一种基于硅类介质微球超微量DNA提取纯化试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种基于硅类介质微球超微量DNA提取纯化试剂盒，包括有裂解、吸附、漂洗、洗脱四个部分，裂解部分主要针对除检材部分进行了优化，方便操作的同时最大限度地获得裂解产物，设计出离心管及配套的具有过滤功能的提篮；吸附部分的吸附增强剂，增加疏水作用，消除管壁静电效应，促进DNA和硅类介质微球表面基团作用，使得吸附效率大幅提高；洗脱部分的高效洗脱液，创新性地采用竞争洗脱原理，能够显著提高DNA洗脱效率，减少硅类介质微球表面DNA的残留。本案改良过的基于硅类介质微球超微量DNA提取纯化试剂盒，操作简单，提取的DNA得率高，纯度高、片段完整，综合以上特点尤其适合超微量生物检材DNA的提取，满足了日益提出的高检出率要求。

A Kit for Extraction and Purification of Ultrafine DNA Based on Silicon Medium Microspheres

The invention discloses a kit for extracting and purifying ultra-micro DNA based on silicon medium microspheres, which includes four parts: cracking, adsorption, rinsing and elution. The cracking part mainly optimizes the material removal part, achieves the cracking products at the same time, and designs centrifugal tube and matching basket with filtering function. Increasing hydrophobicity, eliminating wall electrostatic effect and promoting the surface group action of DNA and silicon microspheres can greatly improve the adsorption efficiency. The highly efficient eluent of elution part and innovative competitive elution principle can significantly improve the DNA elution efficiency and reduce the DNA residue on the surface of silicon microspheres. The improved DNA extraction and purification kit based on silica medium microspheres has the advantages of simple operation, high yield, high purity and complete fragments, which is especially suitable for the extraction of DNA from ultra-micro biological samples and meets the increasingly high detection rate requirements.

【技术实现步骤摘要】
一种基于硅类介质微球超微量DNA提取纯化试剂盒
本专利技术涉及一种试剂盒，具体涉及一种基于硅类介质微球超微量DNA提取纯化试剂盒。属于分子生物学

技术介绍
DNA提取纯化是分子生物学检测中非常重要的环节，核酸的得率及纯度直接关系到下游检测能否成功。常用核酸纯化方法一般都包括细胞裂解、去除与核酸结合的物质、沉淀核酸、去除盐类、有机溶剂等杂质、纯化分离DNA等步骤。常用方法主要是有机法、微珠吸附法、Chelex-100法和离心柱法，有机法步骤繁琐、耗时，并且用到氯仿、苯酚等毒性大的有机溶剂，对操作人员健康有一定的危害；Chelex-100采用液相纯化原理，利用加热细胞裂解后，螯合剂去除生物样品中杂质从而达到纯化的目的，操作简单，但是所提取的DNA纯度不够，不能满足超微量生物样品DNA纯化的要求；离心柱法虽不使用有机溶剂，但DNA得率不高，离心柱不可重复使用，提取单个样本价格昂贵。采用微珠吸附法的提取分离技术，无需接触氯仿、苯酚等毒性大的试剂且操作简便，短时间就能实现样本的快速、高质量的提取，是核酸提取的重要发展方向，具有传统提取方法无法比拟的优势。当核酸处在高浓度离液剂及低pH本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于硅类介质微球超微量DNA提取纯化试剂盒，包括裂解部分、吸附部分、漂洗部分和洗脱部分，其特征在于，所述裂解部分包括离心管及配套的提篮，在提篮的底部设有滤膜，该滤膜在不离心的情况下依靠张力阻挡水分渗透；所述吸附部分包括结合缓冲液、硅类介质微球悬浮液、吸附增强剂，硅类介质微球的表面至少含有硅羟基，吸附增强剂的溶剂为水，溶质包括：质量浓度3～10％质子或非质子溶剂，80～120μg/mL外源添加的DNA短片段扩增产物；所述洗脱部分包括高效洗脱液，高效洗脱液的溶剂为水，溶质包括：5～20mM的Tris‑HCl、0.5～2mM螯合剂、0.1～5mM多价阴离子，pH 8.0～9.0。

【技术特征摘要】
1.一种基于硅类介质微球超微量DNA提取纯化试剂盒，包括裂解部分、吸附部分、漂洗部分和洗脱部分，其特征在于，所述裂解部分包括离心管及配套的提篮，在提篮的底部设有滤膜，该滤膜在不离心的情况下依靠张力阻挡水分渗透；所述吸附部分包括结合缓冲液、硅类介质微球悬浮液、吸附增强剂，硅类介质微球的表面至少含有硅羟基，吸附增强剂的溶剂为水，溶质包括：质量浓度3～10％质子或非质子溶剂，80～120μg/mL外源添加的DNA短片段扩增产物；所述洗脱部分包括高效洗脱液，高效洗脱液的溶剂为水，溶质包括：5～20mM的Tris-HCl、0.5～2mM螯合剂、0.1～5mM多价阴离子，pH8.0～9.0。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述裂解部分还包括裂解液，裂解液的溶剂为水，溶质包括：5～50mM的Tris-HCl、0.5～3wt％表面活性剂、0.5～20mM螯合剂、0.5～1.5M盐酸胍、50～120mM的氯化钠和0.5～3mg/mL的蛋白酶K，pH7.2～8.5。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述结合缓冲液的溶剂为水，溶质包括：40～150mM的Tris-HCl、1～5wt％表面活性剂、5～6M的离液剂、10～50mM螯合剂和体积浓度20～35％的醇含量，pH5.2～6.0。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述离液剂选自盐酸胍、异硫氰酸胍、碘化钾、硫氰酸钾、高氯酸钠、氯化锂或其组合。5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述硅类介质微球悬浮液包括分散液和硅类介质微球，分...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶志鹏，郑卫国，焦海涛，杨海峰，夏子芳，陈林丽，郭育林，刘伟，
申请(专利权)人：海宁市公安局，上海锦博生物技术有限公司，无锡中德美联生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33