用于直接对全血样品测量分析物的血浆浓度的方法技术

一种测量全血样品中分析物的量的方法包括：-测量所述全血样品的血球容量计水平；-测量直接在所述全血样品中的分析物的量；以及-根据以下关系，计算矫正的分析物的量：DP＝Pa(DST，DH)，其中，Pa是所述矫正的分析物的量，DST是所测量的分析物的量，DH是所测量的血球容量计水平，以及Pa是具有次数大于或等于1的非常数多项式，所述非常数多项式的不确定的值是所述测量的分析物的量DST和所述测量的血球容量计水平DH，以及所述非常数多项式的多项式系数依赖于所述分析物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及生物样品分析，以及更具体地涉及血液样品中分析物的浓度或量的测 量。本专利技术特别地发现ELISA、ELFA、或免疫捕获类型的免疫分析技术测量中的应用。
技术介绍
通常，对感兴趣的分析物和对可能包含所述感兴趣的分析物的全血样品中其浓度 的研究包括，第一，从红细胞分离血浆，特别地，通过离心法，以及然后测量血浆中的分析物 浓度。 "全血"对应于包括具有所有其组分以及因而特别地血浆和红细胞的血液的生物 样品。它可以例如是没有任何变换的从人或动物采样的血液，或已被添加辅药（例如，抗凝 血剂）的相同血液。 在浓度测量方法之中，已知包括根据血液样品中分析物的数量来修改可测量的性 质（例如，光学的、电的、化学的、PH或酶性质）的技术，特别地，所谓直接的、间接的和竞争 的ELISA("酶联免疫吸附法"）、ELFA("酶联荧光测定"）和免疫捕获技术。 图1示意地图示直接的ELISA测量的主要步骤，也称为"夹心（sandwich) "ELISA， 因为它涉及用于结合分析物的两个搭档，其中，例如分析物是抗原以及两个结合搭档是抗 体，每个包括彼此不同的位或表位，以及每个能够结合到提供有补充位的所述抗原。ELISA 测量包括，在它的最简单版本中： 例如用分析物的第一结合搭档的层来涂载体的表面（例如，井），该分析物期望 被检测或其浓度期望被测量，其中第一结合搭档展现对分析物补充的位（图1A);将血液样品（例如，源自全血样品的离心的血浆）注到井中（图1B)，以便存在 于血浆中的分析物与固定到井壁的第一结合搭档配合（图1C); 执行井的第一次冲洗以去除正在进行的分析的不感兴趣的成分，例如未被研究 的抗体和抗原（图1D); 将分析物的第二结合搭档注到井中，每个提供有（i)对用第一结合搭档固定的 分析物的自由位中的一个补充的以及与第一结合搭档的补充位不同的位，以及（ii)具有 能够催化基质水解的酶功能的组分，该基质根据催化的氢的数量来改变颜色（图1E)。包含 酶功能的这样的第二结合搭档称为"配对"。 执行井的第二次冲洗以去除过量的配对（图1F); 将通过配对的酶功能可降解的基质添加到井中以及通过光谱测定法来测量井 中包含的介质的色度或光学密度（图1G)。 因为色度直接依赖于通过固定到载体的壁的第一结合搭档固定的分析物的数量 或量，所以该光学性质的测量是存在于血浆样品中的分析物的总的数量的间接测量，以及 因而其中分析物浓度的间接测量（已知样品的体积）。然后，用预定的数学模型，将测量的 色度变换成量和/或浓度值。"量"因而意指样品中分析物的数量。"浓度"意指量除以对 其执行测量的样品的体积。 "竞争"ELISA涉及分析物的单个结合搭档以及与要分析的分析物竞争的化合物， 该单个结合搭档展现对分析物的位中的一个补充的位。这两个成分中的一个然后具有能够 催化基质水解的酶功能，该基质根据催化的氢的数量来改变颜色。量以及因而浓度因此与 读色度成反比。 除了由酶功能催化的基质生成例如由荧光计测量的荧光的事实外，ELFA测量类似 于ELISA测量。 所有这些测量技术提供这样的成分，它们仅固定具有其浓度期望被测量的分析 物。尽管仅后者被特别地固定，然而能观察的是，样品的特性基本上影响量测量，特别地当 由于诊断有关的时间约束而反应时间降低时。因而，当直接对全血样品测量时，测量的量小 于直接对血浆样品测量的量，特别地由于血球容量计的存在，其具有基体效应。 如本身已知的，血球容量计水平或血球容量计对应于与全血体积有关的红细胞占 据的相对体积。使用全血样品代替血浆样品作为用于诊断的样品的免疫分析仪器的某些制 造商提供了根据下式矫正全血样品中测量的分析物量： 其中，DP是矫正的分析物量，DST是直接对全血样品测量的分析物量，DH是全血样 品的血球容量计水平的测量。