The present invention relates to compositions for stabilizing all nucleic acids from whole blood, especially RNA, and a method for stabilizing all nucleic acids from whole blood for subsequent separation and cell decomposition, so that cellular nucleic acids can be released in contact with the compositions, especially in the state of blood drawing, and in nature and concentration. Aspects can remain stable and can be subsequently isolated. Here, the composition is characterized by preventing, in particular, the degradation and resynthesis of RNA in the whole blood in which it is mixed. The separation of RNA by contacting aqueous compositions and mixtures of blood with adsorbents can be carried out directly by the complete mixing of aqueous compositions with blood, i.e., in the absence of nucleic acid precipitation and separation from the mixture, optionally after storage, during which the mixture is transported, for example, from the blood collection point to the location of the analysis process.
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于从全血中分离核酸的装置和方法本专利技术涉及用于使来自生物样品、特别地来自全血的核酸、特别地RNA(包括细胞中所含的RNA)稳定化(优选地伴随随后分离核酸)的组合物的方法,以及用作血液采集管的装置,其包含适用于使全部核酸、特别地全部RNA稳定化并且适用于随后的分离的组合物。用于使来自生物样品、特别地全血的核酸稳定化的组合物、方法和可用于所述方法的包含所述组合物的血液采集管的特征在于,实现了全血中的核酸、特别地RNA的有效稳定化并且允许快速有效的分离方法(过程)。在此,稳定化包括全部核酸、特别地全部RNA(包括无细胞血浆中所含的核酸、特别地RNA,以及血液中存在的细胞所含的核酸、特别地RNA)。现有技术WO02/056030A2描述了一种用于稳定化样品中的RNA含量的容器,其具有预定的真空以抽吸预定的样品体积,其中在所述容器中提供用于抑制基因诱导和对抗核酸的酶促降解的试剂(Mittel),特别地巯基乙醇、二硫苏糖醇(DTT)和离液盐(离液序列高的盐),特别地异硫氰酸胍或盐酸胍。WO00/09746A1描述了一种血液采集容器,其包含用于裂解(Lyse)细胞和稳定化核酸的溶液,该溶液具有胍盐、缓冲液、洗涤剂和还原剂,特别地DTT、β-巯基乙醇和TCEP(三(2-羧基乙基)膦)。其中还原剂、特别地β-巯基乙醇或DTT被认为是对于稳定化血清中的RNA是所必需的。WO2009/018034A1涉及通过添加非离子型洗涤剂来提高SDS在用于细胞的裂解缓冲液中的溶解度以及通过添加裂解缓冲液和随后添加十倍体积的提取缓冲液从动物组织中分离DNA的方法,所述裂解缓冲液由以下组成: ...
【技术保护点】
1.组合物用作用于全血中包含的细胞的分解剂、用作用于全血的全部RNA的稳定剂以及用于通过将RNA从全血与所述组合物的混合物吸附到用于核酸的吸附剂上来进行分离的用途,其特征在于,所述组合物以水溶液的形式由:a.至少一种胍盐,b.至少一种缓冲剂物质,其用于缓冲至pH5.0‑8.0,c.至少一种非离子型洗涤剂和d.至少一种二价阳离子的络合剂e.和任选地蛋白酶和/或DNA酶组成,并且是f.不含还原剂的。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.02.11 EP 16155286.41.组合物用作用于全血中包含的细胞的分解剂、用作用于全血的全部RNA的稳定剂以及用于通过将RNA从全血与所述组合物的混合物吸附到用于核酸的吸附剂上来进行分离的用途,其特征在于,所述组合物以水溶液的形式由:a.至少一种胍盐,b.至少一种缓冲剂物质,其用于缓冲至pH5.0-8.0,c.至少一种非离子型洗涤剂和d.至少一种二价阳离子的络合剂e.和任选地蛋白酶和/或DNA酶组成,并且是f.不含还原剂的。2.根据权利要求1所述的用途,其特征在于,所述胍盐为硫氰酸胍,所述缓冲剂物质为2-(N-吗啉代)乙磺酸(MES)、三(三(羟甲基)氨基甲烷)、柠檬酸盐、(磷酸氢二钠)二水合磷酸盐、BisTris-缓冲液(双(2-羟甲基)-亚氨基-三-(羟甲基)-甲烷)、ACES(N-(2-乙酰氨基)-2-氨基甲磺酸)、碳酸氢钠或(磷酸氢钠)二水合磷酸盐,所述非离子型洗涤剂为TritonX-100、吐温20、吐温80(聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯)、Brij58(聚乙二醇十六烷基醚)、TritonX-114(辛基苯酚聚乙二醇醚)或NonidetP40,并且所述络合剂为乙二胺四乙酸(EDTA),并且它不含硫醇化合物或其前体化合物作为还原剂。3.根据前述权利要求之一所述的用途,其特征在于,所述用途包括通过使由全血和所述组合物组成的混合物与用于核酸的吸附剂接触而从所述混合物中分离核酸,而不用预先通过离心所述混合物来沉淀和分离核酸。4.根据前述权利要求之一所述的用途,其特征在于,在混合物中以最高达1:13的全血与所述组合物的可变体积比提供所述组合物。5.根据前述权利要求之一所述的用途,其特征在于,所述组合物包含在血液采集管中。6.血液采集管的根据权利要求5中所述的用途,其特征在于,所述血液采集管被配置成吸入可变体积的生物样品。7.根据前述权利要求之一中所述的用作用于全血中包含的细胞的分解剂、用作用于全血中包含的全部RNA的稳定剂以及用于通过将核酸直...
【专利技术属性】
技术研发人员:R舒斯特,
申请(专利权)人:萨斯特德特股份有限两合公司,
类型:发明
国别省市:德国,DE
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