一种核酸释放剂以及核酸现场释放方法技术

本发明专利技术提供了一种核酸释放剂，属于核酸提取技术领域，所述核酸释放剂为液体制剂，所述核酸释放剂中，非离子型表面活性剂的体积百分含量为0.2～2％；海藻糖的质量体积百分含量为0.01～2％；蛋白酶K的质量体积浓度为0.1～5mg/ml；氯化钾的浓度为50～200mmol/L；异硫氰酸胍的浓度为20～100mmol/L；牛血清白蛋白的浓度为0.5～10mmol/L；乙二胺四乙酸的浓度为1～10mmol/L；Tris‑HCl的浓度为0.2～5mmol/L，所述核酸释放剂还包括余量的水。所述试剂可以免去核酸的回收步骤，避免核酸丢失或污染，应用所述试剂能够实现现场核酸的释放和检测。

A Nucleic Acid Releasing Agent and Its Field Release Method

The invention provides a nucleic acid releasing agent, which belongs to the field of nucleic acid extraction technology. The nucleic acid releasing agent is a liquid preparation. Among the nucleic acid releasing agent, the volume percentage of non-ionic surfactant is 0.2-2%, the mass volume percentage of trehalose is 0.01-2%, the mass volume concentration of protease K is 0.1-5 mg/ml, and the concentration of potassium chloride is 50-200 mmol/L. The concentration of guanidine thiocyanate is 20-100 mmol/L; the concentration of bovine serum albumin is 0.5-10 mmol/L; the concentration of ethylenediaminetetraacetic acid is 1-10 mmol/L; and the concentration of Tris_HCl is 0.2-5 mmol/L. The nucleic acid releasing agent also includes residual water. The reagent can avoid the steps of recovering nucleic acid and avoid the loss or contamination of nucleic acid. The release and detection of nucleic acid in the field can be realized by using the reagent.

