一种尿液游离DNA提取试剂盒及提取方法技术

本发明专利技术涉及一种尿液游离DNA提取试剂盒，包括裂解液、洗涤液A、洗涤液B、洗脱液和羟基磁珠，裂解液包括胍盐、金属螯合剂、表面活性剂、醇类、Tris‑HCl和氯化钠，洗涤液A包括胍盐、金属螯合剂、表面活性剂、乙醇和Tris‑HCl,乙醇的体积浓度为30％～40％，洗涤液B包括金属螯合剂、表面活性剂、乙醇和Tris‑HCl，乙醇的体积浓度为75％～85％。本发明专利技术还提供了一种利用上述试剂盒进行尿液游离DNA提取的方法。本发明专利技术提供的试剂盒对于尿液中游离DNA的提取效率高，且选择性提取100bp以上的核酸片段。

A Kit for Extracting Free DNA from Urine and Its Extraction Method

The present invention relates to a urine free DNA extraction kit, which includes pyrolysis solution, detergent A, detergent B, eluent and hydroxyl magnetic beads. The pyrolysis solution includes guanidine salt, metal chelating agent, surfactant, alcohol, Tris HCl and sodium chloride. The detergent A includes guanidine salt, metal chelating agent, surfactant, ethanol and Tris HCl. The volume concentration of ethanol is 30%-40%, and the detergent solution is 30%-40%. B includes metal chelating agent, surfactant, ethanol and Tris HCl. The volume concentration of ethanol is 75%-85%. The invention also provides a method for extracting urine free DNA by using the above kit. The kit provided by the invention has high extraction efficiency for free DNA in urine, and selectively extracts more than 100 bp nucleic acid fragments.

【技术实现步骤摘要】
一种尿液游离DNA提取试剂盒及提取方法
本专利技术涉及核酸提取领域，具体涉及一种尿液中游离DNA提取试剂盒提取试剂盒及提取方法。
技术介绍
基于尿液中游离DNA的液体活检正在被广泛研究，与血浆液体活检相比，尿液样本优势明显。首先，采样方便，不需要去专门的机构，在家即可完成，其次，是真正意义上的无创，不需要任何侵入采样；最后，样本量大，正常人晨尿一般在150mL以上。但是，相对而言，尿液样本会比较复杂，核酸酶含量更高，代谢物质更多，pH范围波动较大。正常人的尿液中游离DNA的来源主要是膀胱和尿道脱落的上皮细胞以及尿液中的少量白细胞破裂后被尿液中核酸酶降解而来，而对有疾病的人，其尿液中游离DNA的来源除上述外，还会有病灶部位凋亡和坏死的细胞进入尿液。在2015年，BryzgunovaOE的综述文献报道，24小时内大约有3×106个膀胱和尿道上皮细胞进入尿液，且尿液中核酸酶的活性高，核酸酶I(DNaseI)在尿液中的活性是血浆中的100倍以上，血浆中的游离DNA也能通过肾脏过滤进入尿液，在多种类型的尿液样本中均有游离DNA的相关报道，在怀有男胎的孕妇尿液样本中检测到Y染色体的存在；胰腺癌和本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种尿液游离DNA提取试剂盒，其特征在于，包括裂解液、洗涤液A、洗涤液B、洗脱液和羟基磁珠；所述裂解液包括胍盐、金属螯合剂、表面活性剂、醇类、Tris‑HCl和氯化钠；所述洗涤液A包括胍盐、金属螯合剂、表面活性剂、乙醇和Tris‑HCl，所述乙醇的体积浓度为30％～40％；所述洗涤液B包括金属螯合剂、表面活性剂、乙醇和Tris‑HCl，所述乙醇的体积浓度为75％～85％。

【技术特征摘要】
1.一种尿液游离DNA提取试剂盒，其特征在于，包括裂解液、洗涤液A、洗涤液B、洗脱液和羟基磁珠；所述裂解液包括胍盐、金属螯合剂、表面活性剂、醇类、Tris-HCl和氯化钠；所述洗涤液A包括胍盐、金属螯合剂、表面活性剂、乙醇和Tris-HCl，所述乙醇的体积浓度为30％～40％；所述洗涤液B包括金属螯合剂、表面活性剂、乙醇和Tris-HCl，所述乙醇的体积浓度为75％～85％。2.根据权利要求1所述的一种尿中游离DNA提取试剂盒，其特征在于，所述胍盐选自盐酸胍和异硫氰酸胍中的一种或两种，所述金属螯合剂选自乙二胺四乙酸、乙二胺四乙酸二钠和乙二胺四乙酸二钾中的一种或多种；所述表面活性剂选自TritonX-100、Tween-20、NP-40、脱氧胆酸钠和十二烷基硫酸钠中的一种或多种，所述醇类为乙醇和异丙醇中的任一种或两种。3.根据权利要求2所述的一种尿液游离DNA提取试剂盒，其特征在于，所述胍盐为异硫氰酸胍，所述金属螯合剂为乙二胺四乙酸，所述表面活性剂为TritonX-100，所述醇类为异丙醇。4.根据权利要求1所述的一种尿液游离DNA提取试剂盒，其特征在于，所述裂解液中胍盐、金属螯合剂、表面活性剂、醇类、Tris-HCl和氯化钠的工作浓度分别为3～5M、20～30mM、4％～6％(v/v)、30％～50％(v/v)、40～60mM和90～110mM，所述裂解液的pH值为7.0～8.0；所述洗涤液A中胍盐、金属螯合剂、表面活性剂和Tris-HCl的工作浓度分别为2.5～3.5M、0.5～1.5mM、0.8％～1.2％(v/v)和8～12mM，所述洗涤液A的pH值为7.0～8.0；所述洗涤液B中金属螯合剂、表面活性剂和Tris-HCl的工作浓度分别为0.5～1.5mM、0.08％～0.12％(v/v)和8～12mM，所述洗涤液B的pH值为7.0～8.0。5.根据权利要求1所述的一种尿液游离DNA提取试剂盒，其特征在于，所述洗脱液中含有0.4～0.6mM的ED...

【专利技术属性】
技术研发人员：王煜，李佩，洪梅，罗喜鹏，王龙，周甘霖，张青，
申请(专利权)人：王煜，
类型：发明
国别省市：湖南,43