一种靶向BCMA的嵌合抗原受体及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种靶向BCMA嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包含能够结合抗原的胞外结构域、跨膜结构域和至少一个胞内结构域，其中，所述胞外结构域为抗BCMA单域抗体；其中，所述抗BCMA单域抗体的氨基酸序列选自：(a)如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列；或者，(b)如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列经过一个或多个氨基酸的取代、添加或缺失而形成的，能够特异结合在嵌合抗原受体上，具有结合BCMA和诱导T细胞信号传导功能的变体。本发明专利技术的嵌合抗原受体有更小的临床副作用与更高的安全性，可有效缩小实体瘤灶，有效提高肿瘤的治疗效果。

A chimeric antigen receptor targeting BCMA and its application

The present invention relates to a chimeric antigen receptor targeting BCMA. The chimeric antigen receptor comprises an extracellular domain, a transmembrane domain and at least one intracellular domain capable of binding antigens, in which the extracellular domain is an anti-BCMA monocyte antibody. The amino acid sequence of the anti-BCMA monocyte antibody is selected from: (a) an amino acid sequence as shown in SEQ ID NO.1; or (b) an anti-BCMA monocyte antibody. The amino acid sequence shown in ID NO.1 is formed by substitution, addition or deletion of one or more amino acids. It can specifically bind to chimeric antigen receptors, and has variants that bind BCMA and induce T cell signal transduction. The chimeric antigen receptor of the invention has less clinical side effects and higher safety, can effectively reduce solid tumour focus and effectively improve the therapeutic effect of tumors.