【技术实现步骤摘要】
一种核酸释放剂以及核酸现场释放方法
本专利技术属于核酸提取
，尤其涉及一种核酸释放剂以及核酸现场释放方法。
技术介绍
目前，核酸检测由于其灵敏度高、特异性强、操作简便、所需时间短等特点，已广泛应用于临床医学、检验检疫等多个领域，尤其是PCR、等温扩增等核酸扩增技术。然而，核酸扩增技术对于临床或直接获得的标本中的干扰物质较为敏感，会造成检测结果的假阴性，故在核酸扩增前需进行样品核酸提取与纯化。但一直以来，样本中核酸的提取和纯化是整个实验中最耗时，最繁琐的过程，严重影响样本检测的速度以及现场应用。迄今为止，核酸提取方法主要有煮沸法、离心柱法以及磁珠法。煮沸法提取时需要多次换管离心等步聚，样本处理时间长，且仍存在少量抑制扩增物质，对后续扩增会有抑制效应；离心柱法提取效果较好，但步聚繁多，且该过程中存在核酸容易丢失或污染的不足；磁珠法提取步聚简单，回收率高，易于自动化提取，但产品价格十分昂贵，目前应用并不广泛。综上所述，目前的核酸提取方法存在样本需求量大，时间长，提取效果差的问题。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种可以进行核酸快速释放的试剂，所述试剂可以免去核酸的回收步骤，避免核酸丢失或污染，应用所述试剂能够实现现场核酸的释放和检测。为了实现上述目的，本专利技术提供了以下技术方案：一种核酸释放剂，所述核酸释放剂为液体制剂，所述核酸释放剂为液体制剂，所述核酸释放剂中，非离子型表面活性剂的体积百分含量为0.2～2％；海藻糖的质量体积百分含量为0.01～2％；蛋白酶K的质量体积浓度为0.1～5mg/ml；氯化钾的浓度为50～200mmol/L；异硫氰酸胍的浓度为20～100mmol/L；牛血清白蛋白的浓度为0.5～10mmol/L；乙二胺四乙酸的浓度为1～10mmol/L；Tris-HCl的浓度为0.2～5mmol/L；所述核酸释放剂还包括余量的无菌水。优选的，所述核酸释放剂中，所述非离子型表面活性剂的体积百分含量为0.5～1％；所述海藻糖的质量体积百分含量为0.02～0.5％；所述蛋白酶K的质量体积浓度为0.5～4.5mg/ml；所述氯化钾的浓度为55～100mmol/L；所述异硫氰酸胍的浓度为25～60mmol/L；所述牛血清白蛋白的浓度为1～9mmol/L；所述乙二胺四乙酸的浓度为2～6mmol/L；所述Tris-HCl的浓度为0.3～3mmol/L。优选的，所述核酸释放剂中，所述非离子型表面活性剂的体积百分含量为0.3～1.5％；所述海藻糖的质量体积百分含量为0.1～1％；所述蛋白酶K的质量体积浓度为0.6～4mg/ml；所述氯化钾的浓度为60～80mmol/L；所述异硫氰酸胍的浓度为40～60mmol/L；所述牛血清白蛋白的浓度为3～10mmol/L；所述乙二胺四乙酸的浓度为2～5mmol/L；所述Tris-HCl的浓度为0.5～4mmol/L。优选的，所述核酸释放剂中，所述非离子型表面活性剂的体积百分含量为0.5～1.4％；所述海藻糖的质量体积百分含量为0.01～0.3％；所述蛋白酶K的质量体积浓度为1～5mg/ml；所述氯化钾的浓度为100～150mmol/L；所述异硫氰酸胍的浓度为60～100mmol/L；所述牛血清白蛋白的浓度为5～10mmol/L；所述乙二胺四乙酸的浓度为2～6mmol/L；所述Tris-HCl的浓度为0.2～5mmol/L。优选的，所述Tris-HCl的pH值为7.2～7.7。优选的，所述的非离子型表面活性剂为CA-630类非离子表面活性剂。优选的，所述的非离子型表面活性剂为辛基苯基-聚乙烯二醇。本专利技术还提供了所述核酸释放剂进行核酸现场释放方法，包括以下步骤：1)将所述核酸释放剂与样本混合获得混合液；2)将步骤1)所述的混合液静置3～10min后，固液分离，收集固相组分获得目的核酸。优选的，步骤1)中所述核酸释放剂与样本的体积比为1：(1～3)。优选的，步骤2)所述的固液分离的方法为离心，所述离心的转速为1500～2500rpm，所述离心的时间为5～10s。本专利技术的有益效果：本专利技术提供的核酸释放剂能快速破坏样本中的蛋白质结构，并能变性、吸附及沉淀样本中的核酸扩增抑制物质，同时能够保护DNA。本专利技术提供的核酸释放剂具有使用安全，操作简便，制造成本低廉的优点。本专利技术所述的核酸释放剂可以直接对咽拭子、细菌培养物、血清、血浆或全血标本中DNA进行释放，无需加热，只需一步加样，即可完成DNA的释放和提取。本专利技术能够实现DNA核酸提取与荧光PCR、等温扩增等核酸检测方法的一步法配合使用，从根本上解决了多步核酸提取法带来的核酸丢失和污染问题以及无法真正实现核酸现场检测的问题。附图说明图1为利用本专利技术所述核酸释放剂提取核酸与其它核酸提取方法提取核酸的结果比较；图2为利用本专利技术所述核酸释放剂提取9例乙肝病毒血清样本中的核酸后进行荧光PCR扩增曲线图；图3为本专利技术所述方法测试的沙门氏菌培养物梯度稀释样本的荧光PCR扩增曲线图。具体实施方式本专利技术提供了一种核酸释放剂，所述核酸释放剂为液体制剂，所述核酸释放剂为液体制剂，所述核酸释放剂中，非离子型表面活性剂的体积百分含量为0.2～2％；海藻糖的质量体积百分含量为0.01～2％；蛋白酶K的质量体积浓度为0.1～5mg/ml；氯化钾的浓度为50～200mmol/L；异硫氰酸胍的浓度为20～100mmol/L；牛血清白蛋白的浓度为0.5～10mmol/L；乙二胺四乙酸的浓度为1～10mmol/L；Tris-HCl的浓度为0.2～5mmol/L；所述核酸释放剂还包括余量的无菌水。本专利技术中，所述核酸释放剂包括非离子型表面活性剂，所述非离子表面活性剂优选为CA-630类非离子表面活性剂，更优选为辛基苯基-聚乙烯二醇。本专利技术中，所述非离子型表面活性剂的体积百分含量为0.2～2％，优选为0.5～1.5％，更优选为0.8～1.2％；本专利技术对所述非离子型表面活性剂的来源没有特殊要求，常用常规市售产品即可。本专利技术中，所述非离子表面活性剂由于具有极性和非极性基团，能够很好的起到破坏细胞膜作用，将核酸从包膜蛋白中释放出来，同时上述浓度范围的非离子表面活性剂不会抑制后续核酸扩增反应。本专利技术中，所述核酸释放剂包括氯化钾，所述氯化钾的浓度为50～200mmol/L，优选为60～180mmol/L，更优选为100～150mmol/L。本专利技术对所述氯化钾的来源没有特殊限定，采用常规市售氯化钾即可，优选为市售分析纯。本专利技术中，所述氯化钾的作用为提供低盐环境，上述浓度范围的氯化钾能够增加核酸在溶液中的溶解度。本专利技术中，所述核酸释放剂包括异硫氰酸胍，所述异硫氰酸胍的浓度为20～100mmol/L，优选为30～90mmol/L，更优选为40～80mmol/L。本专利技术对所述异硫氰酸胍的来源没有特殊限定，采用本领域常规市售产品即可。本专利技术中所述异硫氰酸胍作为强力蛋白质变性剂，能迅速溶解蛋白质，导致细胞结构破碎，核蛋白由于其二级结构的被破坏、消失而迅速与核酸分离，促进核酸的有效释放。本专利技术中，所述核酸释放剂包括所述牛血清白蛋白，所述牛血清白蛋白的浓度为0.5～10mmol/L，优选为1～9mmol/L，更优选为3～7mmol/L。本专利技术对所述牛血清白蛋白的来源没有特殊限定，采用本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种核酸释放剂，其特征在于，所述核酸释放剂为液体制剂，所述核酸释放剂中，非离子型表面活性剂的体积百分含量为0.2～2％；海藻糖的质量体积百分含量为0.01～2％；蛋白酶K的质量体积浓度为0.1～5mg/ml；氯化钾的浓度为50～200mmol/L；异硫氰酸胍的浓度为20～100mmol/L；牛血清白蛋白的浓度为0.5～10mmol/L；乙二胺四乙酸的浓度为1～10mmol/L；Tris‑HCl的浓度为0.2～5mmol/L；所述核酸释放剂还包括余量的无菌水。

