从甲醛固定的微量样品中提取并扩增DNA片段的方法技术

本发明专利技术提出了从甲醛固定的微量样品中提取并扩增DNA片段的方法，通过先去除甲醛，利用蛋白酶K和胰蛋白酶两种酶充分消解样品提取DNA，再通过PCR技术修复断裂的DNA片段，最终再以此为PCR模版扩增目的基因片段，最终建立了一个适用于甲醛固定后的微量样品，步骤清晰，DNA提取效率高，质量好的提取并扩增DNA的方法。与现有技术相比，本发明专利技术的有益效果是可在微量样品中较为有效地提取DNA，再利用PCR扩增目的片段，从而达到获取我们想要的目的基因的效果。

【技术实现步骤摘要】
从甲醛固定的微量样品中提取并扩增DNA片段的方法
本专利技术涉及生物
，涉及DNA提取和PCR扩增技术，具体地说是一种从甲醛固定后的微量样品中提取DNA并扩增DNA片段的方法的建立。
技术介绍
组织固定是一种常见的生物保存技术，它能防止细菌的腐蚀和组织的自溶，保存细胞固有的物质；能凝固或沉淀细胞内或组织液，糖原等，使细胞或组织基本上保持与生活时的物质一样，使组织硬化，便于切块。应用于固定试剂的种类较多，它们对于固定不同的组织成分起着不同的作用，根据Bencroft的分类法，将不同的固定剂分为四种类型：Ⅰ类：醛类，甲醛，戊二醛，多聚甲醛，丙烯醛，已二醛，丙二醛等；Ⅱ类：氧化剂类，四氧化锇（奥酸），高锰酸钾，重铬酸钾等；Ⅲ类：蛋白变性类，甲醇，乙醇，醋酸等；Ⅳ类：其他，氯化汞，苦味酸等。甲醛由于组织收缩较少,损伤少,保存固有物质好、固定均匀,穿透力强、能保存脂肪及脂类物质、成本较低等优点，被广泛应用于医学研究中组织标本的制备和科学研究中浮游生物的保存。甲醛固定样品DNA的常见提取方法有：酚氯仿抽提法、改良Trizol法以及试剂盒法。酚氯仿抽提法利用酚是蛋白质的变性剂，反复抽提，使蛋本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.从甲醛固定的微量样品中提取并扩增DNA片段的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1，去除甲醛固定的微量样品中的游离甲醛；S2，加入过量蛋白酶K、胰蛋白酶和缓冲液对甲醛固定的微量样品进行消化；S3，抽提甲醛固定的微量样品中的蛋白、脂肪等杂质；S4，加入糖原和异丙醇，使微量DNA与糖原颗粒结合后沉淀，离心获得DNA沉淀；S5，洗涤DNA沉淀，并使其溶于纯水中；S6，使用Taq酶对DNA进行断裂修复，获得更高质量的DNA;S7，以此DNA为模版，扩增目的基因片段。

【技术特征摘要】
1.从甲醛固定的微量样品中提取并扩增DNA片段的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1，去除甲醛固定的微量样品中的游离甲醛；S2，加入过量蛋白酶K、胰蛋白酶和缓冲液对甲醛固定的微量样品进行消化；S3，抽提甲醛固定的微量样品中的蛋白、脂肪等杂质；S4，加入糖原和异丙醇，使微量DNA与糖原颗粒结合后沉淀，离心获得DNA沉淀；S5，洗涤DNA沉淀，并使其溶于纯水中；S6，使用Taq酶对DNA进行断裂修复，获得更高质量的DNA;S7，以此DNA为模版，扩增目的基因片段。2.根据权利要求1所述的从甲醛固定的微量样品中提取并扩增DNA片段的方法，其特征在于，S1中，将甲醛固定的微量样品经反复水洗、离心步骤从而去除游离甲醛。3.根据权利要求1所述的从甲醛固定...

【专利技术属性】
技术研发人员：张根，张霞，徐锦前，
申请(专利权)人：深圳金普迈生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44