磁珠法提取粪便微生物基因组的试剂盒及提取方法技术

本发明专利技术公开了一种磁珠法提取粪便微生物基因组的试剂盒及提取方法，属于生物技术领域，采用的技术方案是，一种磁珠法提取粪便微生物基因组的试剂盒，包括裂解液、杂质去除试剂、基因组吸附剂及洗脱剂，以缓冲液A、B和C组合裂解微生物，以独特的沉淀液去除腐殖酸等杂质，再以磁珠吸附基因组DNA，进一步以特有的缓冲液G及缓冲液H去除杂蛋白及盐离子，最后洗脱得到纯化的基因组DNA的技术方案，实现了高效足量、高质量提取粪便微生物的基因组DNA，实验步骤简便、快速，安全无污染，提取程序用时大大缩短，既可手工操作也可用于自动化平台，广泛适合客户快速、有效、经济的提取动物粪便基因组，应用前景广阔。

【技术实现步骤摘要】
磁珠法提取粪便微生物基因组的试剂盒及提取方法
本专利技术涉及生物
，具体涉及一种磁珠法提取粪便微生物基因组的试剂盒及提取方法。
技术介绍
人和动物肠道内存在种类复杂、数量庞大而状态相对稳定的微生物菌群，肠道中微生物的数量是机体细胞的10倍，微生物在粪便干重中占比高达60％。肠道内微生物数量及种类与机体的健康、疾病密切相关，因此研究肠道内微生物分布成为热点之一。2010年，欧盟资助“人类肠道宏基因组计划”研究人类肠道中微生物菌群，旨在研究肠道内微生物数量及种类与糖尿病，肥胖等疾病的相关性，为大众健康的日常生活调理提供建议，为患者治疗方案提供理论依据，还能预测个体的健康情况。研究发现，人类肠道微生物具有多样性，包括细菌，病毒，真核生物等，对于每个机体，肠道菌群差异性很大，即使是孪生姐妹，肠道内细菌的相似性也低于50％，病毒的相似性则更低。健康人体微生物菌群相对稳定，除新生婴儿肠道内微生物不断变化外，成年人肠道微生物在一年内基本不变，这些微生物形成一个极其复杂的微生态系统，对动物健康有着非常重要的影响。而饮食习惯，环境变化以及疾病都可能导致机体微生物菌群结构发生变化，由高糖，高脂的饮本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.磁珠法提取粪便微生物基因组的试剂盒，包括裂解液、杂质去除试剂、基因组吸附剂及洗脱剂，其特征在于，所述裂解液中包括如下试剂，缓冲液A：组成为25‑75mM的Tris‑HCl、20‑50mM的NaCl和100‑200mM的异硫氰酸胍的水溶液；缓冲液B：10‑20％SDS；缓冲液C：50‑100mg/mL的蛋白酶K。

【技术特征摘要】
1.磁珠法提取粪便微生物基因组的试剂盒，包括裂解液、杂质去除试剂、基因组吸附剂及洗脱剂，其特征在于，所述裂解液中包括如下试剂，缓冲液A：组成为25-75mM的Tris-HCl、20-50mM的NaCl和100-200mM的异硫氰酸胍的水溶液；缓冲液B：10-20％SDS；缓冲液C：50-100mg/mL的蛋白酶K。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述杂质去除试剂中包括缓冲液D：组成为100-200μM的硫酸铝铵和3-5M的醋酸钾的水溶液。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述基因组吸附剂中包括：缓冲液E：组成为3-6M的盐酸胍和50-100mM的Tris-HCl的水溶液；缓冲液F：50-100mg/mL的磁珠水溶液。4.根据权利要求1-3任一所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包括洗涤剂，所述洗涤剂包括缓冲液G和/或缓冲液H，缓冲液G组成为200-300mM的NaCl和10-20mMTris-HCl的水溶液；缓冲液H为10-50mM的Tris-HCl。5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述洗脱剂为缓冲液I，缓冲液I为15-30mM的Tris-HCl，所述基因组吸附剂中包括硅羟基磁珠。6.磁珠法提取粪便微生物基因组的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：①粪便中微生物的裂解：将粪便样本0.25-0.5g置于2mL离心管中，加入0.25-0.5g固体颗粒物、500-1000μL缓冲液A、50-100μL缓冲液B和10-20μL缓冲液C，振荡2-20min至样本混匀，得裂解混合物；所述缓冲液A组成为25-75mM的Tris-HCl、20-50mM的NaCl和100-200mM的异硫氰酸胍的水溶液；缓冲液B为10-20％SDS；缓冲液C为50-100mg/mL的蛋白酶K；②去除杂质：将裂解混合物以10000-14000rpm离心30s-3min，转移上清至新的2mL离心管，加入上清体积1/10-1/5的杂质去除试剂，混匀后置于冰上3-8min，10000-14000rpm离心2-5min，转移上清至新的2mL离心管，得一次纯化基因组溶液；③基因组吸附：向一次纯化基因组溶...

【专利技术属性】
技术研发人员：王金辉，
申请(专利权)人：天根生化科技北京有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11