【技术实现步骤摘要】
一种靶向BCMA的嵌合抗原受体及其应用
本专利技术涉及肿瘤的细胞免疫治疗领域，尤其涉及一种靶向BCMA的嵌合抗原受体及其应用，具体为以特异靶点BCMA为基础的嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞技术的构建方法及其在抗肿瘤治疗中的应用。
技术介绍
随着肿瘤免疫学理论和临床技术的发展，嵌合抗原受体T细胞疗法(ChimericantigenreceptorT-cellimmunotherapy，CAR-T)成为目前最有发展前景的肿瘤免疫疗法之一。一般，嵌合抗原受体CAR由一个肿瘤相关抗原结合区、胞外铰链区、跨膜区域以及胞内信号转导区组成。通常，CAR包含抗体的单链片段可变区(Singlechainfragmentvariable，scFv)或对肿瘤相关抗原(tumorassociatedantigen,TAA)具有特异性的结合结构域，其通过铰链和跨膜区与T细胞信号传导分子的胞质结构域偶联。最常见的淋巴细胞活化部分包括与T细胞效应物功能触发(例如CD3ζ)部分串联的T细胞共刺激结构域。CAR介导的过继性免疫疗法允许CAR-移植的T细胞以非HLA限制性方式直接识别靶肿瘤细胞上的TAA。绝大多数具有B细胞恶性肿瘤和多发性骨髓瘤的患者是癌症死亡的重要贡献者。B细胞恶性肿瘤对各种治疗形式的应答混合。治疗B细胞恶性肿瘤的传统方法都具有毒性和副作用，而采用抗CD19、抗CD20、抗CD22、抗CD23、抗CD52等抗体进行免疫治疗，其效果一般。随着技术的发展，开始使用表达嵌合抗原受体(CAR)修饰的细胞进行治疗，但CAR中所使用的既定抗原结合结构域的治疗效果是不可预知的，造成治疗效果不稳定。采用BCMA抗原作为胞外域用于治疗B细胞相关疾病都有公开，但是抗原结合结构域结合得太强，那么CART细胞诱导大规模细胞因子释放，导致视为“细胞因子风暴”的可能致死的免疫反应；但如果抗原结合结构域结合太弱，那么CART细胞无法在清除癌细胞方面呈现充足治疗功效。而现有技术中，CN106687483A公开了人源化抗BCMA嵌合抗原受体治疗癌症，其通过施用表达CAR遗传修饰的T细胞的方法，从而实现治疗与B细胞成熟抗原蛋白(BCMA)的表达相关的疾病。CN107207598A公开了BCMA嵌合抗原受体，其用于B细胞相关病况的过继T细胞疗法的应用。因此，制备一种靶向BCMA的嵌合抗原受体，除了具有抗体治疗的优点，选择一个与抗原结合结构域结合适中的抗体，必能提供B细胞相关疾病一个更有效的治疗选择。
技术实现思路
针对目前CAR-T技术治疗肿瘤中靶向不十分理想，以及肿瘤微环境影响CAR-T技术治疗效果的情况，本专利技术提供一种靶向BCMA的嵌合抗原受体及其应用，本专利技术制备的嵌合抗原受体通过筛选得到靶向BCMA的嵌合抗原受体，增强了CAR-T细胞的治疗效果。为达此目的，本专利技术采用以下技术方案：一方面，本专利技术提供一种靶向BCMA的嵌合抗原受体，所述包含能够结合抗原的胞外结构域、跨膜结构域和至少一个胞内结构域，其中，所述胞外结构域为抗BCMA单域抗体；其中，所述抗BCMA单域抗体的氨基酸序列选自：(a)如SEQIDNO.1所示的氨基酸序列；或者，(b)如SEQIDNO.1所示的氨基酸序列经过一个或多个氨基酸的取代、添加或缺失而形成的，能够特异结合在嵌合抗原受体上，具有结合BCMA和诱导T细胞信号传导功能的变体。本专利技术中，专利技术人通过对大量BCMA抗体进行筛选，通过亲和力、能否与人Fc段结合分析，找到了一个抗BCMA单域抗体，通过其结合在嵌合抗原受体的胞外结构域，能够显著提高嵌合抗原受体的治疗效果。在一个具体的实施例中，所述SEQIDNO.1所示的氨基酸序列如下：qvqlvesggglvqaggslrlscaasgrtfsdhtlgwfrqapgkerefvgaiswsggstyyadsvsgrftisrdkakntgylqmnslkpedtavyycaaaddrysdyrywgqgtqvtvss.根据本专利技术，所述如SEQIDNO.1所示的氨基酸序列经过一个或多个氨基酸的取代、添加或缺失而形成的氨基酸序列与SEQIDNO.1所示的氨基酸序列具有至少90％同一性，优选为95％，更优选为98％同一性的变体。在一个具体的实施例中，所述变体与SEQIDNO.1具有92％的同一性，仍然具有能够特异结合在嵌合抗原受体上，具有结合BCMA和诱导T细胞信号传导功能。在一个具体的实施例中，所述变体与SEQIDNO.1具有94％的同一性，仍然具有能够特异结合在嵌合抗原受体上，具有结合BCMA和诱导T细胞信号传导功能。在一个具体的实施例中，所述变体与SEQIDNO.1具有95％的同一性，仍然具有能够特异结合在嵌合抗原受体上，具有结合BCMA和诱导T细胞信号传导功能。在一个具体的实施例中，所述变体与SEQIDNO.1具有96％的同一性，仍然具有能够特异结合在嵌合抗原受体上，具有结合BCMA和诱导T细胞信号传导功能。在一个具体的实施例中，所述变体与SEQIDNO.1具有98％的同一性，仍然具有能够特异结合在嵌合抗原受体上，具有结合BCMA和诱导T细胞信号传导功能。在一个具体的实施例中，所述变体与SEQIDNO.1具有99％的同一性，仍然具有能够特异结合在嵌合抗原受体上，具有结合BCMA和诱导T细胞信号传导功能。根据本专利技术，所述抗BCMA单域抗体的核苷酸序列包含具有如SEQIDNO.2所示的序列，SEQIDNO.2所示的核苷酸序列具体如下：caggtgcagctggtagagtctgggggaggattggtgcaggctgggggctctctgagactctcctgtgcagcctctggacgtaccttcagtgaccataccctgggctggttccgccaggctcccgggaaggagcgtgagtttgtaggagctatttcctggagtggtggtagcacatactatgcagactccgtgagcggccgattcaccatctctcgagacaaggccaagaacacgggctatctgcaaatgaacagcctgaaacctgaggacacggccgtttattactgtgcagcagccgacgatcgctatagtgactatcgctactggggccaggggacccaggtcaccgtctcctca.根据本专利技术，所述抗BCMA单域抗体的核苷酸序列包含与SEQIDNO.2所示的序列具有至少85％，例如可以是85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％，优选90％，更优选95％同一性的变体，其表达的蛋白具有能够特异结合在嵌合抗原受体上，具有结合BCMA和诱导T细胞信号传导功能。根据本专利技术，所述跨膜结构域为CD28跨膜结构域和/或CD8α跨膜结构域。根据本专利技术，所述胞内结构域还包括胞内共刺激信号传导域和/或CD3ζ信号传导域。根据本专利技术，所述共刺激信号传导结构域为人4-1BB胞内区、人CD28胞内区、人CD27胞内区、人OX40胞内区、人CD30胞内区、人CD40胞内区或人OX40胞内区中的任意一种或至少两种的组合，优选为人4-1BB胞内区。根据本专利技术，所述胞外结构域和跨膜结构域是本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种靶向BCMA的嵌合抗原受体，其特征在于，所述嵌合抗原受体包含能够结合抗原的胞外结构域、跨膜结构域和至少一个胞内结构域，其中，所述胞外结构域为抗BCMA单域抗体；其中，所述抗BCMA单域抗体的氨基酸序列选自：(a)如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列；或者，(b)如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列经过一个或多个氨基酸的取代、添加或缺失而形成的，能够特异结合在嵌合抗原受体上，具有结合BCMA和诱导T细胞信号传导功能的变体。

