The invention discloses a fast nucleic acid extraction method, which comprises the following steps: first, pyrolysis nucleic acid sample: adding the sample containing nucleic acid into the pyrolysis solution to form nucleic acid pyrolysis solution; second, adsorbing nucleic acid: adding the carrier into the nucleic acid pyrolysis solution to obtain the carrier adsorbing nucleic acid; third, removing impurities: adsorbing the carrier adsorbing nucleic acid in the rinse solution; In the process of rinsing, impurities except nucleic acid are removed; Step 4: Amplification reaction: the carrier adsorbed nucleic acid after rinsing is directly added to the nucleic acid amplification system for amplification reaction; the carrier is cellulose filter paper; The invention provides a simple, fast and cellulose filter paper-based carrier for extracting nucleic acid, which is suitable for polymerase chain reaction amplification and recombinant enzyme polymerase isothermal amplification. Isonucleic acid amplification technology, suitable for operating at room temperature, suitable for biological samples from various sources, can directly add cellulose filter paper containing nucleic acid into the nucleic acid amplification system for amplification reaction, the whole process is time-consuming.
【技术实现步骤摘要】
一种快速核酸提取方法
本专利技术涉及核酸提取领域,特别涉及一种快速核酸提取方法。
技术介绍
对于利用核酸扩增技术进行分子诊断的主要挑战是扩增前含核酸材料的预处理以及繁杂的核酸提取步骤。目前广泛使用的基于二氧化硅和基于磁珠的技术存在着诸多缺陷,包括效率过低(≤10%);还有需要针对特定靶标类型进行优化,造成一种样品类型的提取过程通常与其它样品类型不相容;而利用酚氯仿的方法虽然回收率高,但是由于提取液组分的毒性高而限制了其使用范围;基于去污剂的方法溶解过程简单,但需要进行高温变性(95℃)处理,另外由于反转录酶不是热稳定的,因此不适用于单步骤RT-PCR。重要的是,现行的所有方法均需要进行反复的离心,提取步骤繁杂、耗费时间长、需要特定的设备。本申请中我们描述了一种避免此提取过程复杂性的方法,在简单、快速、基于纤维素滤纸的系统中提取足量的核酸,适用于PCR、RPA等核酸扩增技术的使用,所述系统在室温运行,适用于各种来源的生物样品,并且可以将载有核酸的纤维素滤纸直接加入核酸扩增体系中进行扩增反应,整个过程小于1分钟。
技术实现思路
专利技术的目的在于提供一种快速核酸提取方法, ...
【技术保护点】
1.一种快速核酸提取方法,其特征在于:该方法包括以下步骤:步骤一、裂解核酸样品:将含有核酸的样品加入裂解液中,形成核酸裂解液;步骤二、吸附核酸:将载体加入所述核酸裂解液中,得到吸附核酸的载体;步骤三、除去杂质:将吸附了核酸的载体在漂洗液中漂洗,除去除核酸外的杂质;步骤四、扩增反应:将漂洗后的吸附有核酸的载体直接加入核酸扩增体系中进行扩增反应;所述载体为纤维素滤纸。
【技术特征摘要】
1.一种快速核酸提取方法,其特征在于:该方法包括以下步骤:步骤一、裂解核酸样品:将含有核酸的样品加入裂解液中,形成核酸裂解液;步骤二、吸附核酸:将载体加入所述核酸裂解液中,得到吸附核酸的载体;步骤三、除去杂质:将吸附了核酸的载体在漂洗液中漂洗,除去除核酸外的杂质;步骤四、扩增反应:将漂洗后的吸附有核酸的载体直接加入核酸扩增体系中进行扩增反应;所述载体为纤维素滤纸。2.根据权利要求1所述的一种快速核酸提取方法,其特征在于:所述纤维素滤纸的形状为圆形或/和多边形,所述纤维素滤纸的面积大小不超过9mm2。3.根据权利要求1所述的一种快速核酸提取方法,其特征在于:所述裂解液包括盐酸胍、异硫氰酸胍、Tris、Tween20、NaCl、TritonX-100、EDTA、PVP、柠檬酸钠、月桂肌酸钠以及β巯基乙醇中的至少3种,其中Tris的PH值为8.0。4.根据权利要求3所述的一种快速核酸提取方法,其特征在于:所述裂解液包括1.5M盐酸胍、4M异硫氰酸胍、50mMTris、1%Tween20、100mM-150mMNaCl、0.5%TritonX-100、5mMEDTA、2%PVP、25mM柠檬酸钠、0.5%...
【专利技术属性】
技术研发人员:李博安,张睿,
申请(专利权)人:博迪泰厦门生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:福建,35
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