1所述的从贻贝中提取抗冻蛋白肽的方法，其特征在于，所述步骤2中，静置时间为1-3h。4.根据权利要求1所述的从贻贝中提取抗冻蛋白肽的方法，其特征在于，所述步骤3中，蛋白酶为蛋白酶K，且蛋白酶K的添加量为蛋白质量...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭英云，苏建辉，潘凤涛，
申请(专利权)人：盐城工学院，
类型：发明
国别省市：江苏,32