【技术特征摘要】
1.一种靶向BCMA的嵌合抗原受体，其特征在于，所述嵌合抗原受体包含能够结合抗原的胞外结构域、跨膜结构域和至少一个胞内结构域，其中，所述胞外结构域为抗BCMA单域抗体；其中，所述抗BCMA单域抗体的氨基酸序列选自：(a)如SEQIDNO.1所示的氨基酸序列；或者，(b)如SEQIDNO.1所示的氨基酸序列经过一个或多个氨基酸的取代、添加或缺失而形成的，能够特异结合在嵌合抗原受体上，具有结合BCMA和诱导T细胞信号传导功能的变体。2.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体，其特征在于，所述如SEQIDNO.1所示的氨基酸序列经过一个或多个氨基酸的取代、添加或缺失而形成的氨基酸序列与SEQIDNO.1所示的氨基酸序列具有至少90％同一性，优选为95％，更优选为98％同一性的变体；优选地，所述抗BCMA单域抗体的核苷酸序列包含具有如SEQIDNO.2所示的序列，或与其具有至少85％，优选90％，进一步优选95％同一性的变体。3.根据权利要求1或2所述的嵌合抗原受体，其特征在于，所述跨膜结构域为CD28跨膜结构域和/或CD8α跨膜结构域；优选地，所述胞内结构域还包括胞内共刺激信号传导域和/或CD3ζ信号传导域；优选地，所述共刺激信号传导结构域为人4-1BB胞内区、人CD28胞内区、人CD27胞内区、人OX40胞内区、人CD30胞内区、人CD40胞内区或人OX40胞内区中的任意一种或至少两种的组合，优选为人4-1BB胞内区；优选地，所述胞外结构域和跨膜结构域是通过铰链区连接的；优选地，所述铰链区包含IgG1铰链区和/或CD8α铰链区；优选地，所述嵌合抗原受体还包括信号肽，优选为CD8α信号肽或Secretory信号...

【专利技术属性】
技术研发人员：李光超，罗敏，曾剑华，郭锦涛，莫文俊，
申请(专利权)人：广州百暨基因科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44