【技术特征摘要】
1.一种核酸释放剂，其特征在于，所述核酸释放剂为液体制剂，所述核酸释放剂中，非离子型表面活性剂的体积百分含量为0.2～2％；海藻糖的质量体积百分含量为0.01～2％；蛋白酶K的质量体积浓度为0.1～5mg/ml；氯化钾的浓度为50～200mmol/L；异硫氰酸胍的浓度为20～100mmol/L；牛血清白蛋白的浓度为0.5～10mmol/L；乙二胺四乙酸的浓度为1～10mmol/L；Tris-HCl的浓度为0.2～5mmol/L；所述核酸释放剂还包括余量的无菌水。2.根据权利要求1所述的核酸释放剂，其特征在于，所述核酸释放剂中，所述非离子型表面活性剂的体积百分含量为0.5～1％；所述海藻糖的质量体积百分含量为0.02～0.5％；所述蛋白酶K的质量体积浓度为0.5～4.5mg/ml；所述氯化钾的浓度为55～100mmol/L；所述异硫氰酸胍的浓度为25～60mmol/L；所述牛血清白蛋白的浓度为1～9mmol/L；所述乙二胺四乙酸的浓度为2～6mmol/L；所述Tris-HCl的浓度为0.3～3mmol/L。3.根据权利要求1所述的核酸释放剂，其特征在于，所述核酸释放剂中，所述非离子型表面活性剂的体积百分含量为0.3～1.5％；所述海藻糖的质量体积百分含量为0.1～1％；所述蛋白酶K的质量体积浓度为0.6～4mg/ml；所述氯化钾的浓度为60～80mmol/L；所述异硫氰酸胍的浓度为40～60mmol/L；所述牛血清白蛋白的浓度为3～10mmol/L；所述乙二胺四乙酸的浓度为...

【专利技术属性】
技术研发人员：周冬根，应清界，郭利川，汤赛君，王智宏，
申请(专利权)人：宁波奇天基因科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33