一种悬钩子属植物总RNA的快速提取方法技术

本发明专利技术公开了一种悬钩子属植物总RNA的快速提取方法，取少量悬钩子属植物材料，液氮冷冻下研磨成粉，经过可选的去糖、离心步骤，或直接加入碱性细胞裂解液，进行温浴裂解；完成后通过酚‑弱酸‑氯仿抽提，离心去除蛋白以及绝大部分基因组DNA；上清液中加入醇进行沉淀；离心收集RNA沉淀，经过乙醇洗涤、风干后用DEPC灭菌水溶解，‑80℃保存。与已有CTAB法相比，本发明专利技术可以快速提取悬钩子属植物各器官组织总RNA，用时短，在3小时之内可以轻松完成，而已有方法需要12小时以上。为达到去除蛋白质、多糖以及基因组DNA的目的，传统方法需经过2～3轮抽提及2轮以上沉淀，操作步骤繁琐，本方法只进行1轮抽提及1轮沉淀，简化了操作流程。

A Rapid Extraction Method of Total RNA from Rubus

The invention discloses a rapid extraction method for total RNA of Rubus plants, which takes a small amount of Rubus plant materials, grinds them into powder under liquid nitrogen freezing, and then decomposes them in warm bath through optional sugar removal and centrifugation steps or directly adding alkaline cell lysate; after completion, extracts them by phenol, weak acid, chloroform, removes proteins by centrifugation and adds most genomic DNA to the supernatant; RNA precipitation was collected by centrifugation, washed by ethanol and dried by air, then dissolved in DEPC sterilized water and stored at 80 C. Compared with the existing CTAB method, the present method can extract total RNA from various organs and tissues of Rubus quickly and easily within 3 hours, while the existing method needs more than 12 hours. In order to remove proteins, polysaccharides and genomic DNA, the traditional method needs 2 to 3 rounds of extraction and more than 2 rounds of precipitation. The operation steps are tedious. This method only carries out 1 round of extraction and 1 round of precipitation, which simplifies the operation process.

【技术实现步骤摘要】
一种悬钩子属植物总RNA的快速提取方法
本专利技术涉及植物分子生物学领域，具体涉及一种悬钩子属植物总RNA的快速提取方法。
技术介绍
获得高质量总RNA是进行分子生物学研究如基因表达水平研究、基因操作如RNA干扰、转基因等下游研究的前提条件。悬钩子属植物的树莓、黑刺莓中富含有花青素苷、原花青素等多酚类次生代谢产物，这些物质给总RNA提取带来了重重困难：酚类化合物极易被氧化成褐色物质，然后与RNA不可逆地结合，导致RNA活性丧失，或形成不溶复合物导致在用氯仿抽提时RNA的大量丢失。Trizol试剂盒在应对该类植物总RNA提取时显得无能为力，而传统的总RNA提取方法如CTAB、SDS等需要较多的植物材料，且需要使用多步抽提来去除多糖、蛋白和基因组DNA。目前使用最多的方法是在植物细胞破碎后，使用LiCl进行RNA的选择性沉淀，达到去除基因组DNA或多糖的目的。但该方法最大的缺点是耗时太长，一般都选择沉淀过夜。若改成醇沉淀，DNA污染特别严重，需要进一步使用DNase处理，然后经过酚-氯仿抽提以灭活DNase，结果造成RNA的大量损失。另外，LiCl沉淀后的洗脱过程要求严格，因为残留的Li本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种悬钩子属植物总RNA的快速提取方法，其特征在于：它包括以下操作步骤：1)取2ml离心管，向离心管中加入700～1000μl去糖缓冲液，并加入5～15μlβ‑巯基乙醇，于‑20℃预冷5～10min；2)取新鲜植物材料或经液氮速冻后‑80℃保存的植物材料0.1～0.15g，加入0.1g交联聚乙烯基吡咯烷酮，在液氮冷冻条件下研磨成粉状，迅速转移至步骤1)的离心管中，温柔上下颠倒混匀后于冰上静置10min；3)在4℃下按照3200×g离心5～10min；4)彻底去除步骤3)离心所得上清液，向沉淀中加入700～1000μl65℃预热的细胞裂解液，涡旋1min，于55～65℃保温20～30min；...

【技术特征摘要】
1.一种悬钩子属植物总RNA的快速提取方法，其特征在于：它包括以下操作步骤：1)取2ml离心管，向离心管中加入700～1000μl去糖缓冲液，并加入5～15μlβ-巯基乙醇，于-20℃预冷5～10min；2)取新鲜植物材料或经液氮速冻后-80℃保存的植物材料0.1～0.15g，加入0.1g交联聚乙烯基吡咯烷酮，在液氮冷冻条件下研磨成粉状，迅速转移至步骤1)的离心管中，温柔上下颠倒混匀后于冰上静置10min；3)在4℃下按照3200×g离心5～10min；4)彻底去除步骤3)离心所得上清液，向沉淀中加入700～1000μl65℃预热的细胞裂解液，涡旋1min，于55～65℃保温20～30min；5)待步骤4)中的混合液冷却至室温后，按顺序加入细胞裂解液等体积的水饱和酚，1/80-1/50裂解液体积的pH调节剂，1/5裂解缓冲液体积的氯仿，剧烈震荡2min；6)在4℃下按照16000×g离心5～10min；7)将步骤6)离心所得上清液转入另一离心管，向管中加入上适量核酸沉淀剂，于-20℃静置30min以上，在4℃下按照16000×g离心10min后弃上清液，保留沉淀；8)将步骤7)离心所得沉淀用体积分数为70～75％乙醇洗涤后室温风干，用DEPC处理水溶解后-80℃保存。2.根据权利要求1所述悬钩子属植物...

【专利技术属性】
技术研发人员：周琪，
申请(专利权)人：周琪，
类型：发明
国别省市：四川,51