应该注意的是，关系（1)也可采用测量的和矫正的分析物浓 度代替对应的量来应用。然而，类似于简单比例法的这样的矫正不提供良好的结果。 迄今，分析物的量以及因而其浓度因此主要对血浆确定，该测量是考虑为可靠和 可复制的仅一个。另外，这样的测量具有独立于血球容量计的优点，该血球容量计因对象不 同而可变。 现在，血浆的获得要求先前的离心法步骤，以及因而时间和特定的设备。时间可能 不但是医疗诊断情况下的重要参数，特别地当存在对对象生命的威胁时，而且这另外假设 负责大量分析的实验室中大数量的离心机。
技术实现思路
本专利技术旨在提供以足够水平的精度直接对全血样品测量分析物的量以及因而浓 度的方法，因而特别地使得能够避免先前的离心步骤，同时提供独立于血球容量计水平的 测量。 为了该目的，本专利技术旨在一种测量全血样品中分析物的量的方法，其包括： 测量所述全血样品的血球容量计水平； 直接测量在所述全血样品中的分析物量；以及 根据以下关系，计算矫正的分析物量： DP=Pa(DST,Dh) 其中，DP是所述矫正的分析物量，DST是所测量的分析物量，DH是所测量的血球容 量计水平，以及匕是具有次数大于或等于1的非常数多项式，所述非常数多项式使所述测 量的分析物量DST和所述测量的血球容量计水平DH为不确定的值，以及使它的多项式系数 依赖于所述分析物。 -旦分析物量已被测量得到，后者通常直接通过例如测量仪器转化成样品中存在 的分析物的浓度，因为样品的体积是固定的和已知的。因为将浓度值特别地用于通过将测 量的浓度与预定义的参考浓度值比较来实施活体外诊断（其表征诊断），本专利技术还旨在一 种测量全血样品中分析物浓度的方法，其包括： 测量所述全血样品的血球容量计水平； 直接测量在所述全血样品中的分析物量，以及基于测试样品的体积来将它变换 成浓度；以及 根据以下关系，计算矫正的分析物浓度： CP=Pa(CST,Dh) 其中，CP是所述矫正的分析物浓度，CST是从所测量的量和从样品体积计算的分析 物浓度，DH是所测量的血球容量计水平，以及？3是具有次数大于或等于1的非常数多项式， 所述非常数多项式使从所述测量的量得到的分析物浓度CST和所述测量的血球容量计水平 DH为不确定的值，以及使它的多项式系数依赖于所述分析物。 换句话说，专利技术人已观察到，可能的是，用特别地具有次数大于或等于1的非常数 多项式来基本上矫正关于直接对全血样品测量的量/浓度的误差，该非常数多项式使全血 样品中测量的血球容量计水平和量/浓度为未知的不确定的值或变量。根据本专利技术的矫正 特别地使得能够获得相对测量误差，该相对测量误差关于通常直接对获得的血浆样品执行 的测量和经常包括在大范围的量/浓度内的+/-10%内。该矫正的量/浓度（具有的值足 以接近通过直接对血浆样品执行测量获得的值）因而能够用于例如执行活体外诊断，以便 不再需要实行先前的离心步骤。 根据实施例，多项式Pa包括测量的分析物量DST乘测量的血球容量计水平DH的乘 积DstXDh，或测量的分析物量CST乘测量的血球容量计水平DH的乘积CstXDh。 更特别地，矫正的分析物量根据以下关系来计算： DP =a〇+a!XDST+a2XDH+a12XDSTXDH 其中，a。、a!、a2和a12是依赖于所述分析物的预定系数。 换句话说，涉及项DST和DH之间的交互（即，第一次项DSTXDH)的多项式特别本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种测量全血样品中分析物的量的方法，其特征在于，它包括：■测量所述全血样品的血球容量计水平；■直接测量在所述全血样品中的分析物量；以及■根据以下关系，计算矫正的分析物量：DP＝Pa(DST，DH)其中，DP是所述矫正的分析物量，DST是所测量的分析物量，DH是所测量的血球容量计水平，以及Pa是具有次数大于或等于1的非常数多项式，所述非常数多项式使所述测量的分析物量DST和所述测量的血球容量计水平DH为不确定的值，以及使它的多项式系数依赖于所述分析物。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：西尔维·舍克勒，洛尔·马里耶，奥雷莉·托莱，
申请(专利权)人：生物梅里埃公司，
类型：发明
国别省市：法国;FR